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Australische Universität
Forschung
Immunonkologie
Ovarialkarzinom
Ziel des Projekts war die Herstellung eines charakterisierten ADC (Antibody-Drug-Conjugate) für eine akademische präklinische Machbarkeitsstudie im Bereich Ovarialkarzinom-Immunonkologie. Mit dem vollwertigen humanen IgG1-Antikörper des Kunden und dem ausgewählten Vc-MMAE-Payload entwickelte ProteoGenix einen ortsspezifischen Konjugations-Workflow mit Ziel-DAR von 4, wobei die Integrität des Antikörpers erhalten blieb.
Die Entwicklungsstrategie umfasste zwei aufeinanderfolgende Phasen. Zunächst wurde eine Machbarkeitsstudie durchgeführt, um die experimentellen Bedingungen zu validieren und die beste Konjugationsstrategie zu identifizieren. Anschließend wurde die ausgewählte Bedingung in die Hochskalierungs- und Charakterisierungsphase übertragen.
Das Endziel bestand darin, einen monoklonalen Antikörper an Vc-MMAE zu koppeln, einen kontrollierten DAR von 4 zu erreichen, die Integrität des Antikörpers zu bewahren und Aggregation zu minimieren.
Eignung des nativen Antikörpers für die ortsspezifische ADC-Konjugation feststellen
Erreichung einer kontrollierten Konjugation an Vc-MMAE mit Ziel-DAR von 4
Erhalt der monomeren Reinheit des Antikörpers nach Biokonjugation
Bewahrung der Antikörperintegrität vor und nach der Konjugation
ProteoGenix implementierte einen zweistufigen ADC-Entwicklungsprozess, beginnend mit einer Machbarkeitsstudie zur Validierung der Konjugationsbedingungen, gefolgt von Hochskalierung und analytischer Charakterisierung.
Der vollwertige humane IgG1-Antikörper wurde zunächst per HPLC-HIC, HPLC-SEC und SDS-PAGE analysiert, um die Eignung für die Konjugation zu bestätigen. Diese Analysen etablierten das DAR-0-Referenzprofil, zeigten überwiegend monomeres Antikörperprofil und keine Fragmentierung.
Der Antikörper wurde in ein geeignetes Phosphatpuffer umgepuffert und mittels einer ortsspezifischen Strategie auf Basis eines MC-Val-Cit-PAB-Linkers an Vc-MMAE gekoppelt. In der Machbarkeitsphase wurden mehrere Bedingungen für die optimale Konjugation getestet.
Das resultierende ADC wurde per HPLC-HIC, HPLC-SEC und SDS-PAGE charakterisiert, um DAR-Verteilung, monomere Reinheit, Aggregation und Integrität zu bewerten. Die erfolgreichsten Bedingungen wurden für die Hochskalierung übernommen, wobei die gleiche Analytik zur Bestätigung der Reproduzierbarkeit und Qualität eingesetzt wurde.
Die Machbarkeitsstudie bestätigte, dass der kundenseitig bereitgestellte vollwertige humane IgG1-Antikörper zur ortsspezifischen Konjugation an Vc-MMAE geeignet war. Der native Antikörper lag überwiegend monomer vor, zeigte keine Fragmentierung (SDS-PAGE) und wies eine konstante HPLC-HIC-Retentionszeit für DAR 0 auf.
Nach der Konjugation zeigte die HPLC-HIC, dass die Ziel-DAR-4-Spezies überwog, mit durchschnittlichem DAR von 4,0. Die SEC-Analyse bestätigte, dass keine Aggregation induziert wurde, mit einer monomeren Reinheit von 96,1 %.
Die Hochskalierung reproduzierte die Machbarkeitsergebnisse mit ähnlichem HPLC-HIC-Profil. Die finale ADC-Charge zeigte überwiegend die DAR-4-Spezies mit 56,7 % der relativen Peak-Fläche bei einem durchschnittlichen DAR von 3,8. Die SEC-Analyse bestätigte das Ausbleiben von Aggregation, die monomere Reinheit lag bei 92,2 %.
Es wurden etwas mehr als 6 mg des finalen ADC an den Kunden geliefert, zusammen mit einem vollständigen Analysebericht. Damit erhielt das akademische Team eine charakterisierte ADC-Charge und die erforderlichen Begleitdaten zur Fortsetzung ihrer präklinischen Machbarkeitsstudie zum Ovarialkarzinom in der Immunonkologie.
Zusammenfassend bestätigen diese Analysedaten, dass die ortsspezifische Konjugationsstrategie eine kontrollierte Kopplung des vollwertigen humanen IgG1-Antikörpers an Vc-MMAE ermöglichte, wobei die Antikörperintegrität und eine hohe monomere Reinheit erhalten blieben.
ProteoGenix entwickelte einen ortsspezifischen ADC-Konjugations-Workflow für einen vollwertigen humanen IgG1-Antikörper gekoppelt an Vc-MMAE und unterstützte ein präklinisches Machbarkeitsprojekt im Bereich Ovarialkarzinom.
Durch Machbarkeitstests, kontrollierte Konjugation und analytische Validierung half ProteoGenix, das Entwicklungsrisiko zu senken und die wichtigsten Projektanforderungen zu adressieren: Bestätigung der Antikörpereignung, Erreichen eines DAR nahe 4 sowie die Sicherung der ADC-Qualität nach der Konjugation.
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