Développement de lignée cellulaire sur-mesure

Donnez un maximum de valeur à votre projet de lignée cellulaire stable !

Rendements records dépassant 10 g/L
Pré-analyse développabilité par IA
Vraie preuve de monoclonalité
Lignées sans IP à acquérir

Vous devez produire des anticorps à l’échelle du gramme ou plus ? Que ce soit pour des applications thérapeutiques, diagnostiques ou vétérinaires, la création d’une lignée cellulaire stable est sans doute l’une des étapes les plus critiques et onéreuses du processus. Pourtant, elle est déterminante car elle impacte directement le coût et la qualité de votre biomolécule lors de la production à grande échelle. Chez ProteoGenix, nous comprenons ces enjeux, c’est pourquoi rien n’a été laissé au hasard ! Notre service de génération de lignée stable est méticuleusement conçu pour maximiser à la fois les rendements et la qualité finale de votre produit, tout en réduisant le temps de développement et le risque associé.

Pourquoi choisir ProteoGenix
pour la génération de lignée cellulaire stable ?

Aucun risque

Grâce aux nombreux jalons inclus dans notre processus, vous avez la possibilité de poursuivre ou d’arrêter le projet selon des données claires. Vous ne continuez que si vous êtes satisfait.

Vision long terme

Nous proposons l’intégration d’une évaluation de “developability” de votre séquence. Elle tient compte de facteurs tels que la présence de séquences à risque, l’analyse des CDR, la solubilité, les risques d’agrégation afin d’éviter toute adaptation future du process de purification.

Haut rendement

Sur plus d’une centaine de projets, nous atteignons systématiquement des rendements dépassant le g/L.

Rendement garanti

Réduire le risque signifie aussi garantir la visibilité. Dès le lancement du projet, nous étudions sa faisabilité et vous fournissons une estimation de rendement garantie.

Preuve réelle de monoclonalité, pas seulement une probabilité

Grâce à la technologie VIPS^TM, nous pouvons vous fournir une vraie preuve de monoclonalité, un élément essentiel pour la soumission sereine de votre IND.

Expertise reconnue

Avec plus de 100 projets aboutis en lignée cellulaire stable, 1 500 protéines et 5 000 anticorps produits, faites confiance à notre expertise en expression de biomolécules.

Processus personnalisé

Vous échangez avec un chef de projet dédié, titulaire d’un doctorat, qui saura vous guider dans vos choix stratégiques.

Des lignées libres de droit

ProteoGenix a sélectionné des lignées cellulaires libres de droits et possède sa propre lignée prête à l’emploi, garantissant votre liberté d’exploitation future.

Testez les anticorps produits

Pour vous garantir un produit final optimal, vous pourrez tester les anticorps produits directement dans votre laboratoire !

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OUTIL D’AIDE À LA DÉCISION GRATUIT

Vous cherchez le partenaire idéal pour générer vos lignées stables ?
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sélectionner le meilleur partenaire selon vos besoins

Plus d’infos

Notre processus de génération de lignée cellulaire stable

- Analyse des CDRs (régions déterminantes de complémentarité)
- Identification des séquences à risque (problèmes potentiels de dégradation ou d’instabilité)
- Évaluation de la solubilité
- Analyse du risque d’agrégation
Objectif : Proposer des séquences optimisées exemptes de risques de manufacturabilité tout en conservant les propriétés clés de l’anticorps (affinité, spécificité, degré d’humanisation).
- Production des séquences optimisées
- Caractérisation pour sélectionner la meilleure séquence pour la génération de la lignée stable, possibilité d’effectuer les tests au laboratoire du client.
- Caractérisation incluse : intégrité, pureté et agrégation de l’anticorps, caractérisation de l’interaction antigène-anticorps, détermination de Kd, masse intacte, analyse du profil de glycosylation.
GO/NO GO : À l’issue de cette étape, le client est informé de la faisabilité. Sur nos recommandations, il décide de poursuivre vers la génération du pool stable ou d’arrêter.
- Préparation et linéarisation du plasmide
- Transfection dans la lignée cellulaire choisie
- Génération des pools stables par sélection MSX/GS
- Sélection des meilleurs pools stables
- Contrôle du taux d’endotoxines
- Analyse pureté et agrégation
- Évaluation de la thermostabilité
- Caractérisation de l’interaction antigène-anticorps
- Détermination de Kd antigène-anticorps
GO/NO GO : Décision de poursuite sur les résultats.
- Isolement cellulaire et évaluation de la monoclonalité via VIPS (Visual Inspection Plate Screening)
- Suivi de la croissance cellulaire par imagerie
- Screening ELISA des monoclones
- Sélection et expansion des 10 meilleurs monoclones avec évaluation de la productivité
GO/NO GO : Décision de poursuite ou d’arrêt.
- Contrôle qualité final
- Préparation de la banque cellulaire de recherche (RCB)

