Services de développement d’essais à façon

Formulaire Essais à façon

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Si vous travaillez sur un projet pour lequel les résultats obtenus avec les kits, notamment les kits ELISA, disponibles dans le commerce manquent de cohérence pour une bonne validation, le développement d’un essai sur-mesure est le meilleur moyen de faire avancer vos travaux de recherche. Les services de développement d’essais à façon de ProteoGenix jouissent d’une excellente réputation auprès des principaux acteurs du secteur des sciences de la vie aussi bien privés que publics, que ce soit pour la recherche, le diagnostic in vitro ou l’obtention du marquage CE.

Les services de développement d’essais à façon de ProteoGenix sont tout compris, de la définition en concertation avec vous de la stratégie de développement à la livraison du kit pilote, le tout exécuté par nos soins. Les tests ELISA en sandwich et par compétition sont les deux formats que nous développons le plus fréquemment.

Développement d’ELISA en sandwich garanti

Nous garantissons la livraison de l’antigène et d’une paire d’anticorps qui détectent votre cible dans vos échantillons. À la fin du processus, nous vous fournissons des échantillons des anticorps et de l’antigène pour que vous puissiez vérifier leur conformité aux spécifications initiales. Si vous êtes satisfait, vous réglez la totalité de la facture. Dans le cas contraire, vous ne payez que 50 % du coût total uniquement si le test ELISA en sandwich que nous avons développé fonctionne contre l’antigène. Nous prenons donc à notre compte la majeure partie des risques de votre R&D ou de votre projet de diagnostic.

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Développement d’essais à façon de ProteoGenix :

processus détaillé

Ayant aidé un grand nombre d’industriels et de laboratoires publics avec nos services de développement de kits ELISA à façon, nous avons fini par établir et parfaire une rigoureuse procédure de développement d’essai à façon qui prend en compte chaque aspect de vos projets pour produire des solutions d’essai adaptables à des travaux de recherche, à des applications de diagnostic in vitro ou à l’obtention du marquage CE. Nos services de développement d’essais à façon sont structurés comme suit :

Études des spécifications de l’essai

Une fois que vous nous avez fait part de vos besoins, nous étudions les spécifications fournies dans les moindres détails afin de bien comprendre les objectifs de vos travaux de recherche.

Définition de la stratégie de développement de l’essai à façon

Une fois que nous avons déterminé que les kits ELISA, les ELISA en sandwich et les paires d’anticorps existants ne satisfont pas vos besoins (spécificité, sensibilité, réactivité croisée, etc.), nous définissons en concertation avec vous une stratégie spécifique pour le développement d’un essai. Il s’agit d’une étape très importante pour la réussite du projet. Il existe de nombreuses stratégies possibles pour le développement d’un essai satisfaisant des besoins spécifiques, et toutes les étapes du processus sont critiques.

Synthèse du gène

Notre stratégie de développement de votre essai commence à se matérialiser avec la synthèse d’un ADNc double brin. Grâce aux contrôles de qualité améliorés que nous utilisons pour guider notre système, nous pouvons garantir un séquençage exact à 100 %, avec une efficacité globale de plus de 99,9 %. Nous perfectionnons encore davantage notre protocole de synthèse des gènes par une série de mutagenèses dirigées pour éliminer toute trace d’erreur. Au fil des ans, nous avons su nous hisser parmi les meilleurs prestataires de services en ce qui concerne la production de réactifs à façon de grande qualité, à commencer par la synthèse et l’optimisation de gènes d’une grande précision. L’optimisation du gène et la conception de la construction sont des éléments très importants pour être en mesure de produire à l’étape suivante l’antigène le plus approprié.

Production de l’antigène (protéine ou peptide)

La production avec une grande précision de chaînes de protéine recombinantes ou de peptides avec un rendement suffisant pour assurer le développement subséquent des anticorps est une étape cruciale du développement d’un essai à façon. Avec notre grande expertise dans ce domaine, nous nous assurons que nos processus de développement de tests ELISA en sandwich ou par compétition ou de tout autre format d’essai soient élaborés sur des fondations solides, à savoir des anticorps développés avec une production efficace d’antigène de grande pureté.

