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Sie arbeiten an einem neuen Target und es existiert kein ELISA-Kit? Sie versuchen, ein Zielmolekül in sehr geringer Konzentration nachzuweisen? Dann ist es Zeit, unseren ELISA-Assay-Entwicklungsservice zu nutzen! Mit über 1.500 produzierten Antikörpern sind unsere einzigartige Erfahrung in der Antikörperentwicklung und unser Know-how im ELISA-Design Ihre beste Garantie für den spezifischsten und sensitivsten ELISA-Assay!
Ein ideales Beispiel für die Einblicke, die Sie aus einem solchen Bericht erwarten können
Dieser umfassende Bericht enthält:
Wir garantieren, dass Ihr ELISA-Assay gemäß Ihren Anforderungen funktioniert.
Unser unvergleichliches Know-how in der Antikörpergenerierung ist das beste Werkzeug, um hochsensitive und spezifische ELISA-Assays anzubieten.
Profitieren Sie von unserer einzigartigen Expertise und technischen Fähigkeiten im Design von ELISA-Assays für verschiedene Anwendungen.
Da die Entwicklung eines ELISA-Assays sehr technisch ist, stehen Ihnen promovierte Account Manager zur Verfügung, die Sie im gesamten Prozess beraten.
Profitieren Sie von der Erfahrung eines Marktführers in der Antikörperproduktion und von allen aktuellen Technologien: Hybridoma-Entwicklung, Phagen-Display…
Von der Gensynthese bis zur Entwicklung des ELISA-Kits
Wir garantieren die Bereitstellung des Antigens und eines Antikörperpaares, das Ihr Zielantigen in Ihren Proben detektiert. Am Ende des Prozesses erhalten Sie Proben der Antikörper und des Antigens, um die Übereinstimmung mit den ursprünglichen Spezifikationen zu überprüfen. Wenn Sie zufrieden sind, zahlen Sie den Gesamtbetrag. Andernfalls berechnen wir nur 50% der Gesamtkosten, falls wir es geschafft haben, einen Sandwich-ELISA gegen das Antigen zu entwickeln. So übernehmen wir den Großteil des Risikos für Ihr F&E- oder Diagnostikprojekt.
Nachdem wir zahlreiche Unternehmen, Labors und Forschende mit unseren benutzerdefinierten ELISA-Assay-Entwicklungsservices unterstützt haben, konnten wir ein umfassendes, individuell adaptierbares Assay-Entwicklungsverfahren etablieren und optimieren, das jeden Aspekt Ihrer Forschung berücksichtigt und adaptive Assay-Lösungen für Forschung, CE- oder IVD-Anwendungen liefert. Hier ist der Ablauf unserer individuellen Assay-Services:
Sobald wir festgestellt haben, dass bestehende ELISA-Kits, Sandwich-ELISAs oder Antikörperpaare Ihre Anforderungen (Spezifität, Sensitivität, Kreuzreaktivität usw.) nicht erfüllen, entwickeln wir eine vollständig maßgeschneiderte Strategie zur Assay-Entwicklung in enger Abstimmung mit Ihnen. Dieser Schritt ist entscheidend für den Erfolg des Projekts. Es gibt viele Strategien, um einen Assay zu entwickeln, der spezielle Anforderungen erfüllt, und jeder Schritt ist kritisch.
Nachdem wir festgestellt haben, dass vorhandene ELISA-Kits, ELISA-Sandwiches oder Antikörperpaare nicht ausreichen, um Ihre Anforderungen zu erfüllen (Spezifität, Sensitivität, Kreuzreaktivität usw.), entwerfen wir eine maßgeschneiderte Strategie für die Assay-Entwicklung in enger Abstimmung mit Ihnen. Dieser Schritt ist ausschlaggebend für den Erfolg des Projekts. Es gibt viele mögliche Strategien, um einen Assay zu entwickeln, der spezifische Anforderungen erfüllt, und jeder Schritt ist entscheidend.
Unsere Strategie zur individuellen Assay-Entwicklung beginnt mit der Synthese von doppelsträngiger cDNA. Mit erweiterten Qualitätskontrollen stellen wir 100% genaue Sequenzen und eine Gesamteffizienz von über 99,9% sicher. Die Gensynthese wird durch gezielte Mutagenese weiter optimiert. Unsere etablierten Protokolle garantieren einen erfolgreichen Start für die Herstellung individueller Reagenzien – beginnend bei der exakten Genoptimierung und -synthese. Eine optimierte Konstruktion ist essentiell, um im nächsten Schritt das am besten geeignete Antigen zu produzieren.
