5 SYSTEMS
Avec plus de 15 années d’expérience en production de protéines à façon et plus de 1 500 protéines produites dans cinq systèmes d’expression différents, ProteoGenix est l’un des leaders mondiaux de la production d’anticorps et de protéines recombinantes difficiles à exprimer. EN SAVOIR PLUS
Avec plus de 15 années d’expérience en production de protéines à façon et plus de 1 500 protéines produites dans cinq systèmes d’expression différents, ProteoGenix est l’un des leaders mondiaux de la production d’anticorps et de protéines recombinantes difficiles à exprimer. EN SAVOIR PLUS
Nous proposons des services d’expression et de purification de protéines à petite et grande échelle dans chacune de nos cinq plates-formes à des prix ultra-compétitifs. Nous pouvons également concevoir spécialement pour vous des formules pour, par exemple, tester les conditions d’expression d’une protéine recombinante dans plusieurs systèmes en parallèle ou les conditions d’expression d’une protéine à grande échelle dans un système donné. Nos services comprennent toutes les étapes de la synthèse des gènes et la construction du vecteur d’expression à la production pilote de la protéine en flasques et l’expression à grande échelle en fermenteurs et bioréacteurs..
Notre criblage à haut débit des conditions d’expression des protéines est conçu pour remédier aux problèmes liés à la solubilité, la pureté, la fonctionnalité, la productivité, le repliement ou la formulation. L’accomplissement de ces tâches implique d’avoir accès à toutes les technologies, tous les procédés et tous les outils existants et de les maîtriser parfaitement. Avec une grande expérience de l’expression de protéines recombinantes de toutes sortes, telles que des anticorps, des enzymes, des protéines membranaires et des cytokines, et de toutes les espèces, ProteoGenix a développé une panoplie complète d’outils pour relever de tels défis et fournir des services d’ingénierie de protéines de premier ordre. Essayez les formules garanties du spécialiste de la production de protéines le plus fiable du marché.
E. coli
EXPRESSION DE PROTÉINE
DANS E. COLI
Expression périplasmique, tests de repliement, formules
garanties, élimination des endotoxines, expression dans E. coli à façon,
production de protéines en bactéries
Multi-systèmes
FORMULES D’EXPRESSION
MULTI-SYSTÈMES
Dans les cas où le système optimal n’est pas connu,
tests dans jusqu’à 5 systèmes, livraison de la protéine purifiée
pour chacun des systèmes
B. subtilis
PRODUCTION DE PROTÉINES
DANS B. SUBTILIS
Faible niveau d’endotoxine,
sécrétion de la protéine recombinante,
caractérisation de la protéine
Levure
PRODUCTION DE PROTÉINES
DANS LA LEVURE
Saccharomyces cerevisia,
Pichia pastoris,
expression stable
HTP
CRIBLAGE À HAUT DÉBIT
DE L’EXPRESSION DES PROTÉINES
Pour les protéines difficiles à exprimer,
plus de 1 000 conditions d’expression, petite échelle,
criblage à haut débit
Cellules d’insecte
PRODUCTION DE PROTÉINES EN CELLULES D’INSECTE /
BACULOVIRUS
Sf9, Sf21, Hi5, protéines glycosylées,
production de protéines
purification
Mammifère
PRODUCTION DE PROTÉINES
EN CELLULES DE MAMMIFÈRE
Expression transitoire, production
d’anticorps recombinants, purifications par SEC et IEX,
faibles niveaux d’endotoxines, CHO, HEK293, BHK
Lignée stable
DÉVELOPPEMENT DE
LIGNÉE CELLULAIRES STABLES
Systèmes libres de droits, rendement garanti,
développement de lignées HEK293 et CHO stables
RAB
PRODUCTION D’ANTICORPS
MONOCLONAUX ET RECOMBINANTS
Production à bas coût,
rendement garanti,
HTP de variants d’anticorps,
Grande échelle
PRODUCTION DE PROTÉINES À GRANDE ÉCHELLE
PAR FERMENTATION / BIORÉACTEUR
1 à 4 000 L dans 5 systèmes différents,
services de purification à grande échelle,
services de développement de procédés
Témoignage client : production de protéine
» J’ai récemment choisi ProteoGenix pour produire une protéine recombinante dans les cellules HEK293. La productivité élevée et l’activité forte de la protéine obtenue, probablement en raison de la glycosylation et du pliage adéquats, nous ont permis de générer des résultats passionnants dans les études fonctionnelles et d’atteindre de nouvelles étapes dans notre projet de recherche. La qualité du service fourni et la communication fluide et aimable que j’ai eue avec le responsable de compte en charge de notre projet ont été décisives dans ce succès. Je suis heureux de recommander ProteoGenix pour les productions de protéines recombinantes. »
directeur de
recherche au CNRS
Pourquoi choisir ProteoGenix pour la production de votre protéine recombinante ?
Why Choose ProteoGenix
Plus de 16 ans d’antécédents exceptionnels dans la production de protéines difficiles à exprimer
Cinq systèmes d’expression de protéines disponibles et une panoplie complète d’outils pour remédier aux éventuels problèmes d’expression
One-stop solution from gene to protein, process development and large scale production. Consequences: faster service, increased success rate, less administrative work.
