Servicio de librerías de fagos

Solicitud presentación de fagos

¡Acelere su programa de desarrollo con el servicio de librerías de fagos de ProteoGenix y consiga sus anticuerpos recombinantes purificados en menos de 2 meses! ¡Nuestras librerías están compuestas por diversos formatos de anticuerpos monoclonales que incluyen Fab, scFv o VHH y proceden de diversas especies! Gracias a nuestra gran diversidad de librerías derivadas de humanos, ¡no es necesaria la humanización para el desarrollo de su anticuerpo terapéutico y se beneficiará de nuestras inmejorables garantías!

¿Por qué elegir el servicio de librerías de fagos
de ProteoGenix?

Ligandos garantizados

¡Garantizamos AL MENOS 3 ligandos únicos contra su antígeno!

Sin derechos de la propiedad intelectual

¡La secuencia de anticuerpo generada será íntegramente de su propiedad!

Gran diversidad de librerías de fagos

¡Nuestras librerías prémium contienen al menos 109 variantes diferentes!

Formatos scFv, Fab o VHH disponibles

La gran variedad de nuestras librerías nos permite ofrecer una amplia gama de formatos adaptados a una amplia gama de aplicaciones..

Gran variedad de especies disponibles

Anticuerpos monoclonales de ratón, oveja, llama, conejo,… Además de nuestras librerías derivadas de animales no inmunizados, también puede elegir desarrollar librerías derivadas de animales inmunizados de una especie de su elección sin limitación alguna.

¡Ahorre tiempo!

¡Del antígeno al anticuerpo en menos de 7 semanas!

Sin uso de animales

El cribado de librerías derivadas de animales no inmunizados no requiere el uso de animales.

Compre su librería

¡Compre nuestras librerías derivadas de animales no inmunizados o sus propias librerías derivadas de animales inmunizados!

¿Librerías de fagos derivadas de animales inmunizados o no inmunizados?

Librerías derivadas de animales no inmunizadosA excepción de las derivadas de humanos, sin limitación
EspeciesDerivadas de humanos, conejo, alpacaNo limitation except humans
FormatosFab, scFv, VHHFab, scFv, VHH
Número de ligandos+++++
Afinidad de los ligandos+++++
Problemas de inmunogenicidad potencialNoSi
Uso de animalesNoSi
Plazos6-7 semanas15-21 semanas + 6-7 semanas
Precio+++

 

¿Está interesado en nuestro servicio de cribado de librerías derivadas de animales no inmunizados o en la construcción de una librería derivada de animales inmunizados? Póngase en contacto con nuestro gestor de cuentas especializado sin compromiso.

Procedimiento de nuestro servicio de librerías de fagos

Suministro o diseño y producción de antígenos
  • Péptidos/moléculas pequeñas: conjugación a vehículos (carriers)
  • Producción de proteínas, incluyendo la síntesis de genes
  • Proteína diana para su sobreexpresión en células

Librería inmunizada

Immune library

librería naive

Construcción de librerías derivadas de animales inmunizados
  • Aislamiento de PBMC
  • Extracción de ARN y síntesis de ADNc
  • Amplificación por PCR de VH y VL
  • Construcción de librerías y control de calidad
Cribado de librerías y biopanning
  • Cribado de librerías derivadas de animales inmunizados o no inmunizados frente al antígeno
  • 4-6 rondas de biopanning
Cribado mediante ELISA de ligandos de fagos individuales
  • Cribado y validación mediante ELISA hasta la identificación de al menos 3-10 ligandos diferentes
Extracción de ADN y secuenciación del anticuerpo

¿Qué incluye nuestro servicio de librerías de fagos?

