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TEST AD ALTA RESA PER L’ESPRESSIONE PROTEICA

Ottieni successo con le tue
proteine difficili da esprimere!

  • Fino a x50 resa proteica
  • 1000 test in 4 settimane
  • Migliora tutte le proprietà delle tue proteine

Contattaci Parla con i nostri esperti

Il nostro servizio di test ad alta resa per l’espressione proteica è la soluzione ideale per superare le sfide più impegnative nella produzione di proteine difficili da esprimere! ProteoGenix ha sviluppato una piattaforma HTP dedicata all’ottimizzazione dell’espressione proteica. La nostra soluzione: oltre 1000 condizioni di espressione selezionate e testate in parallelo per incrementare la tua produzione proteica in tempi brevi.

Perché scegliere ProteoGenix per l’ottimizzazione dell’espressione proteica?

Espressione proteica “à la carte”

Progettiamo le condizioni di espressione più adatte, personalizzando i test sulle tue specifiche esigenze.

Risparmia tempo

Eseguiamo 1000 test in 4 settimane grazie alla nostra piattaforma ad alta automazione.

La soluzione ULTIMA per proteine difficili da esprimere

Espressione proteica complessa? Il nostro screening ad alta resa supera ogni sfida.

Competenza unica nell’espressione proteica

Abbiamo espresso oltre 1500 proteine dal 2003.

5 sistemi di espressione

Approfondita esperienza in 5 diversi sistemi di espressione: E. coli, B. subtilis, lievito, baculovirus/cellule di insetto e cellule di mammifero.

XtenCHOTM incluso!

Il nostro servizio può includere il nostro sistema di espressione mammifero ad alte prestazioni.

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Test ad alta resa per proteine difficili da esprimere

ProteoGenix riunisce l’esperienza dei suoi migliori esperti nella produzione proteica per offrirti la piattaforma di espressione proteica ad alta resa più avanzata. La nostra piattaforma è basata su una regola: “Più condizioni testiamo, maggiori sono le probabilità di esprimere con successo la tua proteina”. Pertanto, il nostro servizio consente di testare 1000 condizioni in 4 settimane per soddisfare o superare i tuoi requisiti in termini di:

  • Produttività
  • Purezza
  • Solubilità
  • Stabilità
  • Attività biologica

Il raggiungimento di questi risultati è possibile solo prevedendo una vasta gamma di condizioni di espressione proteica. Ecco una lista di parametri che ProteoGenix può variare:

Competenze di biologia molecolare

Sintesi genica

ILLIMITATO

Vettori

ILLIMITATO

Peptide segnale

250+

Tag di purificazione

15+

Tag di solubilità

15+

Ceppi e linee cellulari

Condizioni di coltura

Temperatura

Condizioni di induzione

Screening dei terreni

Metodo di estrazione

Fermentazione

ILLIMITATO

Purificazione

Purificazione

Hai difficoltà nell’ottimizzazione dell’espressione proteica? Contatta i nostri account manager PhD per liberare il potenziale della tua produzione.

Il nostro workflow ad alta resa per l’espressione proteica

Determinazione della miglior coppia ospite/vettore

  • Test di diversi trasformanti
  • Selezione di quelli a miglior resa
  • Test di purificazione sulla migliore coppia
GO/NO GO

Ottimizzazione dell’espressione proteica in matraccio

  • Ottimizzazione di condizioni di coltura (temperatura, tempo di induzione…)
  • Determinazione della migliore strategia di alimentazione
GO/NO GO

Ottimizzazione della purificazione proteica

GO/NO GO

Ottimizzazione dell’espressione in fermentatore

  • Ottimizzazione parametri di fermentatore/bioreattore
  • Purificazione proteica e analisi QC: SDS/page, western

Esempio di progetto tipico

320 TEST

  • 4 ceppi E. coli
  • 4 linee cellulari di mammifero
  • 2 tag di purificazione
  • 2 sintesi geniche
  • 4 vettori
  • 5 peptidi segnale

