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Università californiana
Ricerca
PD-1 per carcinoma polmonare non a piccole cellule
3 settimane
Un’università californiana attiva nell’immuno-oncologia ha collaborato con ProteoGenix per identificare VHH leganti contro PD-1, un importante target immunitario nella ricerca sul carcinoma polmonare non a piccole cellule.
Utilizzando l’antigene PD-1 fornito dal cliente, ProteoGenix ha analizzato una libreria naïve di VHH camelide ad alta diversità per individuare i candidati binder nelle fasi iniziali. La garanzia iniziale era di almeno 3 sequenze binder, con l’obiettivo di generare un pannello più ampio per valutazioni successive.
ProteoGenix ha applicato una strategia stepwise di phage display combinando biopanning, screening ELISA, test di conferma e sequenziamento per massimizzare la diversità dei binder e fornire rapidamente candidati VHH validati.
Identificare binder specifici contro il target PD-1
Monitorare l’arricchimento preservando la diversità fagica
Selezionare binder individuali con forte segnale specifico per l’antigene e bassa background
Confermare la specificità dei cloni prima della consegna delle sequenze
ProteoGenix ha implementato un workflow di phage display VHH a fasi, dal biopanning dell’antigene fino alla conferma dei binder via ELISA e consegna delle sequenze.
ProteoGenix ha condotto una campagna di phage display utilizzando una libreria naïve di VHH camelide con una diversità di 1,51 × 10¹⁰ cloni differenti. L’antigene PD-1 fornito dal cliente è stato usato come target per il biopanning.
Sono stati eseguiti tre round di biopanning, che hanno mostrato un arricchimento significativo dei fagi con legame all’antigene. L’ELISA policlonale ha confermato un forte legame specifico con background molto basso, motivando la selezione del round 1 per lo screening monoclonale al fine di preservare la diversità dei binder.
Sono stati analizzati 96 cloni individuali tramite ELISA monoclonale. Trenta cloni sono risultati chiaramente positivi e selezionati per il sequenziamento, ottenendo 14 sequenze VHH uniche.
Tutti i 14 cloni unici sono stati ri-testati tramite ELISA di conferma per verificarne la specificità. I risultati hanno confermato un legame forte e specifico a PD-1 e tutte le 14 sequenze sono state consegnate al cliente per le valutazioni successive.
La campagna ha identificato con successo 14 sequenze VHH uniche leganti il target PD-1. Tutti i 14 cloni sono stati confermati mediante ELISA per il legame forte e specifico all’antigene, con background molto basso sul controllo negativo rivestito solo di buffer (vedi figura).
Sebbene la garanzia iniziale del progetto fosse di almeno 3 sequenze, ProteoGenix ha consegnato al cliente 14 sequenze binder uniche.
Il cliente ha poi espresso i 14 anticorpi come VHH ricombinanti e li ha testati su cellule che sovraesprimevano PD-1 in superficie. Dieci dei 14 VHH hanno mostrato un chiaro legame alle cellule target rispetto alle cellule di controllo. Tra questi, 5 VHH hanno anche mostrato attività di blocco.
ProteoGenix ha aiutato il cliente a costruire rapidamente un solido pannello di candidati VHH anti-PD-1 per la ricerca sul carcinoma polmonare non a piccole cellule, consegnando 14 sequenze binder uniche invece del minimo garantito di 3.
La campagna ha fornito al cliente più opzioni per valutazioni successive, con 10 VHH ricombinanti confermati per il legame alle cellule esprimenti PD-1 e 5 con attività di blocco.
Fornendo un pool più ampio e funzionalmente rilevante in solo 3 settimane, ProteoGenix ha accelerato e ridotto il rischio del workflow di scoperta precoce di anticorpi del cliente.
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I 14 anticorpi sono stati espressi come VHH ricombinanti e testati su cellule che sovraesprimevano PD-1 in superficie. Dieci di essi hanno mostrato un ottimo legame alle cellule con uno shift chiaro rispetto alle cellule di controllo, 5 dei quali hanno anche attività di blocco. Nel complesso abbiamo molti più cloni del previsto e ne siamo molto soddisfatti.