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Spécifications de notre service de génération de lignée stable

Étape	Contenu	Délai	Livrables
Synthèse génique et clonage	Synthèse des séquences codantes Sous-clonage dans un vecteur d’expression	~1 semaine	Plasmides clonés Séquences d’ADN des régions codantes
Évaluation de l’expression transitoire	Amplification des plasmides Transfection de cellules XtenCHO Expression et purification à petite échelle	~2 semaines	Rapport de rendement et de propriétés biochimiques Échantillon purifié (optionnel)
Génération des pools stables	Génération et sélection des pools cellulaires CHO Évaluation et quantification de l’intégrité des anticorps RCB du meilleur pool stable	~6 semaines	Rapport de production de matériel génétique, transfection et titrage pour sélection des pools polyclonaux Rapport de production et de caractérisation d’anticorps
Screening monoclonal par VIPS™	Isolement monoclonal par VIPS™ Évaluation de la monoclonalité Expansion et screening d’expression des clones top	~8-10 semaines	Rapport de monoclonalité pour soumission IND Rapport comparatif de clones Anticorps purifiés des clones sélectionnés
Préparation RCB & QC	Culture et contrôle qualité des meilleurs clones Congélation des Research Cell Banks (RCB)	~1 semaine	Certificat d’analyse des RCB Rapport de développement, sélection et RCB
Étude de stabilité RCB	Repicage et évaluation de la productivité des clones toutes les 10 générations	~4-5 semaines	Rapport d’étude de stabilité Préconisations de sélection des clones
Analyses	Analyses complètes d’anticorps : affinité, agrégats, thermostabilité	~2-3 semaines	Rapports d’analyses détaillés Résultats de tests d’affinité et de stabilité

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Contrôles qualité

Chez ProteoGenix, la qualité de nos livrables ne souffre d’aucun compromis. Nous sommes résolus à vous fournir le meilleur anticorps dès l’amont grâce à une évaluation de développabilité visant à réduire au minimum les adaptations nécessaires du process de purification.
Voici, pour le livrable final, les différents contrôles qualité que nous proposons (certains options sont facultatives pour réduire le coût global si nécessaire) :

Analyse des agrégats d’anticorps (SEC-HPLC)
Test de détection d’endotoxines
Quantification IgG (UV280)
Analyse fonctionnelle par ELISA vis-à-vis de l’antigène
Analyse DSC (analyse de thermostabilité par calorimétrie différentielle)
Détermination de l’affinité (Kd) vis-à-vis d’un antigène soluble (Biacore X100)
Détermination de l’affinité (Kd) vis-à-vis de l’antigène exprimé à la surface cellulaire (résonance de plasmons de surface)
Imagerie SPRi
Analyse par FACS
Potence biologique (test ADCC)
Profil de glycosylation (LC/MS)

Preuve de monoclonalité : une étape clé de la génération de lignée stable

Garantir la monoclonalité est essentiel dans la génération de lignée cellulaire stable, car elle assure rendement élevé, reproductibilité et qualité constante du produit final. Pour le domaine thérapeutique, prouver la monoclonalité revêt une importance réglementaire majeure, car c’est une exigence indispensable pour les soumissions IND.

