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View ProductsRecuperación de un anticuerpo de hibridoma de legado
Cliente
Laboratorios LETI
Sector
Salud animal
Aplicación
Control de calidad y detección de proteínas
Plazo
7 semanas
Procesos clave
- Secuenciación de novo
- Síntesis de genes VH/VL con optimización para CHO
- Transfecciones en células XtenCHO™ y expresión
- Purificación por afinidad (proteína A/G)
- SDS-PAGE para control de calidad
-
Acceso seguro a un anticuerpo crítico de legado
-
Eliminación de la dependencia de un hibridoma contaminado
-
Permite la continuidad del proyecto mediante producción recombinante
Contexto
Laboratorios LETI, activo en el sector de la salud animal, colaboró con ProteoGenix para asegurar el suministro de un anticuerpo monoclonal de ratón desarrollado por tecnología de hibridoma a finales de los años noventa.
El anticuerpo se utilizaba para el control de calidad y la detección de proteínas, sin embargo, el hibridoma original estaba contaminado con micoplasma, lo que hacía arriesgado su uso continuado. Dada la antigüedad de la línea celular y la calidad del material genético disponible, ProteoGenix recomendó la secuenciación de novo del anticuerpo, en lugar de la secuenciación convencional de ADN de hibridoma.
Tras la recuperación de la secuencia, las regiones VH y VL se injertaron en la misma estructura de IgG2a murina y se expresaron de manera recombinante. Esto permitió al cliente preservar el anticuerpo y seguir utilizándolo sin tener que reactivar el hibridoma original.
Desafíos
1
2
Superar la contaminación por micoplasma
3
Elegir la estrategia de secuenciación adecuada
4
Reconstrucción del anticuerpo en formato recombinante
Enfoque de ProteoGenix
Para este proyecto, adaptamos nuestro flujo de trabajo a los riesgos específicos asociados con una línea celular de hibridoma antigua y contaminada. En lugar de recurrir a la secuenciación convencional de ADN del hibridoma, nuestro equipo recomendó una estrategia de secuenciación de novo para recuperar la secuencia del anticuerpo directamente de la proteína.
- Secuenciación de novo y recuperación de la secuencia
El anticuerpo se analizó mediante LC-MS/MS utilizando una estrategia multienzimática para reconstruir las secuencias de las cadenas pesada y ligera.
2. Diseño del anticuerpo recombinante
Las regiones VH y VL recuperadas se sintetizaron como genes optimizados para CHO y se clonaron en el vector patentado de ProteoGenix pTXs1, utilizando la misma estructura de IgG2a murina que el anticuerpo original.
3. Producción piloto recombinante
El anticuerpo recombinante se produjo por transfección transitoria en células XtenCHO™, seguido de una expresión piloto (80L) y purificación por afinidad con proteína A/G.
4. Control de calidad
El anticuerpo purificado se analizó mediante SDS-PAGE y UV280 para evaluar su integridad y pureza antes de la entrega.
Resultados
ProteoGenix logró recuperar exitosamente la secuencia del anticuerpo monoclonal de ratón de legado y convertirlo en un formato recombinante. El análisis por SDS-PAGE en condiciones reducidas y no reducidas confirmó la integridad y pureza del anticuerpo recombinante murino IgG2a tras la purificación con proteína A/G.
El anticuerpo recombinante se produjo sin necesidad de reactivar ni explotar la línea celular de hibridoma contaminada. Tras la entrega, el cliente probó el anticuerpo recombinante por sus propios medios y confirmó que presentaba las mismas propiedades que el anticuerpo original derivado de hibridoma.
Esto ofreció a Laboratorios LETI una solución confiable para seguir utilizando un valioso anticuerpo, eliminando la dependencia de una línea celular antigua y contaminada. Al asegurar la molécula en formato recombinante, el proyecto ayudó a preservar un anticuerpo de legado fundamental, reducir el riesgo de interrupciones en el suministro y apoyar aplicaciones continuas de control de calidad y detección de proteínas.
Conclusión clave
A través de la secuenciación de novo y la producción recombinante de anticuerpos, ProteoGenix ayudó a Laboratorios LETI a rescatar un anticuerpo de legado valioso desde un hibridoma contaminado y asegurar su uso futuro en formato recombinante.
Este enfoque eliminó la necesidad de depender de la línea celular original y preservó las propiedades del anticuerpo requeridas para mantener las aplicaciones de control de calidad y detección de proteínas.
Fue un verdadero placer trabajar con el equipo de ProteoGenix. Todo fue muy fluido, la coordinación fue cercana y eficiente, y siempre respondieron rápidamente ante cualquier duda o pregunta. Realmente valoramos la atención que mostraron durante todo el proceso; en todo momento sentimos que la comunicación fue fluida y proactiva. Los plazos de entrega se cumplieron a la perfección, lo que hizo que la colaboración fuese aún más sencilla. Me encantaría volver a trabajar con ellos en el futuro.
