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Kalifornische Universität
Forschung
PD-1 für nicht-kleinzelligen Lungenkrebs
3 Wochen
Eine kalifornische Universität aus dem Bereich Immunonkologie arbeitete mit ProteoGenix zusammen, um VHH-Binder gegen PD-1, ein zentrales Immun-Checkpoint-Ziel für die Forschung zu nicht-kleinzelligem Lungenkrebs, zu identifizieren.
Mit dem vom Kunden bereitgestellten PD-1-Antigen screenete ProteoGenix eine hochdiverse naiven Kameliden-VHH-Bibliothek, um frühe Binder-Kandidaten zu finden. Die Garantie zu Projektbeginn lag bei mindestens 3 Binde-Sequenzen, Ziel war jedoch die Generierung eines breiteren Panels für Folgeuntersuchungen.
ProteoGenix wandte eine schrittweise Phage-Display-Strategie an – kombiniert mit Biopanning, ELISA-Screening, Bestätigungstests und Sequenzierung –, um die Binder-Diversität zu maximieren und validierte VHH-Kandidaten rasch bereitzustellen.
Spezifische Binder gegen das Zielantigen PD-1 identifizieren
Anreicherung überwachen und gleichzeitig Phagen-Diversität erhalten
Einzelne Binder mit starkem, antigenselektivem Signal und geringem Hintergrund auswählen
Klon-Spezifität vor der Sequenzausgabe bestätigen
ProteoGenix implementierte einen schrittweisen VHH-Phage-Display-Workflow: vom Antigen-Biopanning über ELISA-basierte Binder-Bestätigung bis hin zur Sequenzausgabe.
ProteoGenix führte eine Phage-Display-Kampagne mit einer naiven Kameliden-VHH-Bibliothek mit einer Diversität von 1,51 × 1010 verschiedenen Klonen durch. Das vom Kunden bereitgestellte PD-1-Antigen wurde für das Biopanning eingesetzt.
Es wurden drei Biopanning-Runden durchgeführt, wobei eine signifikante Anreicherung von Antigen-bindenden Phagen festgestellt wurde. Polykolnale Phagen-ELISA bestätigten starke spezifische Bindung bei sehr geringem Hintergrund. Daher wurde Runde 1 für das monoklonale Screening ausgewählt, um Binder-Diversität zu erhalten.
Insgesamt wurden 96 Einzelklone mittels monoklonalen Phagen-ELISA untersucht. Dreißig Klone waren eindeutig positiv und wurden sequenziert, was zu 14 einzigartigen VHH-Sequenzen führte.
Alle 14 einzigartigen Klone wurden zum Nachweis der Spezifität im Bestätigungs-ELISA erneut getestet. Die Ergebnisse zeigten eine starke und spezifische Bindung an PD-1 und alle 14 Sequenzen wurden dem Kunden zur weiteren Auswertung geliefert.
Im Rahmen der Kampagne wurden erfolgreich 14 einzigartige VHH-Sequenzen mit spezifischer Bindung an PD-1 identifiziert. Alle 14 Klone wurden per ELISA bestätigt und zeigten eine starke und spezifische Bindung an das Antigen mit sehr geringem Hintergrund gegenüber der gepufferten Negativkontrolle (siehe Abbildung).
Obwohl die anfängliche Projektgarantie mindestens 3 Sequenzen vorsah, lieferte ProteoGenix 14 einzigartige Binder-Sequenzen an den Kunden.
Der Kunde exprimierte die 14 Antikörper daraufhin als rekombinante VHHs und prüfte diese an Zellen mit Oberflächenexpression von PD-1. Zehn der 14 VHHs zeigten eine klare Bindung an die Zielzellen im Vergleich zu Kontrollzellen. Davon wiesen 5 VHHs zudem Blockierungsaktivität auf.
ProteoGenix unterstützte den Kunden dabei, schnell ein schlagkräftiges Panel von PD-1-spezifischen VHH-Kandidaten für die Forschung zu nicht-kleinzelligem Lungenkrebs zu generieren. Statt der garantiert 3 wurden 14 einzigartige Binder-Sequenzen geliefert.
Durch diese Kampagne hatte der Kunde deutlich mehr Optionen für nachfolgende Untersuchungen: 10 rekombinante VHHs bestätigten die Bindung an PD-1 exponierende Zellen, 5 zeigten Blockierungsaktivität.
Mit einem umfassenderen und funktional relevanten Kandidatenpool in nur 3 Wochen beschleunigte und vereinfachte ProteoGenix die frühphasige Antikörperentwicklung des Kunden.
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Die 14 Antikörper wurden als rekombinante VHHs exprimiert und an Zellen mit PD-1-Oberflächenexpression getestet. Zehn davon banden deutlich an die Zellen mit einem klaren Unterschied zu den Kontrollzellen; davon zeigten 5 sogar Blockierungsaktivität. Insgesamt haben wir viel mehr Klone erhalten als erwartet und sind sehr zufrieden.