Selon les spécifications de votre projet et les objectifs de vos travaux de recherche, votre antigène (protéine ou peptide) peut aussi être produit dans différents systèmes les mieux adaptés, E. coli, B. subtilis, levure, cellules d’insecte (baculovirus) ou de mammifères, afin de diversifier les procédures subséquentes du développement de l’essai. Si besoin, notre équipe de scientifiques peut également exprimer la protéine ou le peptide recombinant dans tous ces systèmes en parallèle afin de trouver les meilleures conditions d’expression et améliorer la validité des résultats finaux obtenus à l’aide des anticorps utilisés dans l’essai que vous nous avez commandé.

Développement des anticorps primaires

Nous procédons avec le plus grand soin pour développer les anticorps primaires à partir de l’antigène généré à l’étape précédente. Comme vous le savez certainement, il s’agit probablement du processus le plus délicat du développement d’un essai. Nous pouvons heureusement compter sur nos longues années d’expertises en génération d’anticorps polyclonaux et monoclonaux et sur nos technologies et nos équipements de pointe pour mener à bien cette tâche. Notez que nos animaleries sont accréditées par l’AAALAC.

 

Génération d’anticorps monoclonaux

  • Développement d’hybridomes avec immunisation génétique ou immunisation par l’antigène protéique
  • Technique de phage display avancée avec criblage de banques naïves ou immunes
  • Grande quantité d’anticorps garantie
  • Si besoin, possibilité de livraison des anticorps monoclonaux seuls

 

Génération d’anticorps polyclonaux

  • Plusieurs systèmes animaux disponibles pour la génération d’anticorps polyclonaux appropriés par immunisation génétique ou par l’antigène protéique
  • Grande quantité d’anticorps garantie
  • Si besoin, possibilité de livraison des anticorps polyclonaux seuls

Services analytiques

Une fois les anticorps primaires produits, nous les confions à nos services analytiques. Avant leur couplage, nous offrons trois techniques de mesure de l’affinité des anticorps sans marqueur afin d’évaluer leur niveau d’interaction biomoléculaire.

  • Résonance plasmonique de surface (SPR par Biacore™)
  • Imagerie par résonance plasmonique de surface (SPRi par HORIBA Scientific®)
  • Détection rapide par interférométrie de bio-couche (Octet®RED par PALL Fortébio)

Couplage des anticorps pour les essais ELISA en sandwich

L’étape suivante de notre processus de développement d’essai est le couplage des anticorps. Grâce à la pureté des anticorps produits à l’étape précédente, nous pouvons garantir que le produit final du couplage ne contiendra aucune chaîne protéique ni aucun groupement amine contaminant qui pourrait affecter le processus de couplage. L’utilisation des techniques les plus avancées avec un grand choix de méthodes de marquage nous permet de tout mettre en œuvre pour réussir cette étape cruciale du développement d’un essai.

  • Couplage rapide
  • Procédé en une seule étape améliorant la précision
  • Minimum de 10 couplages/anticorps

Recherche de la meilleure paire d’anticorps pour les essais ELISA en sandwich

Parallèlement au développement de l’anticorps primaire (étape 5), nous recherchons la meilleure paire d’anticorps (anticorps de capture et anticorps de détection) pour l’essai ELISA en sandwich. Nous réalisons au moins 90 tests d’appariement pour être certain de sélectionner la paire d’anticorps la plus appropriée. La justesse d’un kit ELISA en sandwich étant essentiellement directement fonction de la qualité de l’appariement des anticorps, il est très important de faire appel à un développeur d’essai expérimenté comme ProteoGenix, qui maîtrise la totalité du processus de développement de la synthèse de gènes à la production de kits pilotes.

