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View ProductsSauvetage d’un anticorps monoclonal patrimonial issu d’hybridome
Client
Laboratorios LETI
Secteur
Santé animale
Application
Contrôle qualité et détection de protéines
Délai
7 semaines
Processus clés
- De novo sequencing
- Synthèse de gènes VH/VL optimisés pour CHO
- Transfections dans des cellules XtenCHO™ et expression
- Purification par affinité (protéine A/G)
- Contrôle qualité par SDS-PAGE
-
Accès sécurisé à un anticorps patrimonial clé
-
Suppression de la dépendance à un hybridome contaminé
-
Continuité du projet via la production recombinante
Contexte
Laboratorios LETI, acteur de la santé animale, a collaboré avec ProteoGenix pour sécuriser l’approvisionnement d’un anticorps monoclonal murin développé par hybridome dans les années 1990.
Cet anticorps était utilisé pour le contrôle qualité et la détection de protéines. Toutefois, l’hybridome d’origine était contaminé par des mycoplasmes, rendant son utilisation risquée. Compte tenu de l’ancienneté de la lignée cellulaire et de la qualité limitée du matériel génétique disponible, ProteoGenix a recommandé le séquençage d’anticorps de novo plutôt que le séquençage conventionnel de l’hybridome.
Après récupération de la séquence, les régions VH et VL ont été insérées dans le même squelette IgG2a murin et exprimées par voie recombinante. Cela a permis au client de préserver l’anticorps et de continuer son utilisation sans devoir raviver l’hybridome original.
Défis
1
2
Contamination par des mycoplasmes
3
Choisir la bonne stratégie de séquençage
4
Reconstruction de l’anticorps au format recombinant
Approche ProteoGenix
Pour ce projet, nous avons adapté le flux de travail aux risques spécifiques d’une lignée hybridome ancienne et contaminée. Plutôt que s’appuyer sur le séquençage conventionnel d’ADN d’hybridome, notre équipe a préconisé une stratégie de de novo sequencing pour récupérer directement la séquence de l’anticorps à partir de la protéine.
- De novo sequencing et récupération de la séquence
L’anticorps a été analysé par LC-MS/MS avec une approche multi-enzymatique afin de reconstituer les séquences des chaînes lourde et légère.
2. Conception de l’anticorps recombinant
Les régions VH et VL récupérées ont été synthétisées sous forme de gènes optimisés CHO et clonées dans le vecteur propriétaire pTXs1 de ProteoGenix en utilisant le même squelette IgG2a murin que l’anticorps d’origine.
3. Production recombinante pilote
L’anticorps recombinant a été produit par transfection transitoire dans des cellules XtenCHO™, puis exprimé à l’échelle pilote (80L) et purifié par affinité Protéine A/G.
4. Contrôle qualité
L’anticorps purifié a été analysé par SDS-PAGE et UV280 pour vérifier son intégrité et sa pureté avant livraison.
Résultats
ProteoGenix a récupéré avec succès la séquence de l’anticorps monoclonal murin patrimonial et converti ce dernier au format recombinant. L’analyse SDS-PAGE en conditions réductrices et non-réductrices a confirmé l’intégrité et la pureté de l’anticorps recombinant IgG2a murin après purification sur Protéine A/G.
L’anticorps recombinant a été produit sans nécessiter de raviver ou d’exploiter davantage la lignée hybridome contaminée. Après livraison, le client a évalué l’anticorps et confirmé qu’il présentait les mêmes propriétés que l’anticorps d’origine issu d’hybridome.
Ce processus a apporté à Laboratorios LETI une solution fiable pour continuer à utiliser cet anticorps d’intérêt tout en supprimant la dépendance à une lignée cellulaire ancienne et contaminée. En sécurisant la molécule au format recombinant, ce projet a permis de préserver un anticorps patrimonial majeur, de réduire tout risque de rupture d’approvisionnement et de soutenir les applications de contrôle qualité et détection de protéines.
À retenir
Grâce au de novo sequencing et à la production recombinante d’anticorps, ProteoGenix a permis à Laboratorios LETI de sauver un anticorps patrimonial précieux depuis un hybridome contaminé et d’assurer sa pérennité au format recombinant.
Cette démarche a supprimé la dépendance à la lignée cellulaire tout en préservant les propriétés requises pour le contrôle qualité et la détection de protéines.
Ce fut un vrai plaisir de travailler avec l’équipe ProteoGenix. Tout s’est parfaitement déroulé, la coordination a été fluide et efficace, et ils ont toujours répondu rapidement à toutes mes interrogations. Nous avons beaucoup apprécié leur attention tout au long du projet ; nous avons constamment ressenti une communication réactive et proactive. Les délais ont été parfaitement respectés, rendant la collaboration d’autant plus agréable. Je serais ravi de collaborer à nouveau avec eux à l’avenir.
