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Scegli l’espressione proteica eucariotica più conveniente! ProteoGenix unisce la sua lunga esperienza nella produzione di proteine e una toolbox completa per ottimizzare la tua espressione proteica in lievito.
Scegli tra P. pastoris e S. cerevisiae per l’espressione della tua proteina.
Proponiamo diversi ceppi di P. pastoris o S. cerevisiae per ottimizzare la tua produzione di proteine.
Con oltre 1500 espressioni proteiche, puoi contare sulla nostra esperienza.
Dal gene ottimizzato alla proteina: siamo il tuo partner per l’espressione proteica!
Da ProteoGenix, avrai l’assistenza di un account manager con PhD!
I lieviti sono noti per la loro rapida crescita e l’elevata resa proteica.
2. Espressione proteica su piccola scala
3. Scaling up e purificazione della proteina
| Fase | Contenuto | Tempistiche | Deliverable |
|---|---|---|---|
| Studio pilota |
|
4-5 settimane |
|
| Espressione e purificazione transiente della proteina |
|
2 settimane |
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Opzioni
Sintesi genica inclusa ottimizzazione dei codoni per l’espressione proteica e sottoclonaggio in un vettore di espressione
Cromatografia per esclusione di dimensione
Polishing (DNA, HCP, endotossine)
Rimozione delle endotossine
Analisi: WB, SEC analitica
La scelta dell’organismo ospite è fondamentale una volta deciso di utilizzare l’espressione proteica in lievito. In letteratura sono descritti molti ceppi ospiti, ma S. cerevisiae e P. pastoris sono i più utilizzati.
Quest’ultima offre diversi vantaggi per l’espressione proteica, tra cui:
Basso livello di secrezione di proteine native : Pichia pastoris produce una quantità molto bassa di proteine secrete, perciò la maggioranza delle proteine presenti nel terreno rappresenta la proteina ricombinante d’interesse. Questa caratteristica semplifica chiaramente la purificazione downstream.
Espressione proteica ad alto titolo : Pichia pastoris può essere coltivata ad alta densità cellulare. Pertanto, questo organismo permette una produzione di proteine ad alta resa.
Modifiche post-traduzionali : Pichia pastoris possiede tutti i meccanismi di modifica post-traduzionale tipici delle cellule eucariotiche. Questo organismo può eseguire fosforilazioni e glicosilazioni (diverse da quelle osservate nell’espressione proteica in cellule mammifere).
Priva di endotossine
Per concludere, l’espressione proteica in Pichia pastoris è la prima scelta per la produzione di proteine secrete. Pichia pastoris è anche un’opzione valida per la produzione di proteine terapeutiche. Questo organismo è stato utilizzato come ospite per l’espressione di diverse proteine terapeutiche approdate sul mercato come:
Albumina sierica umana
Collagene
Ecallantide
Insulina
Come organismo unicellulare, S. cerevisiae e altri lieviti offrono gli stessi vantaggi dei sistemi procariotici come E. coli. S. cerevisiae presenta tempi di generazione brevi, alte rese di biomassa e strumenti ben sviluppati per la manipolazione del DNA.
Oltre a questi vantaggi, l’espressione proteica offre ulteriori benefici rispetto all’espressione in E. coli, tra cui:
Modifiche post-traduzionali :
S. cerevisiae è in grado di formare ponti disolfuro e la maggior parte delle glicosilazioni post-traduzionali tipiche dei sistemi di espressione mammiferi. Tuttavia, S. cerevisiae mostra ipermannosilazione (più marcata rispetto a P. pastoris).
Status GRAS :
S. cerevisiae beneficia dello status GRAS, riconosciuto come sicuro dalla FDA.
Privo di endotossine
Nel complesso, S. cerevisiae è stato ampiamente studiato e dispone di una vasta gamma di strumenti (ceppi, vettori di espressione…). Considerando questi fattori, S. cerevisiae è l’ospite ideale per progetti che richiedono il test di diverse condizioni. Come Pichia pastoris, è molto usato per l’espressione proteica terapeutica. Tuttavia, se fosse necessaria una glicosilazione più simile a quella umana, si consiglia l’utilizzo dell’espressione in baculovirus o in cellule di mammifero.