2 combinazioni migliori di sistemi

1350 TEST

  • 3 temperature
  • 9 condizioni di induzione
  • 5 ottimizzazioni di purificazione
  • 5 metodi di estrazione

Selezione della miglior condizione di espressione

200 screening dei terreni

5 migliori condizioni di fermentazione

1875 TEST

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Il nostro processo produttivo ad alta resa

Fase Contenuto Tempistiche Risultati
Determinazione coppia ospite/vettore
  • Sintesi genica con ottimizzazione dei codoni
  • Sottoclonaggio nei vettori di espressione
  • Purificazione dei migliori risultati
  • Da definire in base al progetto
  • Costrutti genici
  • Report dettagliato dei test
  • Proteina purificata dal test di purificazione
Ottimizzazione espressione proteica
  • Ottimizzazione delle condizioni di coltura
  • Da definire in base al progetto
  • Campione su richiesta Report dettagliato
Ottimizzazione purificazione proteica
  • Scelta della strategia di purificazione ottimale
  • Da definire in base al progetto
  • Proteina purificata Report dettagliato
Sviluppo del processo
  • Ottimizzazione parametri operativi bioreattore Analisi QC
  • Da definire in base al progetto
  • Proteina purificata Report dettagliato
Opzioni
  • Eliminazione del tag tramite taglio enzimatico
  • Test e rimozione di endotossine
  • Scale-up produzione / Fermentazione

Influenza dei parametri sull’espressione proteica

La produzione di proteine difficili da esprimere richiede la variazione di diversi parametri che possono influenzare fortemente la resa finale, la purezza, la stabilità, la solubilità e l’attività biologica. In particolare per la produttività, alcuni dei parametri chiave per l’ottimizzazione dell’espressione proteica includono:

Sistema di espressione

La scelta del sistema di espressione più adatto è essenziale nella produzione proteica. Questa scelta dipende dalle tue esigenze: alta produttività, corretta folding della proteina, modifiche post-traduzionali “human-like” o un compromesso fra questi… Di seguito una tabella con i principali parametri da valutare nella scelta del giusto sistema:

Sequenza genica

La sintesi genica deve essere ottimizzata per l’organismo ospite tramite il processo di ottimizzazione dei codoni. Questa operazione evita codoni rari nell’mRNA, riducendo il rischio di mancata espressione e aumentando la resa della produzione proteica.

Vettore

L’ottimizzazione dell’espressione proteica passa anche dalla scelta del miglior vettore di espressione. La sequenza non codificante regola diversi elementi centrali:

  • Il promotore deve essere adeguato alla natura della proteina. Per proteine tossiche, si preferiscono promotori a bassa espressione basale. Promotori forti sono necessari per rese elevate.
  • Il terminatore regola il turnover e aumenta la stabilità dell’mRNA nel citoplasma.
  • L’origine di replicazione controlla il numero di copie del plasmide. Scegliere un plasmide ad alto copy può aiutare in caso di rese basse.

Condizioni di espressione

Diversi fattori influenzano l’espressione proteica:

  • Temperatura: nei sistemi prokariotici come E. coli, un’espressione errata può portare al folding incompleto e alla formazione di corpi d’inclusione. Indurre a bassa temperatura favorisce la solubilità delle proteine.
    L’espressione ipotermica in cellule di mammifero aumenta la resa.
  • Concentrazione dell’induttore: ridurla porta a una minore trascrizione, limitando aggregati e favorendo la solubilità.
  • Terreno di crescita: deve fornire tutti i nutrienti necessari all’espressione ricombinante.

 

Questa lista è solo una parte dei parametri che ProteoGenix può ottimizzare con il suo servizio di espressione proteica ad alta resa. Contattaci per discutere le tue esigenze con il nostro account manager PhD e trovare insieme i migliori parametri per la tua espressione proteica.

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