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View ProductsRecuperare un anticorpo legacy da ibridoma
Cliente
Laboratorios LETI
Settore
Salute animale
Applicazione
Controllo qualità e rilevamento proteico
Tempistiche
7 settimane
Processi chiave
- De novo sequencing
- Sintesi genica VH/VL con ottimizzazione CHO
- Trasfezioni in cellule XtenCHO™ ed espressione
- Purificazione per affinità (proteina A/G)
- SDS-PAGE per controllo qualità
-
Accesso sicuro a un anticorpo legacy essenziale
-
Eliminata la dipendenza dall’ibridoma contaminato
-
Continuità del progetto tramite produzione ricombinante
Contesto
Laboratorios LETI, attivo nella salute animale, si è affidato a ProteoGenix per garantire la fornitura di un anticorpo monoclonale murino sviluppato tramite tecnologia ibridoma a fine anni ’90.
L’anticorpo veniva impiegato per il controllo qualità e il rilevamento proteico, ma l’ibridoma originale risultava contaminato da micoplasma, rendendone rischioso l’utilizzo continuativo. Data l’età della cellula e la qualità del materiale genetico disponibile, ProteoGenix ha suggerito il de novo sequencing dell’anticorpo invece della classica sequenziamento da DNA di ibridoma.
Dopo il recupero della sequenza, le regioni VH e VL sono state innestate sullo stesso backbone murino IgG2a ed espresse in modo ricombinante, permettendo al cliente di conservare l’anticorpo e continuare a utilizzarlo senza la necessità di rivitalizzare l’ibridoma originale.
Le sfide
1
2
Superare la contaminazione da micoplasma
3
Selezionare la strategia di sequenziamento corretta
4
Ricostruire l’anticorpo in formato ricombinante
Approccio ProteoGenix
Per questo progetto abbiamo adattato il workflow ai rischi specifici associati a una linea di ibridoma vecchia e contaminata. Invece del tradizionale sequenziamento del DNA dall’ibridoma, il nostro team ha consigliato una strategia di de novo sequencing per recuperare la sequenza dell’anticorpo direttamente dalla proteina.
- De novo sequencing e recupero della sequenza
L’anticorpo è stato analizzato con LC-MS/MS utilizzando una strategia multi-enzimatica per ricostruire le sequenze delle catene pesante e leggera.
2. Design dell’anticorpo ricombinante
Le regioni VH e VL recuperate sono state sintetizzate come geni ottimizzati per CHO e clonate nel vettore proprietario pTXs1 di ProteoGenix usando lo stesso backbone murino IgG2a dell’anticorpo originale.
3. Produzione ricombinante pilota
L’anticorpo ricombinante è stato prodotto tramite trasfezione transiente in cellule XtenCHO™, seguito da espressione pilota (80L) e purificazione per affinità su Protein A/G.
4. Controllo qualità
L’anticorpo purificato è stato analizzato con SDS-PAGE e UV280 per valutarne integrità e purezza prima della consegna.
Risultati
ProteoGenix ha recuperato con successo la sequenza dell’anticorpo monoclonale murino legacy e l’ha convertita in formato ricombinante. L’analisi SDS-PAGE, in condizioni ridotte e non, ha confermato integrità e purezza dell’anticorpo murino IgG2a ricombinante dopo purificazione su Protein A/G.
L’anticorpo ricombinante è stato prodotto senza necessità di rivitalizzare o utilizzare ulteriormente la linea di ibridoma contaminata. Dopo la consegna, il cliente ha testato l’anticorpo ricombinante e confermato che mostra le stesse proprietà dell’anticorpo originario da ibridoma.
Questo ha garantito a Laboratorios LETI un metodo affidabile per continuare a usare un anticorpo prezioso rimuovendo la dipendenza da una cellula vecchia e contaminata. Conservare la molecola in formato ricombinante ha permesso di salvaguardare un anticorpo legacy critico, ridurre il rischio di interruzioni nella fornitura e supportare le applicazioni di controllo qualità e rilevamento proteico.
Key Takeway
Grazie al de novo sequencing e alla produzione di anticorpi ricombinanti, ProteoGenix ha aiutato Laboratorios LETI a recuperare un prezioso anticorpo legacy da un ibridoma contaminato, assicurandone l’utilizzo futuro in formato ricombinante.
Questo approccio ha eliminato la necessità di utilizzare la cellula originale preservando le proprietà dell’anticorpo richieste per le attività di controllo qualità e rilevamento proteico.
È stato un vero piacere collaborare con il team di ProteoGenix. Tutto si è svolto in modo estremamente fluido, la coordinazione è stata stretta ed efficiente, e sono sempre stati rapidi nel rispondere a ogni dubbio o domanda. Abbiamo davvero apprezzato l’attenzione mostrata durante l’intero processo; la comunicazione è stata sempre fluida e proattiva. Le tempistiche di consegna sono state rispettate perfettamente, rendendo la collaborazione ancora più agevole. Sarebbe un piacere lavorare di nuovo insieme in futuro.
