DÉVELOPPEMENT DE TESTS ELISA

Vous travaillez sur une nouvelle cible sans kit ELISA disponible ? Vous tentez de détecter une cible à très faible concentration ? Il est temps d’essayer notre service de développement de tests ELISA ! Avec plus de 1500 anticorps produits, notre expertise unique en développement d’anticorps et conception de tests ELISA est votre meilleure garantie d’obtenir un test ELISA à la fois spécifique et sensible !

Notre processus de développement de tests ELISA

Comment choisir la technique ELISA la plus pertinente ?

De nombreux critères entrent en ligne de compte pour sélectionner la technique ELISA la mieux adaptée à votre projet. Voici les principaux éléments à étudier :

• La nature de l’entité à détecter : le sandwich ELISA impose deux anticorps orientés sur deux régions différentes et non superposées – il n’est donc pas adapté à la détection de très petites cibles. Pour les haptènes, le test compétitif ELISA est en général le plus pertinent.
• Le nombre d’anticorps disponibles : S’il n’existe qu’un anticorps dirigé contre votre antigène cible, privilégiez un ELISA direct ou compétitif.
• Le type de mesure recherché : Un ELISA sandwich ou compétitif s’adapte à la détection et à la quantification d’un analyte alors que le direct ou l’indirect est préconisé pour mesurer une réponse immunitaire.

En tant que leader en production d’anticorps, ProteoGenix peut développer tous types de tests ELISA selon vos besoins. Pour en savoir plus sur notre service de développement de tests ELISA ou clarifier le meilleur format à employer, contactez nos chefs de projet titulaires d’un doctorat.

Les différents formats de tests ELISA

ELISA direct

En ELISA direct, l’antigène protéique est adsorbé non spécifiquement au fond du puits puis lavé afin d’éliminer l’excédent non fixé. L’antigène est ensuite détecté directement par un anticorps marqué.

Deux principaux avantages distinguent cette technique :

• Un procédé simple nécessitant moins d’étapes

• Aucune interférence du second anticorps

Cependant, certains inconvénients existent :

• L’immobilisation non spécifique menant à une fixation globale des protéines de l’échantillon – donc plus de bruit de fond

• Cette méthode requiert un anticorps primaire marqué pour chaque cible antigénique

• La détection directe réduit la sensibilité (un seul anticorps marqué par antigène)

ELISA indirect

En ELISA indirect, la protéine est adsorbée de manière non spécifique sur le fond du puits. Ce test est qualifié d’indirect car l’antigène est détecté via un anticorps secondaire – la détection a lieu en deux étapes : d’abord un anticorps primaire non marqué, puis un anticorps secondaire (monoclonal ou polyclonal) spécifique de l’anticorps primaire.

Avantages du ELISA indirect :

• Possibilité d’utiliser plusieurs anticorps primaires avec un même anticorps secondaire

• Sensibilité accrue grâce au signal amplifié (plusieurs anticorps marqués par antigène possible)

Inconvénients :

• Présence du second anticorps, source possible de réactivité croisée

• Procédure plus longue que le ELISA direct

Sandwich ELISA

L’ELISA sandwich diffère du direct et de l’indirect, car c’est l’anticorps de capture qui est fixé à la plaque. Ce format repose sur des paires d’anticorps appariés : l’un sert à la capture (immobilisé sur la plaque), l’autre à la détection. Il est crucial que les deux anticorps reconnaissent des épitopes distincts du même antigène. L’ELISA sandwich peut utiliser une détection directe (anticorps primaire marqué) ou indirecte (anticorps secondaire marqué).

Avantages :

• La double spécificité confère au sandwich ELISA une grande sélectivité.

• Ce format offre aussi une sensibilité supérieure à l’indirect, car seule la cible d’intérêt est capturée et les impuretés sont éliminées, ce qui maximise la précision.

• Possibilité de détection directe ou indirecte

Néanmoins, deux anticorps spécifiques d’épitope distincts sont nécessaires. Un développement d’anticorps personnalisé peut donc être requis.

ELISA compétitif

L’ELISA compétitif est une technique complexe particulièrement adaptée aux petits antigènes. Il est principalement utilisé pour mesurer la concentration d’un antigène (ou anticorps) dans un échantillon. Le principe repose sur la compétition entre l’antigène/anticorps de l’échantillon et une référence marquée ; plus le signal est faible, plus la concentration de l’analyte est élevée.

