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¿Está trabajando con una nueva diana y no existe un kit ELISA? ¿Quiere detectar un objetivo a concentraciones muy bajas? ¡Es el momento de probar nuestro servicio de desarrollo de ensayos ELISA! Con más de 1500 anticuerpos producidos, nuestra experiencia única en desarrollo de anticuerpos y diseño de ELISAs es la mejor garantía para obtener el ensayo ELISA más específico y sensible.
Un ejemplo ideal de los resultados que puede esperar de este tipo de informe.
Este completo informe incluye:
Le garantizamos que su ensayo ELISA funcionará según sus requisitos.
Nuestro incomparable know-how en generación de anticuerpos es nuestra mejor herramienta para ofrecer ensayos ELISA muy sensibles y específicos.
Obtiene acceso a nuestra experiencia y capacidades técnicas únicas en diseño de ensayos ELISA para diversas aplicaciones.
Como el desarrollo de un ensayo ELISA es altamente técnico, ponemos a su disposición gestores de cuentas PhD para guiarle a lo largo del proceso.
Benefíciese de la experiencia de un líder en la producción de anticuerpos y de las tecnologías de generación de anticuerpos más avanzadas: desarrollo de hibridomas, phage display…
Desde síntesis génica hasta el desarrollo de kits ELISA
Le garantizamos la entrega del antígeno y un par de anticuerpos que detectarán su diana en sus muestras. Al final del proceso, le proporcionamos muestras de los anticuerpos y del antígeno para verificar la conformidad respecto a las especificaciones iniciales. Si está satisfecho, paga el importe total. En caso contrario, solo cobramos el 50% del coste total si hemos sido capaces de desarrollar un ELISA sandwich contra el antígeno. Por tanto, asumimos la mayor parte del riesgo de su proyecto de I+D o diagnóstico.
Tras haber ayudado a numerosas empresas, laboratorios y científicos individuales con nuestros servicios personalizados de desarrollo de ensayos ELISA, hemos establecido y perfeccionado un proceso exhaustivo de desarrollo de ensayos a medida, que tiene en cuenta cada aspecto de su investigación para proporcionar soluciones de ensayo adaptadas para investigación, CE o IVD. Este es el esquema de nuestros servicios personalizados de ensayo:
Una vez determinado que los kits ELISA, los sandwich ELISA o los pares de anticuerpos existentes no satisfacen sus requisitos (especificidad, sensibilidad, reactividad cruzada, etc.), diseñamos una estrategia totalmente personalizada para el desarrollo de ensayos, en consulta con usted. Este es un paso fundamental que determina el éxito del proyecto. Existen muchas estrategias para desarrollar un ensayo que cumpla requisitos específicos y cada etapa del proceso es crítica.
Una vez determinado que los kits ELISA, los sandwich ELISA o los pares de anticuerpos existentes no son suficientes para cumplir con sus requisitos (especificidad, sensibilidad, reactividad cruzada, etc.), diseñamos una estrategia completamente personalizada para el desarrollo de ensayos, en consulta con usted. Este es un paso clave que determina el éxito del proyecto. Hay muchas estrategias para desarrollar un ensayo que cumpla requisitos específicos y cada paso del proceso es fundamental.
Nuestra estrategia de desarrollo personalizado del ensayo comienza con la síntesis de cDNA de doble cadena. Con controles de calidad mejorados para guiar nuestro sistema, garantizamos una secuenciación precisa al 100%, con una eficiencia global superior al 99,9%. Mejoramos aún más nuestro protocolo de síntesis génica con una ronda de mutagénesis génica para eliminar posibles errores. A lo largo de los años, hemos ganado una sólida reputación como uno de los mejores proveedores de servicios para la producción de reactivos personalizados a partir de una optimización y síntesis génica precisa. La optimización y el diseño de la construcción génica son muy importantes para producir, en el siguiente paso, el antígeno más adecuado.
