Services de développement d’hybridomes

Form. Anticorps monoclonaux

Grâce à un taux de réussite de plus de 98 % sur plus de 300 projets de génération d’anticorps monoclonaux, ProteoGenix est en mesure d’offrir les meilleures garanties du marché pour le développement d’hybridomes. Vous ne payez votre facture qu’une fois que vous avez vérifié que l’anticorps que nous avons produit pour vous fonctionne dans votre application.

Pourquoi choisir ProteoGenix pour
le développement de votre hybridome ?

Les meilleures garanties

Vous testez vos anticorps purifiés et ne payez que si vous en êtes satisfait.

Un taux de réussite exceptionnel

Plus de 300 projets de génération d’anticorps et un taux de réussite de 98 %.

Un grand choix d’approches pour l’immunisation

Immunisation par protéine, peptide, ADN ; nous maîtrisons tous les types de stratégie d’immunisation.

Accréditation AAALAC

ProteoGenix applique les normes éthiques les plus exigeantes et s’engage à faire un usage responsable des animaux.

Criblage dans l’application envisagée

Vous développez un outil diagnostique ? Cytométrie en flux, ELISA en sandwich, IHC, IF, IP, WB ; votre anticorps est garanti pour l’application de votre choix.

Expert en anticorps thérapeutiques

Vous voulez développer un anticorps thérapeutique ? Reformatage (bispécifique, ADC), humanisation, maturation d’affinité ; vous pouvez compter sur notre grand choix de services pour atteindre les phases cliniques.

Choisissez notre formule de développement d’hybridomes garanti

Pour quelle application avez-vous besoin d’un anticorps monoclonal ? Cliquez sur les applications ci-dessous pour découvrir le contenu et les garanties de nos formules de développement d’hybridomes.

Nom de la formule Code Synthèse de gène et production d’antigène Immunisation, fusion, criblage par ELISA et sous-clonage Criblage dans l’application Production d’Ab purifié Couplage d’anticorps et identification du couple par ELISA
ELISA standard ATX-PACK1M X
ELISA garanti haut de gamme ATX-PACK2M X X X
WB garanti haut de gamme ATX-PACK3M X X X X
Cytométrie en flux garantie haut de gamme ATX-PACK4M X X X X
ELISA en sandwich garanti haut de gamme ATX-PACK5M X X X X X
IF garantie haut de gamme ATX-PACK6M X X X X
IP garantie haut de gamme ATX-PACK7M X X X X
Peptide garanti ATX-PACK8M X X X
Formule modification spécifique garantie ATX-PACK9M X X X
IHC garantie haut de gamme ATX-PACK10M X X X

Témoignage d’un client satisfait de notre service de développement d’hybridomes

« Nous avons collaboré à un projet sur la génération d’un anticorps monoclonal qui reconnaît une mutation d’un-amino-acide dans une protéine de surface cellulaire associée au cancer. Bien que le projet ait été techniquement difficile, nous avons réussi à générer un clone d’hybridome qui a produit l’anticorps désiré. Au cours du projet, nous avons trouvé des clones supplémentaires qui reconnaissaient des épitopes adjacents et ProteoGenix mis en avant un effort pour effectuer des subclonings supplémentaires afin d’assurer la livraison de clones qui fonctionnent parfaitement. En résumé, ProteoGenix s’est toujours efforcé d’assurer une qualité maximale du produit et de la satisfaction du client, et le gestionnaire de compte a fourni un soutien rapide et compétent à tout moment »

Dr. rer. nat. Rudolf Übelhart, directeur de projet, Institut d’immunologie d’Ulm

Contenu de notre service de développement d’hybridomes

1
  • CONCEPTION DE L’ANTIGÈNE

Définition de la stratégie d’immunisation la plus appropriée
Conception de l’antigène : synthèse d’un peptide, synthèse d’un gène et production d’une protéine dans deux systèmes ou immunisation par ADN.

2
  • IMMUNISATION

Immunisation de cinq souris avec notre protocole propriétaire optimisé

3
  • FUSION CELLULAIRE

Recueil des splénocytes de deux souris pour deux fusions à des cellules d’une lignée myélomateuse

4
  • SÉLECTION D’HYBRIDOMES ET CRIBLAGE (STADE POLYCLONAL)

Sélection de cellules hybrides (sélection HAT)
Criblage des surnageants de culture avec l’antigène cible (criblage par ELISA)

5
  • ISOLEMENT ET SÉLECTION DES MEILLEURS MONOCLONES

Isolement de monoclones par dilution limite.
Amplification et criblage des monoclones par ELISA ou dans l’application cible

Étude de cas : Production d’un anticorps monoclonal pour la détection d’une protéine membranaire de cellule humaine

OBJECTIF DU PROJET

Le projet consistait en la production à la demande d’un client d’un anticorps monoclonal pour la détection d’une protéine membranaire de cellule humaine. La conception de l’antigène était particulièrement ardue car la protéine est difficile à exprimer dans des cellules de mammifère.