Ce format peut se baser sur les ELISA direct, indirect ou sandwich, donc les avantages et limites dépendent de la technique retenue.

Développons votre test ELISA – Ensemble !

Avec des équipements de pointe, des scientifiques qualifiés et expérimentés, et une réputation reconnue, nous, chez ProteoGenix, sommes engagés à vous fournir le meilleur service de développement sur mesure – avec des garanties étendues, un contrôle qualité total et des délais courts.

Un pas dans la bonne direction vaut cent tentatives maladroites. Laissez-nous la responsabilité de concevoir et valider vos tests afin que vous puissiez faire avancer vos recherches !

Cliquez sur ‘Contactez-nous’ à droite pour nous écrire, poser vos questions ou demander un devis. Lisez la suite pour découvrir comment notre service de développement de tests ELISA sur mesure peut optimiser temps, budget et efficacité de vos projets.

Notre expertise en développement ELISA sandwich

Après des centaines de projets depuis 2003, ProteoGenix a forgé une expertise remarquable. Voici nos points forts en développement de tests sur mesure :

• Développement de tests sur mesure à partir de zéro (accession cible)
• Solutions complètes, de la synthèse de gènes à la livraison pilote du kit
• Processus contrôlés par des normes qualité strictes
• Expertise sur cibles uniques et tests ultra-performants / haute sensibilité

Nous réunissons des scientifiques réputés, aux parcours académiques, industriels et recherche prestigieux. Leur expérience nous confère une expertise inégalée en biologie moléculaire, ingénierie des protéines, immunologie et synthèse peptidique.

Pourquoi choisir un test ELISA sur mesure ?

ProteoGenix propose divers tests ELISA personnalisés (direct, indirect, sandwich, compétitif), mais un développement personnalisé est souvent la meilleure solution lorsque la validation d’un projet cible des marqueurs spécifiques. Nous travaillons par ELISA sandwich ou compétitif pour créer le test le plus adapté à vos exigences de sensibilité et de technologie, qu’il soit colorimétrique ou fluorimétrique.
Notre offre couvre la recherche, le diagnostic ou la découverte de médicaments.

Le service de développement ELISA en un coup d’œil

Engagés de longue date auprès du secteur académique et industriel international, nous comprenons l’importance d’alléger vos contraintes de validation et de répétabilité des résultats. C’est pourquoi nous avons développé un système complet de développement ELISA sur mesure pour accompagner tous les chercheurs.

Caractéristiques principales

• Garanties inégalées de réussite
• Stratégie d’adaptation selon vos objectifs de recherche
• Multiples formats de tests disponibles
• Personnalisation poussée selon vos critères ou biomarqueurs
• Découverte de biomarqueurs via études ADN-protéine (système levure one-hybrid)
• Package tout inclus, de la synthèse de gènes à la livraison pilote
• Coûts compétitifs, sans frais cachés
• Support post-livraison par nos scientifiques experts

Ce que vous obtenez avec notre service de développement ELISA

• Stratégie complète de développement du test
• Planning prévisionnel du projet
• Développement sur mesure, de la synthèse de gènes à la livraison pilote (Sandwich ELISA/Compétitif/Autre)
• Validation du test
• Livraison de tous les réactifs
• Transfert du test assisté
• Documentation
• Support d’implémentation
• Contrôle qualité approfondi
• Kits pilotes livrés

Développement ELISA : domaines d’application

Pour savoir si vous avez vraiment besoin d’un test sur mesure ou d’un kit standard, posez-vous ces questions :

• La cible est-elle unique ?
• La qualité des kits présents sur le marché répond-elle à vos exigences ?
• Ce kit couvre-t-il vos critères de sensibilité, format, espèces ou réactivité croisée ?
• Avoir votre propre test permet-il de créer un avantage concurrentiel ?

Si ce choix reste difficile, n’hésitez pas à nous contacter, nous vous conseillerons volontiers.

Domaines d’application fréquemment concernés par le développement sur mesure :

• Biomarqueurs pour découverte et développement de médicaments
• Immunodosages pour l’évaluation de vaccins
• Suivi de délivrance de médicament
• Développement de kits diagnostiques ou pronostiques
• Développement et optimisation de procédés
• Recherche industrielle et académique fondamentale
• Validation d’expression sur différentes lignées cellulaires ou extraits
• Bioessais pour analyse alimentaire et de l’eau
• Criblage avancé de toxicité
• Contrôle de procédés industriels
• Analyse environnementale

Exemple concret – Développement ELISA sandwich

Pour illustrer notre expertise, voici une étude de cas sur le développement d’un test biomarqueur par ELISA sandwich.

