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EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS EN LEVADURAS

¡Exprese proteínas eucariotas a un precio asequible!

  • P. pastoris o S. cerevisiae
  • Más de 1500 producciones de proteína
  • Modificaciones post-traduccionales

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¡Elija la expresión de proteínas eucariotas más rentable! ProteoGenix combina su
amplia experiencia en producción de proteínas y una caja de herramientas completa para optimizar su
expresión de proteínas en levadura.

¿Por qué elegir ProteoGenix para
su expresión de proteínas en levadura?

Elija entre varios hospedadores

Elija entre P. pastoris y S. cerevisiae para su expresión de proteínas.

Acceso a una caja de herramientas completa para expresión en levadura

Ofrecemos diferentes cepas de P. pastoris o S. cerevisiae para optimizar su producción de proteínas.

Experiencia inigualable en producción de proteínas

Con más de 1500 expresiones de proteínas, puede confiar en nuestra experiencia.

Solución integral de gen a proteína

Desde el gen optimizado hasta la proteína, ¡somos su socio en expresión de proteínas!

Responsables de cuenta con doctorado

En ProteoGenix, un responsable de cuenta con doctorado le acompaña.

Sistema de expresión rentable

Las levaduras son conocidas por su rápido crecimiento y alta producción de proteínas.

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Nuestro proceso de expresión en levaduras

  1. Construcción del vector de expresión (opcional)
  • Diseño de gen con optimización de codones
  • Síntesis de genes
  • Subclonación en un vector de expresión

2. Expresión a pequeña escala

  • Transfección y selección de clones de levadura
  • Determinación de los clones con mayor expresión
  • Optimización de la expresión
  • SDS/page + WB si es necesario
  • Pruebas de purificación

3. Escalado y purificación de la expresión proteica

  • Expresión y purificación de proteínas bajo condiciones optimizadas previamente determinadas.

Nuestro flujo de trabajo en expresión de proteínas en levaduras

Etapa Contenido Plazo Entregables
Estudio piloto
  • Transfección de células de levadura
  • Selección de los clones con mayor expresión
  • Optimización de la expresión de proteínas
  • Pruebas de purificación
4 a 5 semanas
  • Muestra de proteína de prueba
Expresión transitoria de proteínas y purificación
  • Expresión de proteínas a gran escala
  • Purificación
  • Análisis QC: SDS-PAGE, concentración
2 semanas
  • Proteína purificada
  • Informe detallado

Opciones

  • Síntesis de genes, incluida la optimización de codones para expresión de proteínas y subclonación en un vector de expresión

  • Cromatografía de exclusión por talla

  • Pulido (ADN, HCP, endotoxinas)

  • Eliminación de endotoxinas

  • Análisis: WB, SEC analítica

¿Por qué elegir la expresión de proteínas en Pichia pastoris?

La elección del organismo hospedador es fundamental una vez que se decide realizar la expresión de proteínas en levaduras. Hay muchos tipos celulares descritos en la literatura, sin embargo, S. cerevisiae y P. pastoris son los más utilizados.

Este último ofrece varias ventajas para la expresión de proteínas como:

  • Nivel muy bajo de secreción de proteínas endógenas: Pichia pastoris expresa una cantidad muy baja de proteínas secretadas, lo que significa que la mayoría de las proteínas en el medio representan la proteína recombinante de interés. Esta propiedad simplifica claramente el proceso de purificación de proteínas.

  • Alta expresión de proteínas: Pichia pastoris puede crecer a alta densidad celular. Así, este hospedador permite una producción de proteínas de alto rendimiento.

  • Modificaciones post-traduccionales: Pichia pastoris posee toda la maquinaria post-traduccional propia de células eucariotas. Este hospedador puede realizar fosforilaciones y glicosilaciones (diferentes de las observadas en la expresión de proteínas en células de mamífero).

  • Libre de endotoxinas

Para concluir, la expresión en Pichia pastoris suele ser la opción preferida para la producción de proteínas secretadas. Pichia pastoris también es relevante para la producción de proteínas terapéuticas. Se ha utilizado como hospedador de levadura para la expresión de varias proteínas terapéuticas que llegaron al mercado, como:

  • Albúmina sérica humana

  • Colágeno

  • Ecallantida

  • Insulina

¿Por qué elegir la expresión de proteínas en Saccharomyces cerevisiae?

Como organismo unicelular, S. cerevisiae y otras levaduras ofrecen ventajas similares a los sistemas procarióticos como E. coli. Así, S. cerevisiae se caracteriza por un corto tiempo de generación, alto rendimiento de biomasa y herramientas bien desarrolladas para la manipulación de ADN.

Entre todas estas ventajas, la expresión de proteínas también ofrece beneficios adicionales en comparación con la expresión en E. coli. Entre ellos:

  • Modificaciones post-traduccionales:
    Se ha demostrado que S. cerevisiae realiza formación de enlaces disulfuro y la mayoría de glucosilaciones post-traduccionales que se encuentran en sistemas de expresión de mamífero. Sin embargo, existen diferencias, ya que S. cerevisiae es conocida por su hipermannosilación (más prominente que en P. pastoris).

  • Estatus GRAS:
    S. cerevisiae tiene estatus GRAS, es decir, es reconocida como segura por la FDA.

  • Libre de endotoxinas

En general, S. cerevisiae ha sido ampliamente estudiada y cuenta con una gran variedad de herramientas (cepas, vectores de expresión, etc.). Teniendo en cuenta estos aspectos, S. cerevisiae es el hospedador perfecto para proyectos que requieran probar varias condiciones. Al igual que Pichia pastoris, S. cerevisiae se ha utilizado a menudo para la expresión de proteínas terapéuticas. Sin embargo, si es necesario un patrón de glicosilación más “humano”, se preferirá la expresión en células de insecto con baculovirus o en células de mamífero.

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