Die präzisionsorientierte Produktion rekombinanter Proteine oder Peptide mit ausreichender Ausbeute ermöglicht die anschließende Antikörperentwicklung. Unsere umfangreiche Expertise gewährleistet, dass die Entwicklung von Competitive-ELISA-, Sandwich-ELISA- oder anderen Assay-Formaten auf einer soliden Basis erfolgt – mit effizient produzierten, hochreinen Antigenen.
Die Protein-/Peptidproduktion kann je nach Projektanforderung und Zielsetzung in verschiedenen Expressionssystemen durchgeführt werden (z. B. in E.coli, B.subtilis, Hefe, Insektenzellen (Baculovirus), Säugerzellen). Um optimale Ergebnisse zu erzielen, können wir parallel alle Systeme testen.
Bei der Entwicklung der Primärantikörper aus dem zuvor generierten Antigen legen wir größten Wert auf Sorgfalt. Dies ist der sensibelste Schritt in der individuellen Assay-Entwicklung – mit herausragender Expertise in der Herstellung von monoklonalen und polyklonalen Antikörpern. Gleichzeitig erfüllen unsere Tierhaltungsräume höchste ethische Standards.
Nach erfolgreicher Herstellung der Primärantikörper werden analytische Methoden eingesetzt. Vor der Konjugation bieten wir drei fortschrittliche, markierungsfreie Techniken zur Messung der Antikörperaffinität an:
Der nächste Schritt ist die Konjugation der Antikörper. Dank der hohen Reinheit der Antikörper können wir garantieren, dass nach der Konjugation keine unerwünschten Proteinverunreinigungen zurückbleiben. Mit neuesten Verfahren und verschiedenen Markierungsmethoden gelingt uns ein optimaler Schritt für eine präzise Assay-Entwicklung.
In Abstimmung mit der Primärantikörperentwicklung (siehe Schritt 5) bestimmen und entwickeln wir das bestmögliche Antikörperpaar (Beschichtungs- und Detektionsantikörper) für den benutzerdefinierten Sandwich-ELISA-Assay. Mindestens 90 Paarungsmatches werden durchgeführt, um das geeignetste Antikörperpaar auszuwählen. Die Präzision eines Sandwich-ELISA-Kits hängt direkt vom erfolgreichen Matching ab. Setzen Sie auf einen erfahrenen Partner wie ProteoGenix, der den gesamten Prozess von der Gensynthese bis zur Kit-Pilotproduktion beherrscht.
Abhängig von der Einzigartigkeit des Zielantigens und der gewünschten Empfindlichkeit der Antikörper entwickeln wir ein vollständig optimiertes ELISA-Protokoll (Sandwich-ELISA, Competitive-ELISA oder anderes Format). Ziel ist die Optimierung von Signal, Sensitivität und Reproduzierbarkeit bei minimalem Hintergrund.
Das entwickelte Protokoll wird mehrfach angepasst, um folgende Parameter zu optimieren:
Zum Abschluss des Entwicklungsprozesses wird der kundenspezifische ELISA-Assay mit den bereitgestellten biologischen Proben validiert, um sicherzustellen, dass das gewünschte endogene Protein erfolgreich detektiert wird. Die Validierung bietet zusätzliche Gewissheit, dass die Zielstruktur sowohl im nativen als auch im rekombinanten Protein/Peptid erkannt wird.
Nach abgeschlossener Entwicklung und Validierung des kundenspezifischen Assays holen wir Ihre Zustimmung zur Pilotproduktion ein. Wir liefern Ihnen alle notwendigen Reagenzien in vollständig entwickeltem und optimiertem Zustand, sodass Sie den Assay direkt in Ihrem Labor verwenden können. Je nach Bedarf liefern wir Dutzende oder Hunderte gebrauchsfertige Kits inklusive vorbeschichteter Platten und allen notwendigen Reagenzien.