Chez ProteoGenix, nous apportons une vraie preuve de monoclonalité (plutôt qu’une probabilité) grâce à la technologie de pointe VIPS^TM. Ce système avancé intègre ensemencement, imagerie et détection monocellulaire basée sur l’IA, vous garantissant une preuve irréfutable de la monoclonalité de votre lignée. Avec cette solution d’avant-garde, nous confirmons la vraie monoclonalité de votre lignée, tout en surveillant sa croissance pour sélectionner les clones les plus prometteurs pour le succès de votre projet.

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Lignées cellulaires disponibles

CHO-K1 propriétaire

Amplification et sélection : Disponible en amplification/sélection MTX/DHFR ou MSX/GS.
Avantages : Liberté d’exploitation avec un paiement unique, idéal pour un usage à long terme.
Applications : Transfert rapide et simple pour la production cGMP, idéal pour une bioproduction flexible et évolutive.

CHO-S^TM

Amplification et sélection : Utilise MTX/DHFR ou MSX/GS.
Avantages : Sans frais de licence avant exploitation commerciale, limitant l’investissement initial.
Applications : Facilite la montée en échelle et le transfert, de la recherche à la production commerciale.

DG-44

Amplification et sélection : Méthode MTX/DHFR.
Avantages : Pas de licence pour les premiers stades, référence pour la production de biomédicaments FDA.
Applications : Idéal pour la bioproduction de protéines thérapeutiques sous contraintes réglementaires strictes.

Variantes HEK293 (HEK293, 293F, 293E)

Caractéristiques : Cellules de rein embryonnaire humain, adaptées à l’expression transitoire et stable à haut rendement.
Avantages : Croissance rapide et production élevée en protéine, pour projets de recherche ou production industrielle.
Applications : Utilisées notamment pour la production de vecteurs viraux, vaccins et protéines recombinantes.

Lignées spécifiques client

Personnalisation : Développement sur-mesure selon vos besoins spécifiques.
Avantages : Optimisées pour une expression et productivité maximales.
Applications : Idéales pour des cibles thérapeutiques ou propriétaires, ou la différenciation concurrentielle.

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Nos équipements

VIPS^TM

Ensemencement monocellulaire / Preuve de monoclonalité
Biacore^TM

Mesure d’affinité
XelPlex

Mesure d’affinité
DSC

Stabilité thermique
SEC-HPLC

Pureté et agrégation
SDS-PAGE

Contrôle qualité d’anticorps (réducteur et non-réducteur)

Cas d’étude : Production multipliée par 1 000

Récemment, une biotech a sollicité notre service de génération de lignée cellulaire stable pour produire un anticorps thérapeutique : leur production transitoire initiale atteignait 6 mg/L avec une pureté supérieure à 90 %. Grâce à notre service de génération de lignée stable, nous avons obtenu une lignée produisant l’anticorps à 8,35 g/L, avec une pureté toujours supérieure à 90 %.

Envie de découvrir comment nous y sommes arrivés ? Téléchargez notre cas d’étude !

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FAQ sur notre service de génération de lignée cellulaire stable

Notre plateforme de génération de lignée cellulaire stable pour la production d’anticorps monoclonal est conçue pour optimiser les rendements tout en réduisant les coûts. Chaque projet commence par une évaluation de « developability », l’anticorps lead est expressé de façon transitoire dans notre système propriétaire – XtenCHO™. Cette lignée très productive permet d’obtenir des anticorps dont le profil de glycosylation et les structures secondaires sont comparables à ceux des lignées stables type CHO-S™. Elle permet également de produire des quantités suffisantes d’anticorps pour caractériser en profondeur les propriétés clés.

En fonction de cette évaluation, nous établissons un protocole personnalisé pour la génération de la lignée stable et estimons les rendements à atteindre. Les vecteurs d’expression sont alors conçus, synthétisés et transfectés dans les cellules compétentes.

La sélection et l’amplification des clones positifs sont ensuite réalisées. Les clones sont isolés et évalués en termes de stabilité et de productivité. Si des clones très productifs sont identifiés, le procédé est optimisé puis transféré à votre laboratoire ou à un CMO partenaire.
Le service de génération de lignée cellulaire stable de ProteoGenix offre un large choix de lignées * incluant CHO-DG44, CHO-S, et nos propres lignées CHO-K1 et HEK toutes adaptées à la culture en suspension. Nous pouvons également créer une lignée stable à partir d’une lignée client.