  • Détermination des paires d’anticorps les plus appropriées
  • Processus rapide
  • Techniques avancées d’appariement pour identifier les meilleures paires
  • Nombreux tests d’appariement (plus de 90)

Développement et optimisation du protocole d’ELISA

Sur la base de l’unicité de l’antigène cible et de la sensibilité des anticorps souhaitée, nous développons un protocole optimisé de test ELISA (ELISA en sandwich ou par compétition ou autre format). L’objectif de cette étape est d’optimiser le signal, la sensibilité et la reproductibilité tout en réduisant le bruit au strict minimum.

Le protocole d’essai ELISA en sandwich ou par compétition ainsi développé est ensuite soumis à divers ajustements afin d’optimiser les paramètres suivants par rapport à l’antigène :

  • La concentration de la paire d’anticorps
  • La concentration du diluant
  • La concentration de l’enzyme conjuguée
  • La concentration du tampon
  • L’intensité/justesse du signal
  • La méthode de blocage

Validation de l’essai

Le processus de développement de l’essai ELISA se termine par la validation de l’essai avec les échantillons biologiques cibles afin de s’assurer que celui-ci permet effectivement de détecter la ou les protéines cibles endogènes. La validation de l’essai apporte également la véritable assurance de la cohérence entre la détection de la cible endogène et celle de la protéine/peptide recombinant développé.

Production pilote du kit ELISA

Une fois l’essai complètement développé et validé, nous vous demandons votre accord pour lancer la production pilote du kit. Avec la même rigueur adoptée dans toutes les procédures du développement de l’essai, nous vous livrons tous les réactifs nécessaires complètement développés et optimisés pour faciliter l’utilisation de l’essai dans votre laboratoire. Nous pouvons vous livrer quelques douzaines ou centaines de kits prêts à l’emploi, avec des plaques présensibilisées et tous les réactifs nécessaires.

Pourquoi choisir les services de développement d’essais à façon de ProteoGenix ?

  • Une solution tout-en-un de la synthèse des gènes à la livraison des kits pilotes
  • Des services garantis de développement de kits d’ELISA en sandwich à façon adaptés à vos applications
  • Des prix ultra-compétitifs et des formules de développement complet d’essais à façon
  • Des délais d’exécution garantis de seulement 8 mois de la synthèse des gènes à la livraison des kits pilotes d’ELISA en sandwich
  • Une assistance globale de nos experts en développement de kits d’ELISA en sandwich et par compétition à façon
  • La meilleure expertise en essais ELISA du marché

Travaillons ensemble à la réussite de votre projet de recherche.

Avec nos équipements à la pointe de la technologie, nos scientifiques hautement qualifiés et expérimentés et une réputation qui précède notre nom, nous nous engageons à ne vous fournir que les meilleurs services de développement d’essais à façon, le tout au juste prix et avec des garanties exceptionnelles, des contrôles de qualité de bout en bout et des délais d’exécution réduits.

Un pas dans la bonne direction vous en épargne cent dans la mauvaise. Alors, laissez nous nous charger du développement et de la validation de vos essais à façon, pour que vous puissiez pousser vos travaux de recherche encore plus loin.

Cliquez sur « Nous contacter » à droite, pour nous joindre, nous poser des questions ou demander un devis. Voyez ci-après comment nos services de développement d’essais à façon peuvent renforcer la rentabilité de votre projet.

Notre expertise en développement de kits d’ELISA en sandwich

Ayant développé des centaines d’essais depuis 2003, ProteoGenix a acquis une grande expertise dans une grande variété de domaines. Nos services se démarquent de ceux de la concurrence par les points suivants :

  • Nous développons des essais de toutes pièces (le numéro d’accès de la cible nous suffit)
  • Nous proposons des solutions d’essai à façon de bout en bout, de la synthèse des gènes à la livraison des kits pilotes
  • Toutes nos procédures intrinsèques sont régies par de stricts contrôles de qualité
  • Nous avons une expérience avec des cibles uniques en leur genre et des tests à haute performance/haute sensibilité

Chez ProteoGenix, nous bénéficions d’une équipe d’excellents scientifiques avec une solide expérience de la recherche et de l’industrie. Nous possédons une expertise incomparable en biologie moléculaire, ingénierie des protéines, anticorps et immunologie et synthèse de peptides.