“Wir sind begeistert von unserem gemeinsamen Erfolg mit ProteoGenix bei der Entwicklung monoklonaler Antikörper gegen unser Protein. Die produzierten Antikörper waren nicht nur hochselektiv, sondern zeigten auch eine außergewöhnliche Affinität für unser Target und brachten unser Projekt entscheidend voran. ProteoGenix hat uns mit Effizienz und Geschwindigkeit beeindruckt. Ihr Engagement für exzellenten Kundenservice hat unsere Erfahrung noch besser gemacht, da sie stets verfügbar waren, um unsere Fragen und Anliegen zu beantworten. Wir empfehlen ProteoGenix jedem, der hochwertige Antikörperentwicklung benötigt.”
Verónica Alcolea, Product Development Manager, Telum Therapeutics, Spanien
Bei der Auswahl der geeigneten ELISA-Technik für Ihr Projekt gibt es viele Faktoren zu berücksichtigen. Hier einige Aspekte, die Sie vor Ihrer Entscheidung beachten sollten:
Als Marktführer in der Antikörperproduktion entwickelt ProteoGenix jede Form von ELISA-Assays, ganz nach Ihren Anforderungen. Möchten Sie mehr über unseren Service zur ELISA-Assay-Entwicklung erfahren oder haben Sie Fragen zum für Sie besten Format? Kontaktieren Sie gern unsere PhD Account Manager.
Beim direkten ELISA wird das Protein-Antigen unspezifisch an die Well-Platte gebunden und durch Waschen nicht-gebundenes Antigen entfernt. Anschließend wird das Antigen direkt mit einem markierten Antikörper detektiert.
Zwei Hauptvorteile des direkten ELISA gegenüber anderen Techniken:
Es gibt aber auch Nachteile wie:
Beim indirekten ELISA wird das Protein unspezifisch an die Well-Platte adsorbiert. Die Antigendetektion erfolgt indirekt über einen Sekundärantikörper in zwei Schritten: Zuerst wird ein unlabeled Antikörper spezifisch für das Antigen hinzugefügt, dann ein markierter Sekundärantikörper (polyklonal oder monoklonal), der den Primärantikörper erkennt.
Hauptvorteile des indirekten ELISA:
Nachteile dieser Methode sind:
Der Sandwich-ELISA unterscheidet sich von direkten und indirekten ELISA dadurch, dass ein Fangantikörper an die Platte gebunden ist. Grundlage bildet die Entwicklung passender Antikörperpaare. Ein passendes Paar besteht aus zwei Antikörpern: Der erste wird als Fangreagenz verwendet (direkt beschichtet), der zweite dient als Detektionsantikörper. Jeder dieser Antikörper muss ein unterschiedliches Epitop desselben Antigens erkennen. Es kann sowohl eine direkte als auch eine indirekte Detektion erfolgen. In der direkten Sandwich-ELISA wird ein markierter Primärantikörper genutzt, während beim indirekten ELISA ein markierter Sekundärantikörper zum Einsatz kommt.
Der Sandwich-ELISA bietet mehrere Vorteile im Vergleich zu anderen ELISA-Techniken:
Durch die Verwendung von zwei Antikörpern, die unterschiedliche Epitope desselben Antigens erkennen, ist der Sandwich-ELISA hochspezifisch.
Sandwich-ELISA weist eine noch höhere Sensitivität auf als indirekter ELISA, da nur das Antigen von Interesse von den Antikörpern erkannt wird und alle unerwünschten Komponenten ausgewaschen werden.
Allerdings benötigt der Sandwich-ELISA zwei Antikörper, die verschiedene Epitope eines Antigens erkennen. Daher kann eine individuelle Antikörperentwicklung erforderlich werden.
Der kompetitive ELISA eignet sich besonders für kleine Antigene. Er kommt überwiegend zum Einsatz, um die Antigen- (oder Antikörper-)Konzentration in einer Probe zu bestimmen. Das Prinzip: Es wird die Signalstörung gemessen, die durch den Wettbewerb zwischen Antigen (oder Antikörper) im Muster und einer markierten Referenz entsteht. Die Regel lautet: “Je schwächer das Signal, desto höher die Analytenkonzentration in der Probe”.
Kompetitiver ELISA kann auf direktem, indirektem oder Sandwich-ELISA basieren. Die Vor- und Nachteile hängen von der gewählten Methode ab.
