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View ProductsRettung eines Hybridoms aus Altbeständen
Kunde
Laboratorios LETI
Sektor
Tiergesundheit
Anwendung
Qualitätskontrolle und Protein-Detektion
Zeitplan
7 Wochen
Schlüsselprozesse
- De-novo-Sequenzierung
- Gensynthese VH/VL mit CHO-Optimierung
- Transfektion in XtenCHO™-Zellen und Expression
- Affinitätsreinigung (Protein A/G)
- SDS-PAGE zur Qualitätskontrolle
-
Gesicherter Zugang zu einem wichtigen Antikörper aus Altbeständen
-
Abhängigkeit von kontaminiertem Hybridom beseitigt
-
Projektkontinuität durch rekombinante Produktion ermöglicht
Kontext
Laboratorios LETI, aktiv im Bereich Tiergesundheit, arbeitete mit ProteoGenix zusammen, um die Versorgung mit einem Maus-Monoklonalen Antikörper zu sichern, der Ende der 1990er Jahre mittels Hybridom-Technologie entwickelt wurde.
Der Antikörper wurde für Qualitätskontrolle und Protein-Detektion eingesetzt, jedoch war das Original-Hybridom mit Mycoplasmen kontaminiert, was das weitere Arbeiten damit riskant machte. Aufgrund des Alters der Zelllinie und der Qualität des verfügbaren genetischen Materials empfahl ProteoGenix eine De-novo-Antikörper-Sequenzierung anstelle der konventionellen Hybridom-DNA-Sequenzierung.
Nach der Sequenzrekonstruktion wurden die VH- und VL-Regionen in das gleiche murine IgG2a-Backbone eingesetzt und rekombinant exprimiert. Dies ermöglichte es dem Kunden, den Antikörper zu bewahren und weiterhin zu nutzen, ohne das ursprüngliche Hybridom reaktivieren zu müssen.
Herausforderungen
1
2
Überwindung der Mykoplasmen-Kontamination
3
Auswahl der richtigen Sequenzierungsstrategie
4
Neukonstruktion des Antikörpers im rekombinanten Format
ProteoGenix-Ansatz
Für dieses Projekt haben wir den Workflow an die speziellen Risiken einer alten und kontaminierten Hybridom-Zelllinie angepasst. Statt konventioneller DNA-Sequenzierung vom Hybridom hat unser Team eine De-novo-Sequenzierung empfohlen, um die Antikörpersequenz direkt vom Protein zu rekonstruieren.
- De-novo-Sequenzierung und Sequenzwiederherstellung
Der Antikörper wurde per LC-MS/MS unter Anwendung einer multi-enzymatischen Strategie analysiert, um die Sequenz von Schwer- und Leichtkette zu rekonstruieren.
2. Rekombinantes Antikörperdesign
Die rekonstruierten VH- und VL-Regionen wurden als CHO-optimierte Gene synthetisiert und in den proprietären pTXs1-Vektor von ProteoGenix unter Verwendung desselben murinen IgG2a-Backbones wie der Originalantikörper geklont.
3. Pilot-Rekombinantproduktion
Der rekombinante Antikörper wurde per transienter Transfektion in XtenCHO™-Zellen produziert, gefolgt von Expression im Pilotmaßstab (80L) und Affinitätsreinigung mit Protein A/G.
4. Qualitätskontrolle
Der gereinigte Antikörper wurde mittels SDS-PAGE und UV280 analysiert, um Integrität und Reinheit vor der Auslieferung zu prüfen.
Ergebnisse
ProteoGenix konnte die Sequenz des Maus-Monoklonalen Antikörpers erfolgreich rekonstruieren und in ein rekombinantes Format überführen. Die SDS-PAGE-Analyse unter reduzierenden und nicht-reduzierenden Bedingungen bestätigte die Integrität und Reinheit des rekombinanten murinen IgG2a-Antikörpers nach Protein-A/G-Aufreinigung.
Der rekombinante Antikörper wurde hergestellt, ohne das kontaminierte Hybridom erneut nutzen oder reaktivieren zu müssen. Nach der Lieferung hat der Kunde den rekombinanten Antikörper selbst getestet und bestätigt, dass er die gleichen Eigenschaften wie der Antikörper aus dem ursprünglichen Hybridom zeigte.
So erhielt Laboratorios LETI eine zuverlässige Möglichkeit, einen wertvollen Antikörper weiter zu nutzen und gleichzeitig die Abhängigkeit von einer alten, kontaminierten Zelllinie zu beseitigen. Durch die Sicherung der Moleküls im rekombinanten Format konnte das Projekt helfen, einen kritischen Antikörper aus Altbeständen zu bewahren, das Risiko von Lieferunterbrechungen zu reduzieren und die kontinuierliche Qualitätskontrolle und Protein-Detektion zu unterstützen.
Fazit
Mit De-novo-Sequenzierung und rekombinanter Antikörperproduktion half ProteoGenix Laboratorios LETI, einen wertvollen Altbestands-Antikörper aus einem kontaminierten Hybridom zu retten und dessen zukünftige Nutzung im rekombinanten Format zu sichern.
Dieser Ansatz machte die Dependence von der ursprünglichen Zelllinie überflüssig und bewahrte die nötigen Eigenschaften für kontinuierliche Qualitätskontrolle und Protein-Detektionsanwendungen.
Es war eine echte Freude, mit dem Team von ProteoGenix zusammenzuarbeiten. Alles verlief reibungslos, die Abstimmung war eng und effizient, und sie haben immer schnell auf alle Fragen oder Zweifel reagiert. Besonders wertvoll war, wie aufmerksam das Team über den gesamten Prozess hinweg war; die Kommunikation war stets flüssig und proaktiv. Die Liefertermine wurden perfekt eingehalten, was die Zusammenarbeit noch angenehmer machte. Ich würde mich freuen, in Zukunft wieder mit ihnen zusammenzuarbeiten.