La producción precisa de cadenas de proteínas recombinantes o péptidos con suficiente rendimiento para continuar el desarrollo posterior de anticuerpos es un paso clave para el desarrollo personalizado de ensayos. Gracias a nuestra amplia experiencia, aseguramos que el desarrollo de nuestros ELISA competitivos personalizados, ELISA sandwich personalizados u otros formatos, se fundamenta en anticuerpos producidos a partir de antígenos obtenidos eficientemente y de alta pureza. La producción de proteína/péptido, en función de los objetivos y requisitos de su investigación, también se puede expresar en los sistemas más adecuados, incluyendo E.coli, B.subtilis, levaduras, células de insecto (baculovirus) y células de mamífero, para diversificar los procedimientos posteriores del desarrollo del ensayo. Si fuera necesario, nuestro equipo de científicos también expresará proteínas o péptidos recombinantes en todos estos sistemas en paralelo, encontrando así las mejores condiciones de expresión y mejorando la validez de los anticuerpos utilizados en los ensayos personalizados.
Prestamos especial atención al desarrollar anticuerpos primarios a partir del antígeno generado en el paso anterior. Como bien sabe, este es quizás el proceso más sensible en el desarrollo de ensayos personalizados, por lo que, a lo largo de los años, hemos desarrollado una experiencia incomparable en anticuerpos monoclonales y policlonales. Además de las técnicas y equipos de vanguardia, cabe destacar que todas nuestras instalaciones animales cumplen los más altos estándares éticos.
Tras la producción satisfactoria de anticuerpos primarios, activamos nuestros servicios analíticos. Antes de la conjugación, ofrecemos tres técnicas avanzadas sin marcador para la medición de la afinidad anticuerpos-antígeno:
El siguiente paso en el desarrollo personalizado de ensayos es la conjugación de anticuerpos. Gracias a la pureza de los anticuerpos producidos en el paso anterior, podemos garantizar que el resultado final de la conjugación de anticuerpos no contendrá cadenas proteicas extrañas ni grupos aminas libres que puedan interferir en el proceso. Utilizando las técnicas más modernas y varios métodos de marcado, no dejamos nada al azar para culminar adecuadamente este paso clave para el desarrollo de ensayos precisos.
En paralelo con los procesos de desarrollo de anticuerpos primarios (ver paso 5), determinamos y seleccionamos el mejor par de anticuerpos (anticuerpo de recubrimiento y de detección) para el ensayo ELISA sandwich personalizado. Realizamos al menos 90 tests de emparejamiento para asegurar la selección del par óptimo. La precisión de un kit ELISA sandwich depende totalmente de la selección correcta de los pares, por eso es importante elegir un proveedor experimentado como ProteoGenix que domina todo el proceso, desde la síntesis génica hasta la producción piloto de kits.
En función de la singularidad del antígeno diana y de la sensibilidad requerida, procedemos a desarrollar un protocolo ELISA totalmente optimizado (ELISA sandwich, ELISA competitivo u otro formato). El desarrollo del protocolo lleva el proyecto hacia su finalización. El propósito de esta etapa es optimizar la señal, sensibilidad y reproducibilidad, mientras se reduce el ruido/fondo al mínimo.
El protocolo personalizado desarrollado es sometido a varias optimizaciones para los siguientes aspectos frente al antígeno:
Al final del proceso de desarrollo personalizado de ELISA, el ensayo es validado en las muestras biológicas designadas para asegurar que la detección de las proteínas endógenas es exitosa. La validación proporciona la garantía de que la detección obtenida es consistente con la proteína/péptido recombinante desarrollado.
Una vez que el ensayo personalizado está completamente desarrollado y validado, pedimos la aprobación del cliente para proceder con la producción piloto de kits. Siguiendo nuestro enfoque exhaustivo, entregamos los reactivos necesarios completamente desarrollados y optimizados para favorecer el uso del ensayo personalizado en su laboratorio. Finalmente entregamos docenas o cientos de kits listos para usar, incluyendo placas pre-recubiertas y todos los reactivos necesarios para realizar las pruebas.