Application garantie : cytométrie en flux

 

CONCEPTION ET PRODUCTION DE L’ANTIGÈNE

  • Un fragment de protéine correspondant au domaine extra-cellulaire potentiel et possible à exprimer dans des cellules de mammifères a été conçu.

  • Le gène correspondant a été conçu et optimisé pour l’expression en cellules de mammifère.

  • Des cellules de mammifères ont été transfectées par le plasmide exprimant la protéine cible couplée à la GFP.

La protéine a été exprimée dans des lignées HEK293 et CHO. La production finale a été réalisée dans des cellules HEK.

Méthode de production : protéine sécrétée dans le surnageant de culture
Rendement : 0,43 mg/L
Quantité produite : 0,86 mg
Un contrôle de qualité final a été réalisé par SDS-PAGE.

IMMUNISATION DES ANIMAUX ET CRIBLAGE

Cinq souris ont été immunisées par quatre injections d’antigène protéique. Voir le rapport complet pour davantage d’informations sur le protocole.

Résultat de l’analyse de l’activité du sérum de souris contre l’immunogène par cytométrie en flux (CMF) :

Échantillon testé Contrôle positif Souris 3 Souris 4
Sérum de souris après la 3e injection 90% 42% 29%
Sérum de souris après la 4e injection 76% 47%

Les résultats pour l’autre souris se trouvent dans le rapport complet.
La souris 3 présentait la meilleure réactivité immunogène à l’antigène en CMF.
Étant donné que notre projet comprend deux fusions cellulaires, les souris 3 et 4 ont été sélectionnées pour procéder à la fusion.

ÉCHANTILLONS DE SURNAGEANT APRÈS LA FUSION CELLULAIRE (SOURIS 4) : TEST ELISA

Confirmation du criblage après la fusion
ID du clone 65 66 67 68 69 70 71
Densité optique 1.254 1.615 1.306 1.412 1.224 1.198 1.334
ID du clone 72 73 74 75 76 77 78
Densité optique 1.251 1.011 1.394 1.225 1.636 0.153 1.647
ID du clone 79 80 81 82 83 84 85
Densité optique 1.07 1.223 1.267 1.847 1.395 1.282 1.783
ID du clone 86 87 88 89 Négatif Positif
Densité optique 1.036 0.983 1.173 1.116 0.088 1.731

24 clones positifs ont été sélectionnés par ELISA.
La détermination des meilleurs clones pour la CMF est réalisée directement dans l’application cible.

 

ÉCHANTILLONS DE SURNAGEANT APRÈS LA FUSION CELLULAIRE (SOURIS 4) : TEST PAR CMF

Voir le rapport complet pour le protocole détaillé.

ID du clone 65 66 67 68 69 70 71
Résultat de la CMF / % 37.48 1.27 20.27 62.50 1.18 11.40 1.38
ID du clone 72 73 74 75 76 77 78
Résultat de la CMF / % 75.09 1.01 6.50 56.76 73.16 1.18 1.09
ID du clone 79 80 81 82 83 84 85
Résultat de la CMF / % 1.07 1.05 1.49 6.75 71.92 1.18 1.02
ID du clone 86 87 88 Positif
Résultat de la CMF / % 1.04 1.01 7.36 80.73

11 clones étaient positifs à l’analyse par CMF après la fusion cellulaire. Ces clones ont été sous-clonés pour la production d’anticorps.

Des analyses similaires par ELISA et CMF ont été réalisées sur la souris 3. L’analyse par CMF a permis d’identifier 14 clones positifs. Les résultats se trouvent dans le rapport complet.

 

Vous souhaitez en savoir plus sur nos services de génération d’hybridomes ? Vous pouvez lire une autre étude de cas sur le développement d’un anticorps anti-peptide.

Quels sont les avantages du développement d’hybridomes pour la génération d’anticorps ?

La technologie de l’hybridome a révolutionné tout le secteur des biotechnologies en fournissant une méthode permettant, de façon illimitée et reproductible, la production d’anticorps monoclonaux. Actuellement, le développement d’hybridomes constitue toujours une méthode de référence pour la génération d’anticorps avec une forte sensibilité. La technologie de l’hybridome reste donc la meilleure technique pour le développement d’immunoessais pour le développement de kits diagnostics. Elle représente également une bonne alternative à la technologie du phage display pour le développement d’anticorps thérapeutiques. L’administration d’anticorps monoclonaux produits par hybridomes conduit toutefois à de sévères effets secondaires dus à leur origine murine. De récents progrès en ingénierie des anticorps permettent heureusement de réduire les composants murins immunogènes par un procédé appelé d’humanisation d’anticorps . Couplé au système de maturation d’affinité, ce procédé peut être très utile pour générer des anticorps humanisés optimisés utilisables dans des applications thérapeutiques.