Des lignées cellulaires et des souches libres de droits
Productions de petite à grande échelle avec des lots de 1 à 4 000 L
Productivité de près de 800 mg/L en expression transitoire et 5 g/L en expression stable>
Installations de fermentation
Étude de cas :
Exemple de production d’une bêta-glucosidase dans des cellules d’insecte
SERVICE RENDU
Un client nous a demandé de produire une bêta-glucosidase recombinante dans un système d’expression en baculovirus (production en cellules d’insecte). Il nous a commandé une formule complète de production en cellules d’insecte comprenant l’expression à petite échelle et des tests de purification suivis par une production et une purification pilotes de 1 L. Nous avons obtenu un rendement de 370 mg/L et avons livré 60 mg de protéine suite à l’expression à petite échelle. Au vu des résultats, il a été décidé que la production pilote n’était plus nécessaire et n’a pas été facturée au client. Le service contenait:
BIOLOGIE MOLÉCULAIRE
L’ADNc codant pour la bêta-glucosidase a été synthétisé chimiquement après l’optimisation de sa séquence pour l’expression en cellules d’insecte. Il a ensuite été sous-cloné dans un vecteur d’expression propriétaire en fusion avec une étiquette 6xHis en vue de la purification.
TESTS D’EXPRESSION
GÉNÉRATION D’UN STOCK DE VIRUS P1
Figure 1 : Analyse de l’expression en cellules d’insecte lors de la génération du virus P1
À gauche : coloration au bleu de Coomassie. À droite : WB avec un anticorps anti-His (substrat ECL). Échantillon « – » : culture de contrôle
non transfectée. Les échantillons 1 et 2 sont des transfections par 2 clones de bacmide différents.
Conclusion de l’étape de génération du virus P1
Une bande de protéine correspondant au poids moléculaire de la bêta-glucosidase est observée dans les échantillons de protéines extraites en conditions natives et séparées par SDS-PAGE. Ce résultat est confirmé par Western blot (figure 1, flèches vertes). Le clone de bacmide recombinant no 1 a été utilisé pour les tests d’expression.
AMPLIFICATION DU VIRUS ET TESTS D’EXPRESSION
Figure 2 : Tests d’expression de la protéine avec le stock P2
coloration au bleu de Coomassie. À gauche : type de cellule 1.À droite : type de cellule 2. Échantillon « – » : culture de contrôle négatif.
Conclusion des tests d’expression
Les tests d’expression avec le virus P2 confirment que la protéine cible est présente en grande quantité dans les extraits protéiques natifs (figure 2, flèches vertes). Conditions optimales pour l’expression de la protéine native : figure 2, flèche rouge = limite d’identification
TESTS DE PURIFICATION
Figure 3 : Test de purification à petite échelle de la protéine coloration au bleu de Coomassie.
À gauche : profil de purification. À droite : QC final de la protéine purifiée
IN : extrait brut. FT : fraction non retenue. W1-W3 : étapes de lavage. E1-E9 : fractions éluées.
Conclusion des tests de purification à petite échelle
La bêta-glucosidase recombinante peut être produite et purifiée en conditions natives. La pureté est ≥ 95 %, et le rendement de production/purification est d’environ de 370 mg/L. Le système d’expression en baculovirus est un choix parfait pour cette protéine.
Quel système choisir pour la production de votre protéine recombinante ?
COMPARAISON ENTRE LES CINQ SYSTÈMES D’EXPRESSION FOURNIS PAR PROTEOGENIX -
SYSTÈMES D’EXPRESSION PROCARYOTIQUES VS SYSTÈMES D’EXPRESSION EUCARYOTIQUES
Le tableau ci-dessous donne une idée générale des avantages des cinq systèmes d’expression de protéines hétérologues disponibles chez ProteoGenix. Le nombre d’étoiles est proportionnel au niveau de performance dans chaque catégorie. Les performances indiquées peuvent cependant varier d’une protéine à l’autre.
| Système d’expression | Délai | Coût | Modifications post-traductionnelles | Faible niveau d’endotoxine | Simplicité du passage à grande échelle | Sécrétion |
| E. coli | **** | **** | * | * | *** | * |
| B. subtilis | *** | *** | * | **** | *** | ** |
| Levure (P. pastoris, S. cerevisiae) | * | *** | ** | **** | ** | ** |
| Baculovirus/ Cellules d’insecte | * | ** | *** | **** | * | *** |
| Cellules de mammifère | *** | * | **** | **** | ** | **** |
Le tableau ci-dessous donne une idée générale des avantages des cinq systèmes d’expression de protéines hétérologues disponibles chez ProteoGenix. Le nombre d’étoiles est proportionnel au niveau de performance dans chaque catégorie. Les performances indiquées peuvent cependant varier d’une protéine à l’autre.