“Estamos encantados con el éxito alcanzado junto a ProteoGenix en el desarrollo de anticuerpos monoclonales dirigidos a nuestra proteína. Los anticuerpos producidos no solo fueron altamente selectivos, sino que también demostraron una afinidad excepcional por nuestro objetivo, lo que impulsó significativamente nuestra investigación. ProteoGenix nos impresionó por su eficiencia y rapidez durante todo el proceso. Su compromiso con un excelente servicio de atención al cliente hizo nuestra experiencia aún mejor, ya que siempre estuvieron disponibles para responder a nuestras dudas e inquietudes. Recomendamos ampliamente a ProteoGenix a quienes necesiten desarrollo de anticuerpos de alta calidad.”
Verónica Alcolea, Directora de Desarrollo de Producto, Telum Therapeutics, España
Hay muchos factores a tener en cuenta al elegir la técnica ELISA más adecuada para su proyecto. Estos son algunos de los elementos que debe considerar antes de tomar la decisión:
Como líder en producción de anticuerpos, ProteoGenix es capaz de desarrollar todo tipo de ensayos ELISA, sea cual sea su necesidad. Si quiere saber más sobre nuestro servicio de desarrollo de ensayos ELISA o si tiene dudas sobre el formato más adecuado, no dude en contactar a nuestros gestores de cuenta PhD.
En el ELISA directo, el antígeno proteico se adsorbe de forma inespecífica al pocillo y se lava para eliminar el antígeno no adsorbido. A continuación, el antígeno se detecta directamente mediante un anticuerpo marcado.
Existen dos ventajas principales al usar ELISA directo respecto a otras técnicas ELISA:
Sin embargo, también existen desventajas como:
En el ELISA indirecto, la proteína se adsorbe de forma inespecífica al pocillo. Se denomina así porque el antígeno se detecta de manera indirecta utilizando un anticuerpo secundario. Así, la detección ocurre en dos pasos. En el primero, se añade un anticuerpo sin marcar específico para el antígeno. Luego, se incorpora un anticuerpo secundario (policlonal o monoclonal) que detecta al primario.
Las principales ventajas de usar ELISA indirecto son:
Sin embargo, el ELISA indirecto también tiene inconvenientes:
El ELISA sandwich difiere del directo e indirecto en que un anticuerpo de captura se fija al plato en vez del antígeno. Un ELISA sandwich se basa en pares de anticuerpos emparejados. Un par de anticuerpos emparejado consta de dos anticuerpos: el primero se usa como reactivo de captura y se recubre directamente en la placa; el segundo se utiliza como reactivo de detección. Es importante que cada uno de estos anticuerpos reconozca distintos epítopos del mismo antígeno. Se pueden utilizar tanto la detección directa como indirecta en ELISA sandwich. El ELISA sandwich directo utiliza un anticuerpo primario marcado como reactivo de detección, mientras que el ELISA indirecto usa un anticuerpo secundario marcado.
ELISA sandwich ofrece varias ventajas respecto a otras técnicas ELISA:
Gracias al uso de dos anticuerpos primarios, cada uno dirigido a un epítopo diferente del mismo antígeno, el ELISA sandwich es altamente específico.
El ELISA sandwich proporciona una sensibilidad incluso mayor que el ELISA indirecto debido a que el anticuerpo de captura solo reconoce el antígeno de interés. Todas las entidades no deseadas son eliminadas, lo que permite una detección sensible y precisa del antígeno de interés.
Sin embargo, el ELISA sandwich requiere dos anticuerpos que reconozcan epítopos diferentes del mismo antígeno. Por tanto, puede ser necesario un desarrollo de anticuerpos a medida.
El ELISA competitivo es una técnica compleja especialmente adecuada para antígenos pequeños. Se utiliza principalmente para medir la concentración de un antígeno (o anticuerpo) en una muestra. El principio es detectar interferencias en la señal producida por la competición entre el antígeno (o anticuerpo) de la muestra y una referencia marcada (antígeno o anticuerpo). Como la señal la genera la referencia marcada, la regla es: “cuanto menor la señal, mayor la concentración del analito en la muestra”.
El ELISA competitivo puede basarse en ELISA directo, indirecto o sandwich. Por tanto, sus ventajas y desventajas dependen de la técnica seleccionada.