Pourquoi faire développer un essai à façon ?

Même si ProteoGenix offre un certain nombre de services de test ELISA à usages multiples, tels que des ELISA directs, indirects, en sandwich et par compétition, le développement d’un essai sur-mesure apparaît souvent comme la meilleure solution lorsque vous avez besoin d’un kit pour la production ou la validation pour des projets impliquant des cibles ou des marqueurs très spécifiques. Nous travaillons avec des techniques automatisées d’ELISA en sandwich ou par compétition pour développer les solutions les mieux adaptées à votre cas. Selon la sensibilité et la technologie demandée, nous pouvons développer des essais colorimétriques ou fluorescents.
Nos services comprennent le développement d’essais pour la découverte de médicaments, le diagnostic et la recherche.

Développement d’essais à façon de ProteoGenix :

Aperçu des services de développement d’essais à façon de ProteoGenix

Pour avoir servi de longue date la communauté de la recherche publique et privée, nous savons ce dont vous avez besoin pour vous aider dans vos travaux. Nous avons mis au point un système complet de développement d’essai à façon pour vous soulager du stress des problèmes de validation et de reproductibilité des résultats.

PRINCIPALES CARACTÉRISTIQUES

  • Des garanties de réussite inégalées
  • La définition d’une stratégie de développement d’essai parfaitement adaptée à vos objectifs de recherche
  • Une grande variété de formats d’essai
  • Un haut degré d’adaptabilité pour se conformer au plus près des spécifications du biomarqueur (ou de son numéro d’accès) que vous nous fournissez.
  • La découverte de biomarqueurs par des études d’interaction ADN-protéine (système de simple hybride dans la levure)
  • Une formule tout compris de la synthèse des gènes à la livraison des kits pilotes
  • Des prix ultra-compétitifs, sans frais cachés
  • Une assistance complète après la livraison de notre équipe de scientifiques expérimentés

CONTENU DE NOS SERVICES DE DÉVELOPPEMENT D’ESSAIS À FAÇON

  • La définition d’une stratégie complète de développement de l’essai
  • La projection des délais pour la totalité du projet
  • Le développement de l’essai à façon, de la synthèse des gènes à la livraison des kits pilotes (ELISA en sandwich, par compétition ou autre)
  • La validation de l’essai
  • La livraison de tous les réactifs
  • Une assistance pour le transfert de l’essai
  • Une documentation
  • Une assistance pour la mise en œuvre
  • Un contrôle approfondi de la qualité
  • La livraison des kits pilotes

Développement d’essais à façon :

principaux domaines d’application

Le meilleur moyen de décider si votre projet requiert un essai spécialement développé ou un kit standard du commerce est d’évaluer :

  • l’unicité de votre cible,
  • la qualité des kits existants,
  • la capacité des kits existants à satisfaire vos spécifications en matière de sensibilité, de format de l’essai, de la spécificité vis-à-vis des espèces et de la réactivité croisée,
  • le besoin d’avoir votre propre essai pour créer un avantage compétitif vis-à-vis de vos concurrents et réduire les risques de copie.

Si vous ne parvenez pas à prendre une décision, n’hésitez pas à nous contacter, nous serons heureux de vous conseiller.

Principaux domaines d’application du développement d’essais à façon :

  • Biomarqueurs pour la découverte et le développement de médicament
  • Immunoessais pour la détermination de l’efficacité des vaccins
  • Surveillance de l’administration de médicaments
  • Développement de kits de diagnostic et de pronostic
  • Développement et optimisation de procédés
  • Recherche fondamentale publique et privée
  • Validation de l’expression de cibles sur différentes lignées cellulaires ou dans des extraits cellulaires
  • Bioessais pour l’analyse de l’eau et des aliments
  • Criblage avancé de la toxicité
  • Contrôle des procédés industriels
  • Analyse d’échantillons environnementaux

Développement d’un test ELISA en sandwich :

Étude de cas

Ce travail de développement d’un test de détection d’un biomarqueur est représentatif de notre travail de développement d’essai à façon.