Mit modernster Ausrüstung, hochqualifizierten Wissenschaftlerinnen und einem ausgezeichneten Ruf ist es unser Ziel bei ProteoGenix, Ihnen die besten Serviceleistungen für individuelle Assay-Entwicklung zu bieten – zu einem fairen Preis, mit umfassenden Garantien, End-to-End-Qualitätskontrolle und schnellen Bearbeitungszeiten.
Ein Schritt in die richtige Richtung erspart Ihnen viele in die falsche. Lassen Sie uns die Entwicklung und Validierung Ihres Assays übernehmen, damit Sie Ihre Forschung weiter vorantreiben können.
Klicken Sie auf „Kontaktieren Sie uns“ rechts, um mit uns Kontakt aufzunehmen, Fragen zu stellen oder ein Angebot anzufordern. Lesen Sie weiter, um mehr zu erfahren, wie unsere Services Ihre Projekte bereichern können.
Seit 2003 haben wir Hunderte Assays entwickelt und verfügen damit über herausragende Erfahrung in vielen Bereichen. Das unterscheidet uns bei der individuellen Assay-Entwicklung vom Wettbewerb:
Individuelle Assay-Entwicklung ab Zielaccession-Nummer
Komplettlösungen von der Gensynthese bis zum Pilot-Kit
Alle Prozesse unterliegen strikten Qualitätsrichtlinien
Expertise in einzigartigen Targets und leistungsstarken Tests
Unser Team besteht aus erfahrenen Wissenschaftlern mit exzellenter akademischer, industrieller und forschungsbezogener Erfahrung. Wir verfügen über beispiellose Expertise in Molekularbiologie, Proteinengineering, Antikörper- & Immunologie sowie Peptidsynthese.
ProteoGenix bietet zahlreiche maßgeschneiderte ELISA-Services, darunter Direct-, Indirect-, Sandwich- und Competitive-ELISA. Individuelle Assays sind besonders bei der Validierung und Produktion für sehr spezifische Targets oder Marker die beste Wahl – egal ob Sie diagnostische, Forschungs- oder Drug-Discovery-Projekte bearbeiten. Wir arbeiten mit automatisierten Sandwich-ELISA- und Competitive-ELISA-Techniken und bieten je nach gewünschter Sensitivität sowohl kolorimetrische als auch fluoreszenzbasierte Assays.
Unsere Services umfassen die Entwicklung von Assays für die Arzneimittelforschung, Diagnostik und Forschung.
Mit unserem langfristigen Engagement in akademischer und industrieller Forschung weltweit wissen wir bei ProteoGenix, wie wir Ihre wertvolle Forschungszeit optimal unterstützen. Unsere umfassenden individuellen Assay-Entwicklungssysteme entlasten Sie von Validierung und Ergebniskontrolle.
Unübertroffene Erfolgsgarantie
Design einer Assay-Strategie, die perfekt auf Ihre Forschungsziele abgestimmt ist
Breites Spektrum an Assay-Formaten
Hoher Individualisierungsgrad nach Zielaccession-Nummer/Biomarkerspezifikation
Biomarker-Entdeckung durch DNA-Protein-Interaktionsstudien (Yeast-One-Hybrid-System)
All-in-One-Paket von der Gensynthese bis zu Pilot-Kits
Kosteneffizient und ohne versteckte Gebühren
Umfassender Support nach der Lieferung durch unser erfahrenes Wissenschaftsteam
Die Einzigartigkeit Ihres Zielmoleküls.
Die Qualität existierender Kits.
Erfüllt das vorhandene Kit Ihre Anforderungen an Sensitivität, Assay-Format, Artspezifität oder Kreuzreaktivität?
Erstellung eines eigenen Assays, um einen Wettbewerbsvorteil zu erzielen und das Kopier-Risiko zu minimieren.
Sie können sich nicht entscheiden? Kontaktieren Sie uns gerne, wir beraten Sie individuell.
Hier sind einige häufige Bereiche, in denen individuelle Assay-Entwicklung besonders gefragt ist:
Die beste Möglichkeit, unsere Expertise bei der Entwicklung individueller Assays zu zeigen, ist ein repräsentatives Fallbeispiel für einen Biomarker-Assay.