Con equipos de máxima calidad, científicos altamente calificados y experimentados, y una reputación que nos precede, en ProteoGenix estamos totalmente comprometidos a ofrecerle los mejores servicios de desarrollo de ensayos personalizados – todo a un precio justo, con garantías extensas, control de calidad de principio a fin y plazos de entrega rápidos.
Un paso correcto ahorra cien equivocados. Permítanos encargarnos del desarrollo y validación de ensayos personalizados, para que usted lleve su investigación todavía más lejos.
Haga clic en ‘Contáctanos’ a la derecha para contactarnos, hacernos preguntas o solicitar un presupuesto. Siga leyendo para descubrir cómo nuestros servicios de desarrollo de ensayos personalizados pueden aportar eficiencia, tiempo y rentabilidad a su proyecto.
Tras haber desarrollado cientos de ensayos desde 2003, en ProteoGenix hemos establecido una gran experiencia en múltiples campos. Estas son las áreas en las que destacamos frente a otros proveedores de ensayos personalizados:
Desarrollo de ensayos personalizados desde cero (número de acceso de la diana)
Soluciones integrales de ensayo personalizado, desde síntesis génica hasta entrega de kits piloto
Todos los procesos guiados por estrictas normas de control de calidad
Experiencia en objetivos únicos y pruebas de alto rendimiento/alta sensibilidad
En ProteoGenix, contamos con un equipo de científicos eminentes con destacadas trayectorias académicas, de investigación e industria. Con esta experiencia, poseemos conocimientos incomparables en biología molecular, ingeniería de proteínas, anticuerpos e inmunología y síntesis de péptidos.
Aunque ProteoGenix ofrece múltiples servicios personalizados de ELISA, incluyendo ensayos directos, indirectos, sandwich y competitivos, el desarrollo personalizado suele ser la mejor solución cuando se requieren kits para targets o marcadores muy específicos. Utilizamos técnicas de ELISA sandwich y competitivo automatizadas para ofrecerle la solución óptima. Según la sensibilidad y la tecnología requerida, podemos desarrollar ensayos colorimétricos o fluorescentes.
Nuestros servicios incluyen tanto el desarrollo para el drug discovery como para propósitos diagnósticos o de investigación.
Con un compromiso duradero con la comunidad investigadora académica e industrial en todo el mundo, en ProteoGenix sabemos lo que se necesita para complementar de manera sinérgica las incontables horas que dedica a su investigación. Con esto en mente, desarrollamos un sistema de desarrollo personalizado de ensayos que le aliviará de la presión de la validación y repetición de resultados.
Garantía de éxito inigualable
Diseño de la estrategia de desarrollo de ensayos adaptada a sus objetivos de investigación
Gran variedad de formatos de ensayo
Alto grado de personalización, de acuerdo con el número de acceso o especificaciones del biomarcador que nos proporcione
Descubrimiento de biomarcadores mediante estudios de interacción ADN-proteína (Yeast one-hybrid-system)
Paquete integral, desde la síntesis génica hasta la entrega de kits piloto
Costes competitivos, sin tarifas ocultas
Soporte post-entrega completo de nuestro equipo de científicos expertos
La singularidad de la diana en cuestión.
La calidad de los kits existentes.
La capacidad del kit existente para cumplir sus requisitos en términos de sensibilidad, formato de ensayo, especificidad de especie o reactividad cruzada.
La necesidad de tener su propio ensayo para crear una ventaja competitiva frente a los competidores y reducir el riesgo de copia.
Si no puede decidir, no dude en contactarnos y estaremos encantados de asesorarle.
Aquí presentamos algunas de las áreas de aplicación más habituales donde el desarrollo de ensayos personalizados es clave:
La mejor manera de demostrar nuestra experiencia en desarrollo personalizado de ensayos es compartir un caso representativo de biomarcador desarrollado por nosotros.
El objetivo de este proyecto fue desarrollar y optimizar un ensayo para detectar altos niveles de un biomarcador específico de la fase inicial de cáncer de próstata previamente identificado. El conjunto de muestras de suero para la validación incluía individuos sanos, pacientes con cáncer de mama y pacientes con cáncer de próstata.
