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Universidad australiana
Investigación
Inmuno-Oncología
Cáncer de ovario
El objetivo del proyecto fue generar un ADC caracterizado para un estudio preclínico académico de prueba de concepto en inmuno-oncología de cáncer de ovario. Utilizando el anticuerpo IgG1 humano completo proporcionado por el cliente y el fármaco Vc-MMAE seleccionado, ProteoGenix desarrolló un flujo de trabajo de conjugación sitio-específica dirigido a un DAR de 4, preservando la integridad del anticuerpo.
La estrategia de desarrollo se organizó en dos fases secuenciales. Primero, se realizó un estudio de viabilidad para validar las condiciones experimentales e identificar la mejor estrategia de conjugación. Después, la condición seleccionada fue trasladada a una fase de acoplamiento y caracterización a mayor escala.
El objetivo final fue obtener un anticuerpo monoclonal acoplado a Vc-MMAE con un DAR controlado de 4, manteniendo la integridad del anticuerpo y limitando la agregación.
Verificar la idoneidad del anticuerpo nativo para la conjugación sitio-específica del ADC
Lograr una conjugación controlada con Vc-MMAE con un DAR objetivo de 4
Mantener la pureza monomérica del anticuerpo tras el proceso de bioconjugación
Preservar la integridad del anticuerpo antes y después de la conjugación
ProteoGenix implementó un flujo de trabajo de desarrollo de ADC en dos pasos, comenzando con un estudio de viabilidad para validar las condiciones de conjugación, seguido de un acoplamiento y caracterización a mayor escala.
Se analizó el anticuerpo IgG1 humano completo mediante HPLC-HIC, HPLC-SEC y SDS-PAGE para confirmar su idoneidad en la conjugación. Estos análisis determinaron el perfil de referencia para DAR 0, confirmaron que el anticuerpo era predominantemente monomérico y no mostró fragmentación detectable.
El anticuerpo fue intercambiado a un tampón fosfato apropiado y conjugado con Vc-MMAE mediante una estrategia sitio-específica basada en un enlazador MC-Val-Cit-PAB. Durante la fase de viabilidad, se probaron varias condiciones para identificar los parámetros de conjugación más adecuados.
El ADC resultante se caracterizó mediante HPLC-HIC, HPLC-SEC y SDS-PAGE para evaluar la distribución del DAR, pureza monomérica, agregación e integridad del anticuerpo. La condición óptima se aplicó a una conjugación a mayor escala, utilizando el mismo flujo de trabajo analítico para confirmar la reproducibilidad y calidad final del ADC.
La fase de viabilidad confirmó que el anticuerpo IgG1 humano completo proporcionado por el cliente era adecuado para la conjugación sitio-específica con Vc-MMAE. El anticuerpo nativo era principalmente monomérico, sin fragmentación detectable mediante SDS-PAGE y una retención por HPLC-HIC coherente con un DAR 0.
Tras la conjugación, el análisis HPLC-HIC demostró que la especie con DAR objetivo 4 era predominante, con un DAR promedio de 4,0. El análisis SEC confirmó que el proceso de conjugación no indujo agregación detectable, con una pureza monomérica del 96,1%.
La conjugación a mayor escala reprodujo los resultados del estudio de viabilidad con un perfil HPLC-HIC similar. Como se muestra en la figura, el lote final de ADC presentó una especie principal de DAR 4, que representó el 56,7% del área relativa del pico, con un DAR promedio de 3,8. El análisis SEC confirmó la ausencia de agregación tras la conjugación, con una pureza monomérica del 92,2%.
Se entregaron un poco más de 6 mg de ADC final al cliente, junto con un informe analítico completo. Esto proporcionó al equipo académico un lote de ADC caracterizado y los datos de respaldo necesarios para continuar con su evaluación preclínica de prueba de concepto en cáncer de ovario en inmuno-oncología.
En conjunto, estos resultados analíticos confirmaron que la estrategia de conjugación sitio-específica permitió un acoplamiento controlado del anticuerpo IgG1 humano completo con Vc-MMAE, preservando la integridad del anticuerpo y manteniendo una alta pureza monomérica.
ProteoGenix desarrolló un flujo de trabajo de conjugación de ADC sitio-específica para un anticuerpo IgG1 humano completo acoplado a Vc-MMAE, apoyando un proyecto preclínico de prueba de concepto en cáncer de ovario.
Combinando ensayos de viabilidad, conjugación controlada y validación analítica, ProteoGenix ayudó a reducir el riesgo de desarrollo y a resolver los principales desafíos del proyecto: demostrar la idoneidad del anticuerpo, alcanzar un DAR próximo a 4 y preservar la calidad del ADC tras la conjugación.
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