| Système d’expression | Délai | Coût | Modifications post-traductionnelles | Faible niveau d’endotoxine | Simplicité du passage à grande échelle | Sécrétion |
| E. coli | **** | **** | * | * | *** | * |
| B. subtilis | *** | *** | * | **** | *** | ** |
| Levure (P. pastoris, S. cerevisiae) | * | *** | ** | **** | ** | ** |
| Baculovirus/ Cellules d’insecte | * | ** | *** | **** | * | *** |
| Cellules de mammifère | *** | * | **** | **** | ** | **** |
| Système d’expression | Délai | Prix |
| E. coli | 3-6 semaines | Prix à partir de 1 650€ |
| B. subtilis | 4-6 semaines | |
| Levure (P. pastoris, S. cerevisiae) | 6-7 semaines | |
| Baculovirus/ Cellules d’insecte | 8-11 semaines | |
| Cellules de mammifère | 7-9 semaines |
DÉLAI ET PRIX
| Système d’expression | Délai | Prix |
| E. coli | 3-6 semaines | Prix à partir de 1 650€ |
| B. subtilis | 4-6 semaines | |
| Levure (P. pastoris, S. cerevisiae) | 6-7 semaines | |
| Baculovirus/ Cellules d’insecte | 8-11 semaines | |
| Cellules de mammifère | 7-9 semaines |
Contenu du service
Évaluation de l’expression et de la purification à petite échelle avec de nombreuses conditions d’expression testées.
Production et purification de 1 L
LISTE NON EXHAUSTIVE DES FORMULES MULTI-SYSTÈMES D’EXPRESSION
| Référence de la formule | Type | Systèmes | Prix |
| ATX-PTR4S01 | Formule à 4 systèmes d’expression | E. coli / levure / baculovirus / Cellules de mammifère | Prix à partir de 2 450€ |
| ATX-PTR3S05 | Formule à 3 systèmes d’expression | B. subtilis/ levure / baculovirus | |
| ATX-PTR2S02 | Formule à 2 systèmes d’expression | E. coli / baculovirus |
Le système le plus utilisé pour la production de protéines recombinantes est E. coli. Il s’agit en effet du système le plus simple, le plus rapide et le plus économique pour l’expression d’une protéine à façon. Comme la croissance des cultures de bactéries est beaucoup plus rapide que celle des cellules d’insecte, de mammifère ou de levure, il est plus facile et rapide d’y tester un grand nombre de conditions d’expression différentes. Nous disposons également de davantage de solutions pour y effectuer des tests, ce qui permet d’obtenir de meilleurs taux de réussite. Les rendements de l’expression transitoire de protéines recombinantes dans E. coli sont aussi généralement largement supérieurs à ceux obtenus avec les cellules de levure, d’insecte et de mammifère. La production de protéines recombinantes dans E. coli est donc souvent la première solution proposée par ProteoGenix lorsque l’application finale requiert de grandes quantités de protéines, comme pour la cristallographie ou la résonance magnétique nucléaire (RMN), et que les modifications post-traductionnelles (PTM) ne sont pas indispensables. Les principaux inconvénients des systèmes basés sur E. coli sont les teneurs élevées d’endotoxines restant dans l’échantillon final et l’absence de modifications post-traductionnelles. Il est possible d’éliminer les endotoxines, mais les procédés pour y parvenir ne sont pas vraiment adaptés à la production industrielle. Quant aux problèmes liés aux PMT, la seule solution est d’utiliser un autre système d’expression. Grâce à nos cinq systèmes d’expression, nous sommes en mesure de satisfaire la grande majorité de nos demandes de production de protéines recombinantes, avec un taux de réussite de 95 %. Nous travaillons sans cesse à l’intégration de nouveaux systèmes et de nouvelles solutions afin de vous fournir des services de production de protéines recombinante de la plus grande qualité.
Si vous avez des doutes concernant le choix d’un système, vous pouvez compter sur notre grande expérience en production de protéines pour vous aider à définir la stratégie optimale, du gène à la protéine purifiée, en prenant en compte vos délais, votre budget et les caractéristiques requises pour votre protéine.
Équipe, capacité, organisation
Nos laboratoires de production de protéines recombinantes sont organisés en plusieurs plates-formes et laboratoires d’analyse de sorte à assurer la meilleure qualité de service, la plus grande pureté des produits, les plus faibles risques de contamination et la meilleure coordination pour un service rapide et fiable.
Nous possédons une plate-forme pour chacun de nos cinq systèmes et des laboratoires séparés de contrôle de la qualité, de biologie moléculaire, de conditionnement…Chaque plate-forme est gérée par un chef d’équipe qui veille à ce que chaque protéine livrée corresponde exactement aux spécifications initiales du client. Avec plus de 1 500 protéines produites à ce jour et des équipes spécialistes de chaque système, notre expertise n’a aucun équivalent sur le marché.
Applications de l’expression
de protéines recombinantes à façon
Les protéines recombinantes de ProteoGenix sont utilisées dans un large spectre d’applications, et nos clients, le plus souvent impliqués dans les sciences de la vie, comprennent des industriels dans les secteurs de la pharmacie, du diagnostic, des biotechnologies, de l’agroalimentaire, des sciences végétales, des énergies nouvelles et des cosmétiques, ainsi que des organismes de recherche nationaux.
Liste non exhaustive des applications possibles :