Notre expérience de plus de 28 ans en production de protéines nous permet également de produire vos anticorps dans divers systèmes non-mammaliens : bactérien (Escherichia coli, Bacillus subtilis), levure (Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris), insectes/baculovirus. Ces systèmes sont particulièrement adaptés pour les fragments d’anticorps ou les utilisations non thérapeutiques.
Plus de 100 projets ont été menés à bien via notre plateforme de génération de lignée cellulaire stable pour production d’anticorps, avec un record de productivité à 8 g/L. Ces projets couvrent la production d’IgG complètes, d’anticorps bispécifiques, protéines de fusion Fc, et fragments d’anticorps comme Fab, scFv ou VHH.
Notre processus type de génération de lignée stable pour anticorps monoclonal dure entre 4 et 6 mois. L’étape la plus longue et la plus délicate concerne la sélection des clones monoclonaux stables et les études de stabilité (optionnelles).
Nous offrons deux garanties pour sécuriser votre investissement :
1. Garantie de rendement : estimée dès le début du projet, selon la séquence à produire. Cette garantie vous assure d’atteindre la cible fixée, et dans la majorité des cas nous la dépassons.
2. Notre service est divisé en plusieurs « work packages » avec, à chaque étape, une décision go/no go. Vous décidez de poursuivre ou d’arrêter le service et ne payez que le travail réalisé !
La génération de lignée cellulaire stable est incontournable pour le succès clinique des anticorps monoclonaux. Nous recommandons un test approfondi des leads au plus tôt avant de passer à la grande échelle.

L’évaluation anticipée de la développabilité est une approche éprouvée afin de garantir : stabilité, réactivité, efficacité et donc succès de votre future production. Ceci permet d’éviter les obstacles liés à l’expression stable et d’optimiser la production à moindre coût.

Les propriétés telles que l’agrégation, l’affinité, la spécificité, le profil de glycosylation, sont connues pour impacter la développabilité. Ces paramètres sont analysés in silico puis mesurés sur anticorps recombinants produits dans nos installations.

Les IgG complètes sont très souvent produites dans des systèmes mammaliens type cellules CHO (Chinese Hamster Ovary) ou NS0 (myélome souris). Chez ProteoGenix, nous maîtrisons la lignée CHO, offrant CHO-K1 propriétaire, CHO-DG44 (doublement DHFR-, pour la sélection métabolique), CHO-S, etc.
Après 28 ans de production en divers systèmes (mammifère, bactérie, levure, insecte), la production stable sur CHO reste le choix n°1 pour les anticorps : tolérance accrue aux variations de pH, température, pression, oxygène, et surtout amplification génique facilitée, donc rendements supérieurs aux autres systèmes.
Enfin, le profil de glycosylation est très proche de l’homme : faible immunogénicité, meilleure efficacité thérapeutique.

Les fragments dépourvus de glycanes peuvent au contraire être produits rapidement et à fort titre sur des systèmes bactériens (E. coli, B. subtilis) réputés pour leur productivité et simplicité de manipulation. Néanmoins, la production se fait dans le cytoplasme ou le périplasme, impliquant des méthodes d’extraction plus drastiques.
Grâce à la technologie VIPS™, ProteoGenix accélère vos projets de lignées stables de plus de 50 %, avec vérification haute résolution et preuve directe de monoclonalité. Cette efficacité réduit vos délais et garantit la reproductibilité et qualité de vos résultats : un atout majeur pour la production d’anticorps thérapeutiques. Nos rapports détaillés de clonalité sont utilisables directement en soumission IND, garantissant la conformité réglementaire.

Notre service inclut aussi une phase de tests précoces très complète. La caractérisation approfondie des leads permet d’anticiper tout obstacle de production et de garantir le rendement. Ainsi, nous assumons le risque technique à votre place et protégeons votre investissement.

