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Université australienne
Recherche
Immuno-Oncologie
Cancer de l’ovaire
Le projet visait à générer un ADC caractérisé pour une étude académique de preuve de concept préclinique dans le domaine immuno-oncologique du cancer de l’ovaire. En utilisant l’anticorps IgG1 humain complet du client et le payload Vc-MMAE sélectionné, ProteoGenix a développé un workflow de conjugaison site-spécifique visant un DAR de 4 tout en préservant l’intégrité de l’anticorps.
La stratégie de développement a été organisée en deux phases séquentielles. Tout d’abord, une étude de faisabilité a permis de valider les conditions expérimentales et d’identifier la meilleure stratégie de conjugaison. Ensuite, la condition sélectionnée a été transférée à une phase de couplage à plus grande échelle et de caractérisation.
L’objectif final était d’obtenir un anticorps monoclonal couplé à Vc-MMAE avec un DAR contrôlé de 4 tout en préservant l’intégrité de l’anticorps et en limitant l’agrégation.
Établir l’adéquation de l’anticorps natif pour la conjugaison site-spécifique d’un ADC
Obtenir une conjugaison contrôlée à Vc-MMAE avec un DAR cible de 4
Maintenir la pureté monomérique de l’anticorps après bioconjugaison
Préserver l’intégrité de l’anticorps avant et après la conjugaison
ProteoGenix a mis en œuvre un workflow de développement ADC en deux étapes, débutant par une étude de faisabilité pour valider les conditions de conjugaison, suivie d’un couplage et d’une caractérisation à plus grande échelle.
L’anticorps IgG1 humain complet natif a d’abord été analysé par HPLC-HIC, HPLC-SEC et SDS-PAGE pour confirmer son aptitude à la conjugaison. Ces analyses ont établi le profil de référence DAR 0, confirmé que l’anticorps était essentiellement monomérique et montré l’absence de fragmentation détectable.
L’anticorps a été transféré dans un tampon phosphate adapté avant conjugaison à Vc-MMAE selon une stratégie site-spécifique reposant sur le linker MC-Val-Cit-PAB. Plusieurs conditions ont été testées lors de la phase de faisabilité afin d’identifier les paramètres de conjugaison les plus adaptés.
L’ADC obtenu a été caractérisé par HPLC-HIC, HPLC-SEC et SDS-PAGE pour évaluer la distribution des DAR, la pureté monomérique, l’agrégation et l’intégrité anticorps. La condition optimale a ensuite été appliquée à une conjugaison à plus grande échelle, en utilisant le même workflow analytique afin de confirmer la reproductibilité et la qualité finale de l’ADC.
La phase de faisabilité a confirmé que l’anticorps IgG1 humain complet fourni par le client était adapté à la conjugaison site-spécifique à Vc-MMAE. L’anticorps natif était majoritairement monomérique, ne présentait aucune fragmentation détectable par SDS-PAGE, et affichait un temps de rétention HPLC-HIC cohérent avec le DAR 0.
Après conjugaison, la HPLC-HIC a montré une prédominance de l’espèce DAR 4 avec un DAR moyen de 4,0. L’analyse SEC a confirmé que le processus de conjugaison n’a pas induit d’agrégation détectable, avec une pureté monomérique de 96,1 %.
La conjugaison à plus grande échelle a reproduit les résultats de faisabilité avec un profil HPLC-HIC similaire. Comme illustré dans la figure, le lot final d’ADC présentait une espèce DAR 4 prédominante représentant 56,7 % de l’aire sous la courbe, avec un DAR moyen de 3,8. L’analyse SEC a confirmé l’absence d’agrégation après conjugaison, avec une pureté monomérique de 92,2 %.
Un peu plus de 6 mg d’ADC final ont été livrés au client, accompagnés d’un rapport analytique complet. L’équipe académique disposait ainsi d’un lot d’ADC caractérisé et de toutes les données nécessaires pour poursuivre l’évaluation préclinique de preuve de concept en immuno-oncologie pour le cancer de l’ovaire.
Ensemble, ces résultats analytiques confirment que la conjugaison site-spécifique a permis un couplage contrôlé de l’anticorps IgG1 humain complet à Vc-MMAE tout en préservant l’intégrité de l’anticorps et une haute pureté monomérique.
ProteoGenix a développé un workflow de conjugaison site-spécifique pour un anticorps IgG1 humain complet couplé à Vc-MMAE, soutenant un projet de preuve de concept préclinique sur le cancer de l’ovaire.
En combinant test de faisabilité, conjugaison contrôlée et validation analytique, ProteoGenix a permis de réduire les risques de développement tout en répondant aux principaux défis du projet : valider l’anticorps, atteindre un DAR proche de 4, et préserver la qualité de l’ADC après conjugaison.
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