Das Ziel war die Entwicklung und Optimierung eines Assays zum Nachweis hoher Mengen eines spezifischen Biomarkers für Frühstadien des Prostatakarzinoms. Das Validierungs-Set umfasste Seren von gesunden Individuen, Patienten mit Brustkrebs und Zielpersonen (Prostatakrebs).
Standard-OHS-Screening-Protokoll wurde zur Identifikation der Regulatoren eines Zielproteins eingesetzt. Die folgende Abbildung (ABBILDUNG 1) zeigt das generische Arbeitsprinzip des OHS-Screenings.
Prinzip des OHS-Systems
In-vivo-Identifikation von DNA-bindenden Proteinen mittels GAL4-AD-Fusion und Aktivierung eines Reportergens
Die folgenden Schritte wurden zur Entwicklung des Sandwich-ELISA-Protokolls für den im OHS-Vorabscreening entdeckten Biomarker umgesetzt:
Wie im Schritt 4 beschrieben, ermöglichte das Antikörper-Matching ein robustes Datenset, das grafisch und empirisch ausgewertet wurde, um das beste Paar zu bestimmen.
Die folgende Grafik (ABBILDUNG 2) zeigt die Matching-Ergebnisse verschiedener Antikörperpaare.
ABBILDUNG 2: BESTIMMUNG DES BESTEN PAARS FÜR DEN SANDWICH-ELISA
Wie deutlich erkennbar ist, zeigen Detektionsantikörper 4B und 5B ein besonders gutes Matching mit Beschichtungsantikörper 17. Das Paar Detektionsantikörper 5B und Beschichtungsantikörper 17 erwies sich als konstant überlegen. Durch empirische Analyse von über 90 Paaren konnte das optimale Match bestimmt werden.
Nachdem das beste Antikörperpaar festgelegt wurde, wurde ein spezifisch optimiertes Detektionsprotokoll entwickelt – inklusive Puffer, Inkubationszeiten, Antikörperverdünnungen und weiterer Parameter.
Die folgende Grafik (ABBILDUNG 3) zeigt die Konzentrationen in Relation zum OD-Wert. Die Kurve dient als Grundlage für künftige Bestimmungen im vollständigen Sandwich-ELISA-Protokoll.
ABBILDUNG 3: NACHWEISGRENZENBESTIMMUNG IN BLUTPROBEN
Fazit: Mit diesem optimierten Sandwich-ELISA-Protokoll kann der Biomarker in Patientenseren bis ≤0,2 ng/ml detektiert werden.
Die Bewertung erfolgte mit Blutproben von gesunden Spendern, Brustkrebs- und Prostatakrebs-Patienten. Das optimierte ELISA-Protokoll diente zum Vergleich der Biomarker-Werte mit PSA-Werten.
Die folgende Grafik (ABBILDUNG 4) zeigt die hohe Konzentration des prostataspezifischen Biomarkers in Prostatakrebspatienten, gemessen mit dem bei ProteoGenix entwickelten Sandwich-ELISA, wodurch eine eindeutige Unterscheidung zwischen Patienten mit und ohne Prostatakrebs ermöglicht wurde – im Gegensatz zu herkömmlichen PSA-Assays.
ABBILDUNG 4: NACHWEIS PROSTATASPEZIFISCHEN ANTIGENS IN BLUTPROBEN VON GESUNDEN UND KREBS-PATIENTEN (SANDWICH-ELISA)
Ein starker Anstieg des Biomarkers wird bei Prostatakrebspatienten festgestellt.
Dieses Fallbeispiel zeigt, wie weit sich der individuelle Assay-Entwicklungsprozess im Kundeninteresse anpassen lässt. Individuelle Assays liefern nicht nur passgenaue Lösungen, sondern sparen auch Zeit und Ressourcen.
Die Sandwich-ELISA-Methode wird meist zur Bestimmung eines Proteins (blau unten) in verschiedenen Proben (z. B. Serum) genutzt. Die Fangantikörper (grün) sind an den Kunststoff von 96-Well-Platten gebunden, während der Detektionsantikörper (rot) über eine Farbreaktion das Signal auslöst. Der Detektionsantikörper kann direkt an Biotin, HRP oder AP (gelb) markiert werden. Alternativ kann eine konjugierte Sekundärantikörper-Detektion erfolgen, wenn der Fangantikörper aus einer anderen Spezies stammt.
