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Universidad de California
Investigación
PD-1 para cáncer de pulmón no microcítico
3 semanas
Una universidad californiana dedicada a la inmunooncología colaboró con ProteoGenix para identificar enlazadores VHH contra PD-1, un punto de control inmunológico clave en la investigación del cáncer de pulmón no microcítico.
Utilizando el antígeno PD-1 facilitado por el cliente, ProteoGenix cribó una biblioteca VHH camelidae naïve de alta diversidad para identificar candidatos enlazadores en etapa inicial. Se garantizaba inicialmente proporcionar al menos 3 secuencias de enlazadores, con el objetivo de generar un panel más amplio para su evaluación posterior.
ProteoGenix aplicó una estrategia escalonada de despliegue en fagos, combinando biopanning, cribado ELISA, pruebas de confirmación y secuenciación para maximizar la diversidad de enlazadores y entregar rápidamente candidatos VHH validados.
Identificar enlazadores específicos contra el objetivo PD-1
Monitorizar el enriquecimiento conservando la diversidad de fagos
Seleccionar enlazadores individuales con señal antigénica fuerte y bajo fondo
Confirmar la especificidad de los clones antes de la entrega de secuencias
ProteoGenix implementó un flujo de trabajo escalonado de despliegue en fagos VHH, desde el biopanning antigénico hasta la confirmación mediante ELISA y la entrega de secuencias.
ProteoGenix realizó una campaña de despliegue utilizando una biblioteca VHH camelidae naïve con una diversidad de 1,51 × 10¹⁰ clones diferentes. El antígeno PD-1 proporcionado por el cliente se utilizó como diana para el biopanning.
Se realizaron tres rondas de biopanning, mostrando un enriquecimiento significativo de fagos con afinidad al antígeno. El ELISA de fagos policlonales confirmó una unión específica fuerte con fondo muy bajo, lo cual apoyó la selección de la ronda 1 para el cribado monoclonal para preservar la diversidad de enlazadores.
Se cribaron un total de 96 clones individuales mediante ELISA de fagos monoclonales. Treinta clones fueron claramente positivos y seleccionados para su secuenciación, lo que resultó en 14 secuencias VHH únicas.
Los 14 clones únicos fueron reprobados mediante ELISA de confirmación para verificar la especificidad. Los resultados confirmaron una unión fuerte y específica para PD-1, y todas las secuencias se entregaron al cliente para su evaluación.
La campaña identificó exitosamente 14 secuencias únicas de VHH que se unen a PD-1. Los 14 clones fueron confirmados mediante ELISA por su unión específica y fuerte al antígeno, con fondo muy bajo en el control negativo con tampón (ver figura).
Aunque la garantía inicial del proyecto era al menos 3 secuencias, ProteoGenix entregó 14 secuencias enlazadoras únicas al cliente.
El cliente expresó luego los 14 anticuerpos como VHH recombinantes y los probó frente a células que sobreexpresan PD-1 en su superficie. Diez de los 14 VHHs mostraron unión clara a las células diana en comparación con las células de control. De estos, 5 VHH también presentaron actividad bloqueante.
ProteoGenix ayudó al cliente a construir rápidamente un sólido panel de candidatos VHH dirigidos a PD-1 para la investigación del cáncer de pulmón no microcítico, entregando 14 secuencias enlazadoras únicas superando el mínimo garantizado de 3.
La campaña amplió las opciones del cliente para la evaluación posterior, con 10 VHH recombinantes confirmados en su unión a células que expresan PD-1 y 5 mostrando actividad bloqueante.
Al entregar un grupo más amplio y funcionalmente relevante de candidatos en solo 3 semanas, ProteoGenix aceleró y minimizó los riesgos del flujo de trabajo de descubrimiento de anticuerpos en etapas tempranas del cliente.
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Los 14 anticuerpos se expresaron como VHH recombinantes y se probaron contra células que sobreexpresan PD-1 en su superficie. Diez de ellos se unieron bien a las células con una clara diferencia respecto a las células de control, de los cuales 5 incluso mostraron actividad bloqueante. En general, tenemos muchos más clones de los esperados y estamos muy satisfechos.