Et vous restez propriétaire de la lignée et des protocoles développés chez ProteoGenix, simplifiant le transfert à un CMO ou à vos installations pour la production industrielle. Notre génération de lignée stable FTO (« freedom-to-operate ») assure la transition du laboratoire aux bioréacteurs et simplifie l’obtention de licences.

Experts dans la production et l’ingénierie d’anticorps, nous proposons également de nombreux services upstream : maturation d’affinité, humanisation, développement d’anticorps bispécifiques, conjugués, reformatting… et downstream : banque cellulaire, études de stabilité… Travailler avec nous, c’est gagner en temps comme en coûts, tout en maximisant l’efficacité thérapeutique et en minimisant les risques de production.
Garantir la monoclonalité est indispensable pour des rendements et une qualité constante.
Chez ProteoGenix, nous proposons deux méthodes d’isolement des cellules monoclonales :
1. Dilution limite : Méthode classique consistant à diluer la suspension afin d’avoir statistiquement une seule cellule/puits. C’est économique, mais présente des inconvénients :
  
  Peu de contrôle : certains puits sont vides, d’autres comportent plusieurs cellules. Ce n’est qu’une probabilité.
  
  Beaucoup d’intervention humaine : augmente la variabilité et le risque d’erreur.
  
  Documentation difficile : Observer une cellule unique au microscope est ardu : croissance rapide = difficile de prouver l’origine du clone. Un vrai handicap en soumission IND.
2. Méthode automatisée : VIPS™
  Les agences réglementaires préfèrent aujourd’hui les méthodes automatisées, telle que la technologie VIPS™ (Verified In-Situ Plate Seeding) :
  
  Automatisation totale, moins d’erreur humaine
  
  Preuve directe de monoclonalité : preuve visuelle dès l’ensemencement, et non différée.
  
  Suivi en temps réel : la croissance cellulaire est suivie.
  
  Gain de temps considérable : VIPS™ est deux fois plus rapide que la dilution limite.
Qu’il soit destiné à des applications thérapeutiques, diagnostiques ou vétérinaires, le développement d’une lignée cellulaire stable est une étape clé. Elle impacte directement le coût de production, en particulier le rendement d’anticorps et la facilité de purification.
Pour déterminer si externaliser ce service est pertinent, voici quelques critères :
- Expertise : Évaluer la séquence de départ, identifier les risques (liability, solubilité, agrégation), puis optimiser la séquence si besoin tout en préservant les propriétés clés.
  Les meilleurs pools/clones sont sélectionnés sur analyse multifactorielle intégrant rendement et qualité.
- Équipements : Génération de lignée stable = équipements variés (ensemenceur monocellulaire, imagerie, spectromètre de masse, HPLC, Biacore…). Décider sans caractérisation complète expose à un risque de coûts imprévus.
- Limiter le risque financier : Développer en interne mobilise des ressources mais ne garantit pas le succès. Grâce à nos garanties de rendement et à nos nombreux jalons « go/no-go », ProteoGenix offre un service de génération de lignée stable sans risque client. Notre expérience (1 500 protéines, 5 000 anticorps, 100 lignées stables) et notre plateforme d’IA (pré-étude in silico, optimisation de séquence, tests haut débit) nous permettent de maîtriser ces risques.
- Délai : Développement d’une lignée stable = processus long (3 à 12 mois). Les CROs ayant développé des plateformes propriétaires pour augmenter la rapidité sans sacrifier la qualité sont les plus performants. Chez ProteoGenix, nos outils bioinformatiques et l’intégration du système VIPS nous permettent de réduire de 50 % le temps de sélection monoclonale.
- Innovation : Un service « core » pour ProteoGenix, avec une démarche d’amélioration continue : développement d’une lignée propriétaire sur-exprimant les anticorps, intégration d’IA… D’où des rendements et une qualité supérieurs.
- Bonus : Pour maximiser votre succès, confier à un seul prestataire (de la génération d’anticorps à la lignée stable) garantit la cohérence de tout le process et l’anticipation de chaque étape, que votre objectif soit thérapeutique, diagnostique ou vétérinaire.

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