Objectif : identification d’un biomarqueur du cancer de la prostate précoce
et développement d’un kit via sandwich ELISA

L’objectif était de détecter un biomarqueur spécifique de la forme précoce du cancer de la prostate, préalablement identifié, et d’optimiser le kit d’analyse. La validation s’est faite sur une cohorte de donneurs : sujets sains, patients atteints de cancer du sein, individus ciblés (atteints du cancer étudié).

Découverte de biomarqueur

Un protocole standard OHS a permis d’identifier les régulateurs d’une protéine cible courante dans les anticancéreux. Le schéma (FIGURE 1) illustre ce principe.

Principe du système OHS

Identification in vivo de protéines liant l’ADN grâce à la fusion avec GAL4-AD et activation d’un gène rapporteur

Développement du protocole sandwich ELISA pour le biomarqueur

Les étapes suivantes ont été nécessaires :

• Production de protéine recombinante en quantités suffisantes et forte pureté.
• Génération de 10 anticorps monoclonaux à haute affinité en hybridome.
• Les 10 anticorps monoclonaux ont été produits, purifiés et conjugués.
• Appariement approfondi, avec 90 essais pour sélectionner la meilleure paire.
• Optimisation du protocole sandwich ELISA pour atteindre la sensibilité recherchée (détection dans les sérums patients).
• La paire la plus performante évaluée sur échantillons marqués issus d’une cohorte large.
• Cartographie d’épitopes puis établissement de banques cellulaires MCB et WCB.

Données : sélection de la meilleure paire ELISA sandwich

L’expérience d’appariement a fourni une matrice de données fiables, analysées empiriquement pour identifier la paire la plus performante.

Le graphique (GRAPH 1) détaille les résultats d’appariement.

GRAPHIQUE 1 : SÉLECTION DE LA MEILLEURE PAIRE POUR SANDWICH ELISA

On observe que les anticorps de détection 4B et 5B présentent un excellent appariement avec l’anticorps de coating 17. Le couple 5B/17 montrant les meilleures performances globales. Ainsi, une analyse expérimentale et empirique de plus de 90 paires a permis d’identifier la paire idéale.

Données : optimisation du sandwich ELISA

Le choix final validé, un protocole optimisé a été défini : choix des tampons et solutions bloquantes, temps d’incubation et dilutions, etc.

Le graphe (GRAPH 2) reporte la concentration versus l’OD, donnant une courbe de référence fiable pour extrapolation future du protocole sandwich ELISA.

GRAPHIQUE 2 : DÉTERMINATION DU SEUIL DE DÉTECTION DANS LE SANG

Conclusion : ce protocole sandwich ELISA permet de détecter le biomarqueur à une concentration ≤0,2 ng/ml dans le sang de patients.

Données : validation sandwich ELISA sur échantillons biologiques

Le protocole optimisé a été testé sur des échantillons de donneurs sains, patients cancer du sein et prostate. Les niveaux du biomarqueur ont été comparés à ceux de la PSA.

Le graphe (GRAPH 3) illustre la spécificité du nouveau biomarqueur, rendant la discrimination prostate/non-prostate beaucoup plus fiable que pour la PSA.

GRAPHIQUE 3 : QUANTIFICATION DU MARQUEUR SPÉCIFIQUE DE LA PROSTATE DANS LE SANG (SANDWICH ELISA)

Les patients atteints de cancer de la prostate présentent une montée importante du biomarqueur correspondant

Conclusion

Cette étude de cas prouve la valeur des services sur mesure en ELISA. Adapter le développement à chaque projet permet un gain précieux de temps, d’énergie et de ressources, impossibles avec des kits standards.

Principe du développement ELISA sandwich

L’ELISA sandwich est la méthode standard de détection de protéines (en bleu ci-dessous) dans divers échantillons comme le sérum, via une paire d’anticorps. L’anticorps de capture (en vert) est fixé au plastique d’une plaque 96 puits ; l’anticorps de détection (en rouge) permet la révélation du signal. Celui-ci peut être directement conjugué (biotine, HRP, AP en jaune) ou détecté via un anticorps secondaire si l’anticorps de coating provient d’une espèce différente.