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Université californienne
Recherche
PD-1 pour le cancer du poumon non à petites cellules
3 semaines
Une université californienne spécialisée en immuno-oncologie a collaboré avec ProteoGenix pour identifier des VHH liant PD-1, une cible majeure du checkpoint immunitaire dans la recherche sur le cancer du poumon non à petites cellules.
Avec l’antigène PD-1 fourni par le client, ProteoGenix a criblé une bibliothèque naïve de VHH de camélidés à haute diversité pour sélectionner des candidats liants en phase précoce. La garantie initiale portait sur au moins 3 séquences liantes, avec pour objectif de générer un panel élargi pour l’évaluation aval.
ProteoGenix a appliqué une approche phage display progressive alliant biopannage, criblage ELISA, tests de confirmation et séquençage pour maximiser la diversité des amorces et livrer rapidement des candidats VHH validés.
Identifier des liants spécifiques contre la cible PD-1
Suivre l’enrichissement tout en préservant la diversité des phages
Sélectionner des liants individuels avec un signal antigène-spécifique élevé et un faible bruit de fond
Confirmer la spécificité des clones avant la livraison des séquences
ProteoGenix a mis en œuvre un workflow phage display VHH en plusieurs étapes, du biopannage antigénique à la confirmation des liants par ELISA jusqu’à la livraison des séquences.
ProteoGenix a réalisé une campagne phage display à l’aide d’une bibliothèque VHH de camélidé naïve avec une diversité de 1,51 × 10¹⁰ clones différents. L’antigène PD-1 fourni par le client a été utilisé comme cible du biopannage.
Trois cycles de biopannage ont été menés, démontrant un enrichissement significatif en phages liés à l’antigène. Un ELISA phagique polyclonal a confirmé une liaison spécifique forte avec un bruit de fond très faible, permettant la sélection du tour 1 pour un criblage monoclonal afin de préserver la diversité.
Au total, 96 clones individuels ont été testés en ELISA phagique monoclonal. Trente clones ont été clairement positifs et sélectionnés pour séquençage, ce qui a permis d’identifier 14 séquences VHH uniques.
Les 14 clones uniques ont tous été re-testés par ELISA de confirmation afin de vérifier leur spécificité. Les résultats ont confirmé une forte liaison spécifique à PD-1, et les 14 séquences ont été livrées au client pour évaluation ultérieure.
La campagne a permis d’identifier 14 séquences VHH uniques contre PD-1. Les 14 clones ont tous été confirmés par ELISA pour leur liaison spécifique et forte à l’antigène, avec un bruit de fond très faible sur le contrôle négatif tampon (voir figure).
Bien que la garantie initiale du projet portait sur au moins 3 séquences, ProteoGenix a livré 14 séquences de liants uniques au client.
Le client a alors exprimé les 14 anticorps sous forme de VHH recombinants et les a testés contre des cellules surexprimant PD-1 en surface. Dix des 14 VHH ont montré une liaison nette avec les cellules cibles versus cellules témoins. Parmi eux, 5 VHH ont également démontré une activité de blocage.
ProteoGenix a permis au client de constituer rapidement un panel solide de candidats VHH ciblant PD-1 pour la recherche sur le cancer du poumon non à petites cellules, en livrant 14 séquences de liants au lieu du minimum garanti de 3.
La campagne a offert au client plus d’options pour l’évaluation aval, avec 10 VHH recombinants confirmés comme liants des cellules exprimant PD-1 et 5 présentant une activité de blocage.
En fournissant un pool de candidats élargi et fonctionnel en seulement 3 semaines, ProteoGenix a permis d’accélérer et de sécuriser la phase de découverte d’anticorps du client.
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Les 14 anticorps ont été exprimés sous forme de VHH recombinants et testés sur des cellules surexprimant PD-1 en surface. Dix se lient efficacement aux cellules avec un déplacement clair par rapport aux cellules témoins, dont 5 présentent une activité de blocage. Globalement, nous avons bien plus de clones qu’attendu et en sommes très satisfaits.