EtapaContenidoPlazosResultados
Construcción de la librería (solo para librerías derivadas de animales inmunizados)
  • Inmunización de animales y ensayos de titulación
  • Aislamiento de células (bazo, médula ósea, PBMC)
  • Extracción de ARN
  • Síntesis de ADNc
  • Amplificación por PCR de VH y VL
  • Ensamblaje de ADNc
  • Síntesis de fagémidos y clonación
  • Control de calidad de la librería
15-21 semanas
  • Informe de progreso
Cribado de librerías y biopanning
  • Cribado de la librería derivada de animales inmunizados o no inmunizados
  • 4-6 rondas de biopanning
6-7 semanas
  • Informe de progreso
Cribado mediante ELISA
  • Cribado y validación mediante ELISA hasta la identificación de al menos 3-10 ligandos diferentes
  • Informe de progreso
Extracción de ADN y secuenciación de anticuerpos
  • Extracción de ADN de fagos y secuenciación de anticuerpos
  • Informe detallado
  • Secuencia de ADN del mejor ligando
    Propiedad íntegra de las secuencias
Opciones disponibles:
  • Cribado adicional de clones de fago mediante ELISA frente a una proteína/péptido/molécula pequeña/célula específica
  • Cribado adicional de clones de fagos individuales mediante WB
  • Cribado adicional de ligandos de fagos individuales mediante citometría de flujo sobre células
  • Evaluación de la afinidad de los ligandos de fagos individuales
  • Panning frente a células que sobreexpresan el antígeno de interés con depleción de la librería frente a la célula de control

Estudio de caso: generación de un anticuerpo contra una molécula pequeña mediante presentación en fagos

REQUISITOS DEL PROYECTO

Uno de nuestros clientes nos solicitó un anticuerpo humano contra una molécula pequeña.
La molécula pequeña se conjugó a diferentes vehículos o carriers para conseguir un revestimiento óptimo.
Se llevó a cabo biopanning utilizando nuestra librería derivada de humanos no inmunizados de gran diversidad.
Se cribaron y validaron un total de 192 ligandos de fagos individuales mediante ELISA.
Se necesitaron 10 secuencias de anticuerpo.

RESULTADOS DE LA SELECCIÓN POR AFINIDAD

RondasEntrada de fagos (ufp)Salida de fagos (ufp)
Panning con revestimiento del antígenoPanning sin revestimiento (control negativo)
12.0×10128.9×1063.4×106
41.0×10124.0×1072.5×106

Se produce un enriquecimiento obvio en los ligandos anti-antígeno, aunque es difícil eliminar los ligandos unidos a los vehículos (fenómeno conocido).

IDENTIFICACIÓN DE FAGOS POLICLONALES MEDIANTE ELISA

Cantidad de fago (ufp/pocillo)Ronda 3Ronda 4
AntigenoControlAntigenoControl
6×10123.0352.5843.6303.451
2×10122.7981.7093.3083.007
6.7X10111.5081.0693.0282.128
2.2×10110.56660.50242.9761.885
7.4×10100.17120.19322.5811.704
2.5×10100.080200.090402.0331.317
8.2×1090.060900.091401.9311.054
2.7×1090.016200.017400.72350.7526
9×1080.012900.014600.23410.2432

A pesar de que hay muchos ligandos inespecíficos (fenómeno conocido), se observó un enriquecimiento obvio en los ligandos anti-antígeno (datos en negrita).

IDENTIFICACIÓN DE FAGOS MONOCLONALES MEDIANTE ELISA DE LOS 11 ANTICUERPOS ÚNICOS IDENTIFICADOS («ÚNICOS» SIGNIFICA «DE SECUENCIA ÚNICA»)

ClonesAg-vehículo 1Ag-vehículo 2Ag-vehículo 3Sin revestimientoVehículo 1Vehículo 2Vehículo 3
A64.6984.7434.4660.1180.1000.0920.117
A94.7694.7664.4200.1000.0920.0780.074
B14.7164.8044.4520.3530.5840.4220.187
B24.4944.4824.8740.0810.1220.1090.100
D14.8623.9894.5400.1700.4880.3130.123
D84.8624.0904.4860.0570.1060.1020.059
F44.2143.3525.3060.0510.1100.1230.059
H24.7974.5374.5880.0840.2130.1880.112
H114.7224.6045.0490.1030.2180.2620.138
1A114.4074.5284.5620.0540.0860.1150.079
1G14.9564.3815.2180.0760.1140.1380.077