OBJECTIFS : IDENTIFICATION D’UN BIOMARQUEUR DES STADES PRÉCOCES DU CANCER DE LA PROSTATE ET DÉVELOPPEMENT D’UN KIT DE DÉTECTION DE CE BIOMARQUEUR PAR ELISA EN SANDWICH

L’objectif de ce projet était de développer et d’optimiser un test de détection de niveaux élevés d’un biomarqueur des stades précoces du cancer de la prostate précédemment identifié. La population de donneurs de sérum pour la validation comprenait des hommes sains, des patientes atteintes du cancer du sein et des individus cibles, à savoir des individus atteints du cancer de la prostate.

DÉCOUVERTE DU BIOMARQUEUR

Un protocole de criblage OHS standard a été mis en œuvre pour identifier les régulateurs d’une cible protéique commune d’agents anticancéreux. Le principe de fonctionnement d’un crible OHS est illustré dans la figure 1.

Principe du système OHS

Identification in vivo d’une protéine de liaison à l’ADN grâce à sa fusion à GAL4-AD permettant l’activation d’un gène rapporteur

DÉVELOPPEMENT D’UN PROTOCOLE D’ELISA EN SANDWICH POUR LE BIOMARQUEUR CIBLE

Nous avons développé un protocole d’ELISA en sandwich pour le biomarqueur découvert par le criblage OHS réalisé dans la phase préliminaire du projet. Ce développement a été réalisé en plusieurs étapes :

  • Production d’une chaîne recombinante de la protéine cible en volumes suffisants et au-dessus du seuil de pureté.
  • Développement de 10 anticorps monoclonaux de forte affinité en système d’hybridome.
  • Production, purification et couplage des 10 anticorps monoclonaux développés et caractérisés
  • Test de 90 paires d’anticorps pour déterminer la meilleure paire.
  • Développement et optimisation d’un protocole d’ELISA en sandwich de sorte à atteindre un seuil de sensibilité suffisant pour détecter la cible dans le sérum des patients.
  • Évaluation de la meilleure paire d’anticorps sur des échantillons biologiques marqués d’une population suffisamment grande de donneurs (donneurs sains et cancéreux).
  • Cartographie épitopique suivie par le développement d’un système de banque de cellules à deux niveaux comprenant une banque de cellules mère (Master Cell Bank, MCB) et une banque de cellules de travail (Working Cell Bank, WCB).

DONNÉES EXPÉRIMENTALES : DÉTERMINATION DE LA MEILLEURE PAIRE D’ANTICORPS POUR L’ELISA EN SANDWICH

L’expérience d’appariement d’anticorps décrite à l’étape 4 a permis d’obtenir un ensemble de données très fiables qui ont été tabulées,

représentées graphiquement (graphique 1) et analysées de façon empirique pour déterminer la paire d’anticorps la plus appropriée.

GRAPHIQUE 1 : DÉTERMINATION DE LA MEILLEURE PAIRE D’ANTICORPS POUR L’ELISA EN SANDWICH

Parmi les 90 paires d’anticorps testées, la représentation graphique révèle clairement que les meilleurs appariements sont formés par les anticorps de détection 48 et 58 avec l’anticorps de capture 17. Parmi ces deux candidats, la paire anticorps de détection 58 et anticorps de capture 17 a finalement été sélectionnée en raison de la plus grande reproductibilité de son appariement.

DONNÉES EXPÉRIMENTALES : OPTIMISATION DE L’ELISA EN SANDWICH

Après avoir déterminé la meilleure paire d’anticorps, nous avons développé et optimisé un protocole de détection pour l’ELISA en sandwich. Cela a impliqué le choix de tampons de blocage et la détermination de leur mode d’utilisation, la détermination des temps d’incubation, des dilutions des anticorps et d’autres paramètres.

