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Università australiana
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Immuno-oncologia
Cancro ovarico
Il progetto mirava a generare un ADC caratterizzato per uno studio preclinico accademico proof-of-concept nell’immuno-oncologia del cancro ovarico. Utilizzando l’anticorpo umano IgG1 a lunghezza intera fornito dal cliente e il payload selezionato Vc-MMAE, ProteoGenix ha sviluppato un workflow di coniugazione sito-specifica mirato a raggiungere un DAR di 4 preservando l’integrità dell’anticorpo.
La strategia di sviluppo è stata organizzata in due fasi sequenziali. Prima, è stato condotto uno studio di fattibilità per validare le condizioni sperimentali e identificare la migliore strategia di coniugazione. Successivamente, la condizione selezionata è stata trasferita a una fase di accoppiamento su scala maggiore con caratterizzazione analitica.
L’obiettivo finale era ottenere un anticorpo monoclonale accoppiato a Vc-MMAE con un DAR controllato di 4, mantenendo l’integrità dell’anticorpo e limitando l’aggregazione.
Valutare l’idoneità dell’anticorpo nativo per la coniugazione sito-specifica ADC
Ottenere una coniugazione controllata a Vc-MMAE con un DAR target di 4
Mantenere la purezza monomerica dell’anticorpo dopo il processo di bioconiugazione
Preservare l’integrità dell’anticorpo prima e dopo la coniugazione
ProteoGenix ha implementato un workflow di sviluppo ADC in due fasi, iniziando con uno studio di fattibilità per validare le condizioni di coniugazione, seguito da accoppiamento e caratterizzazione su scala maggiore.
L’anticorpo umano IgG1 a lunghezza intera è stato analizzato tramite HPLC-HIC, HPLC-SEC e SDS-PAGE per confermare l’idoneità alla coniugazione. Queste analisi hanno stabilito il profilo di riferimento DAR 0, confermato la predominanza monomerica dell’anticorpo e l’assenza di frammentazione rilevabile.
L’anticorpo è stato trasferito in un tampone fosfato idoneo e coniugato con Vc-MMAE usando una strategia sito-specifica basata su linker MC-Val-Cit-PAB. Durante la fase di fattibilità sono state testate diverse condizioni per individuare i parametri di coniugazione più adeguati.
L’ADC ottenuto è stato caratterizzato tramite HPLC-HIC, HPLC-SEC e SDS-PAGE per valutare la distribuzione del DAR, la purezza monomerica, l’aggregazione e l’integrità dell’anticorpo. La migliore condizione è stata riprodotta su scala maggiore utilizzando lo stesso workflow analitico per confermare la riproducibilità e la qualità finale dell’ADC.
La fase di fattibilità ha confermato che l’anticorpo umano IgG1 a lunghezza intera fornito dal cliente era idoneo per la coniugazione sito-specifica con Vc-MMAE. L’anticorpo nativo risultava prevalentemente monomerico, senza frammentazione rilevabile tramite SDS-PAGE, e mostrava un tempo di ritenzione HPLC-HIC costante corrispondente a DAR 0.
Dopo la coniugazione, HPLC-HIC ha mostrato che la specie con DAR 4 target era predominante, con un DAR medio di 4.0. L’analisi SEC ha confermato che la coniugazione non ha indotto aggregazione rilevabile, con una purezza monomerica del 96,1%.
La coniugazione su scala maggiore ha riprodotto i risultati della fase di fattibilità con un profilo HPLC-HIC simile. Come illustrato nella figura, il lotto finale di ADC ha mostrato una specie predominante a DAR 4, che rappresenta il 56,7% dell’area di picco relativa, con un DAR medio di 3,8. L’analisi SEC ha confermato l’assenza di aggregazione dopo la coniugazione, con una purezza monomerica del 92,2%.
Sono stati consegnati al cliente poco più di 6 mg di ADC finale, accompagnati da un report analitico completo. Questo ha permesso al team accademico di disporre di un lotto caratterizzato e dei dati necessari per proseguire la valutazione preclinica proof-of-concept nell’immuno-oncologia del cancro ovarico.
Complessivamente, questi risultati analitici hanno confermato che la strategia di coniugazione sito-specifica ha permesso un accoppiamento controllato dell’anticorpo umano IgG1 a lunghezza intera a Vc-MMAE, preservando l’integrità dell’anticorpo e mantenendo un’elevata purezza monomerica.
ProteoGenix ha sviluppato un workflow di coniugazione ADC sito-specifica per un anticorpo umano IgG1 a lunghezza intera accoppiato a Vc-MMAE, supportando un progetto preclinico proof-of-concept sul cancro ovarico.
Unendo test di fattibilità, coniugazione controllata e validazione analitica, ProteoGenix ha contribuito a ridurre il rischio di sviluppo affrontando le principali sfide: conferma dell’idoneità dell’anticorpo, raggiungimento di un DAR vicino a 4 e conservazione della qualità dell’ADC dopo la coniugazione.
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