Se utilizó el protocolo OHS estándar para identificar los reguladores de una proteína diana común de fármacos antitumorales. La siguiente figura (FIGURA 1) ilustra el principio básico del cribado OHS.
Principio del sistema OHS
Identificación in vivo de proteínas de unión a ADN gracias a la fusión con GAL4-AD y activación de un gen reportero
Los pasos detallados a continuación se siguieron para desarrollar un protocolo ELISA sandwich para el biomarcador encontrado en el screening OHS al inicio del desarrollo personalizado de ensayos.
Como puede observarse claramente, el anticuerpo de detección 4B y el 5B presentan un emparejamiento excelente con el anticuerpo de recubrimiento 17. Entre ambos, la combinación 5B/17 resultó consistentemente superior. Así, el análisis empírico de más de 90 pares permitió identificar la mejor combinación.
Una vez determinado el mejor par de anticuerpos, se diseñó un protocolo de detección específicamente optimizado mediante ELISA sandwich, seleccionando tampones de bloqueo, tiempos de incubación, diluciones y otros parámetros ideales.
La siguiente gráfica (GRÁFICA 2) muestra los valores de concentración frente a OD, generando una curva empírica fiable para extrapolaciones futuras del protocolo completo para este biomarcador.
GRÁFICA 1: DETERMINACIÓN DEL MEJOR PAR PARA ELISA SANDWICH
Como se puede observar, el anticuerpo de detección 4B y el 5B muestran un emparejamiento especialmente bueno con el de recubrimiento 17. Entre estos dos, el par 5B/17 resulta el más fiable. Así, el análisis empírico y experimental de más de 90 pares permitió identificar la combinación óptima.
Una vez determinado el mejor par, se generó un protocolo específicamente optimizado, seleccionando el tampón de bloqueo, los tiempos y diluciones idóneos, etc.
La siguiente gráfica (GRÁFICA 2) traza los valores de concentración respecto a la OD, generando una curva empírica fiable para uso futuro como parte del protocolo completo para este ensayo.
GRÁFICA 2: DETERMINACIÓN DEL UMBRAL DE DETECCIÓN EN MUESTRAS DE SANGRE
Conclusión: este protocolo ELISA sandwich optimizado permite detectar el biomarcador a concentraciones ≤0,2 ng/ml en sangre de pacientes.
La evaluación del protocolo ELISA sandwich personalizado se realizó mediante muestras de sangre de donantes sanos, pacientes con cáncer de mama y pacientes con cáncer de próstata. El protocolo optimizado se empleó para cuantificar los niveles del biomarcador frente a PSA.
La siguiente gráfica (GRÁFICA 3) ilustra los altos niveles del biomarcador de próstata detectados en pacientes con cáncer de próstata, permitiendo la discriminación clara entre pacientes sanos y oncológicos. Esta discriminación es mucho más evidente usando este biomarcador que PSA.
GRÁFICA 3: DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO ESPECÍFICO DE PRÓSTATA EN MUESTRAS DE SANGRE SANAS Y ONCOLÓGICAS (ELISA SANDWICH)
Se detecta un aumento considerable del biomarcador específico de próstata en pacientes oncológicos
Este caso práctico demuestra mucho más que datos y cifras. Avances de este tipo y la capacidad de personalizar el proceso de desarrollo del ensayo – de manera exhaustiva y precisa – son un valor fundamental para los investigadores. El desarrollo personalizado de ensayos no solo brinda soluciones adaptadas a sus proyectos, también ahorra un tiempo y recursos valiosos que, de otro modo, tendría que invertir en adaptar ensayos estandarizados.
ELISA sandwich es habitualmente un método para determinar una proteína (en azul en el gráfico inferior) en distintos tipos de muestras como el suero, usando un par de anticuerpos. El anticuerpo de captura (verde) se fija al plástico de una placa de 96 pocillos, mientras que el de detección (rojo) permite generar la señal. En un ELISA sandwich, el anticuerpo de detección puede estar directamente conjugado a biotina, HRP o AP (amarillo), pero también puede emplearse un anticuerpo secundario conjugado si el de recubrimiento proviene de una especie diferente.