Generamos 11 clones únicos que se unían específica y fuertemente al antígeno de molécula pequeña.
Nuestro cliente decidió expresar estos 11 clones en forma de anticuerpos recombinantes y solicitar el cribado de 192 fagos individuales adicionales, lo que condujo a la identificación de 7 secuencias únicas nuevas.

Infórmese acerca del potencial de nuestro servicio de librerías de fagos. Para leer el informe completo, haga clic en el botón «DESCARGAR EL INFORME EN PDF».

¿Qué es la presentación de anticuerpos en fagos?

La tecnología de presentación en fagos implica la determinación de los ligandos que interaccionan con una proteína (interacciones proteína-proteína, proteína-ADN o proteína-péptido) que se podrían usar como «cebo» para fagos que expresan péptidos, proteínas o anticuerpos codificados por una librería de ADN enorme (compuesta por todas las secuencias codificadoras de un organismo determinado). De esta forma, se puede determinar la función de dicha proteína.

Ciclo de presentación en fagos: librería de fagos, panning/biopanning y validación mediante ELISA

La técnica de la presentación en fagos utiliza el fago filamentoso, un virus que habita en la E. coli. Este método ha demostrado ser una potente técnica para la consulta de librerías que contienen miles de millones de proteínas o péptidos diferentes.
La aplicación de la técnica de presentación en fagos sobre librerías de anticuerpos de gran tamaño ha resultado un auténtico éxito en lo que se refiere al aislamiento de anticuerpos monoclonales que son altamente específicos contra un antígeno.
Estos métodos nuevos, que utilizan librerías compuestas por miles de millones de anticuerpos expresados en fagos, ofrecen alternativas muy valiosas, que han demostrado ser tan efectivas como los métodos tradicionales para la generación de miles de millones de componentes y para su selección rápida con el fin de identificar los candidatos más relevantes para su investigación.

Como tal, la presentación en fagos es una herramienta útil y de vanguardia ampliamente usada en el descubrimiento de anticuerpos terapéuticos.

Ventajas de la presentación de anticuerpos en fagos

La principal ventaja de la presentación en fagos es la simplicidad de la estructura, la estabilidad y, por lo tanto, la fiabilidad de los fagos, lo que no solo permite su aplicación en diversas superficies, sino también en aplicaciones in vivo.
La principal característica de la técnica de presentación en fagos es el acoplamiento físico entre genotipo y fenotipo (el fago «presentará» la proteína en su exterior y contendrá el gen que codifica para la proteína en su interior). Esto requiere la introducción artificial de ADN codificadores en fagos, lo que explica la gran diversidad de librerías de fagos existentes. En ProteoGenix, los fragmentos de anticuerpo modificados que se generan mediante presentación en fagos presentan los formatos siguientes: fragmento variable monocatenario (scFv), fragmento Fab y anticuerpos de dominio único(VHH).

Bacteriófago M13 para presentación en fagos

Todas las librerías de fagos de ProteoGenix se generan a partir del fago filamentoso M13, un virus que infecta la bacteria E. coli. Este bacteriófago es el utilizado más habitualmente para la presentación en fagos y será adecuado para su investigación.

El M13 es un fago filamentoso lisogénico, compuesto por un ADN monocatenario circular revestido por un fino tubo flexible formado por aproximadamente 2700 copias de una única proteína denominada pVIII, la principal proteína de la cápside, y alrededor de 5 copias de pIII, la proteína secundaria de la cápside, presentes en los extremos del tubo. La infección con plásmidos M13 no es letal para las bacterias y se utiliza para muchos procedimientos de ADN recombinante.