Des échantillons sanguins d’un individu sain ont été dopés avec des concentrations connues du biomarqueur. Ces échantillons ont ensuite été testés avec le protocole d’ELISA développé. Le graphique 2 représente les densités optiques mesurées (OD) de ces échantillons en fonction des concentrations correspondantes du biomarqueur. La courbe ainsi obtenue est d’une fiabilité suffisante pour être utilisée comme courbe étalon dans le protocole d’ELISA développé pour la détection du biomarqueur. Le seuil de détection du biomarqueur ainsi mesuré dans les échantillons sanguins est inférieur à 0,2 ng/ml.

GRAPHIQUE 2 : DÉTERMINATION DU SEUIL DE DÉTECTION DU BIOMARQUEUR DANS DES ÉCHANTILLONS SANGUINS

Conclusion : ce protocole optimisé d’ELISA en sandwich permet de détecter le biomarqueur à une concentration ≤ 0,2 ng/ml dans des échantillons sanguins de patients.

DONNÉES EXPÉRIMENTALES : ÉVALUATION DU TEST ELISA EN SANDWICH À FAÇON SUR DES ÉCHANTILLONS BIOLOGIQUES

Le protocole d’ELISA en sandwich à façon a été évalué avec des échantillons sanguins de donneurs sains, de patientes atteintes de cancer du sein et de patients atteints de cancer de la prostate. Le protocole d’ELISA optimisé a été utilisé pour déterminer le taux du biomarqueur spécifique du cancer de la prostate dans les échantillons par rapport au taux de PSA.

Comme illustré dans le graphique 3, le protocole développé par ProteoGenix permet de détecter des taux élevés du biomarqueur spécifique du cancer de la prostate chez les patients atteints du cancer de la prostate et donc de distinguer ces patients des sujets non atteints de cancer de la prostate (donneurs sains et patientes atteintes de cancer du sein). Cette distinction était beaucoup plus claire et concluante qu’avec le dosage du PSA.

GRAPHIQUE 3 : DÉTERMINATION DU TAUX DE BIOMARQUEUR SPÉCIFIQUE DU CANCER DE LA PROSTATE DANS DES ÉCHANTILLONS SANGUINS DE SUJETS SAINS ET DE PATIENTS ATTEINTS DU CANCER DE LA PROSTATE (ELISA EN SANDWICH)

Une augmentation très importante du taux du biomarqueur spécifique du cancer de la prostate est détectée chez les patients atteints de cancer de la prostate.

CONCLUSION

Cette étude de cas illustre comment un essai développé spécifiquement pour un projet de recherche, une tâche longue et fastidieuse, peut constituer un formidable atout pour les chercheurs. La sous-traitance du développement d’un tel essai vous permet de gagner un temps précieux et d’économiser votre énergie et vos ressources.

Principe de l’ELISA en sandwich

L’ELISA en sandwich est une technique qui peut être utilisée pour détecter une protéine (en bleu dans le schéma ci-dessous) dans différents types d’échantillon, tels que des échantillons sanguins, au moyen d’une paire d’anticorps dirigés spécifiquement contre cette protéine. Le premier anticorps, l’anticorps de capture (en vert) est adsorbé sur le plastique du fond des puits d’une plaque à 96 puits. Après application de l’échantillon à tester et lavage pour éliminer les molécules non liées, le deuxième anticorps, l’anticorps de détection (en rouge) est appliqué. La protéine cible se trouve ainsi prise en sandwich entre les deux anticorps. L’anticorps de détection peut être directement couplé à la biotine, la HRP ou l’AP (en jaune) ou, si l’anticorps de détection est d’une espèce différente de celle de l’anticorps de capture, il est également possible d’utiliser un anticorps secondaire couplé pour générer le signal de détection.