ANTICUERPOS PARA CITOMETRÍA DE FLUJO

¿No encuentra el anticuerpo adecuado para su experimento de citometría de flujo? Evite elegir el incorrecto. Confíe en nuestros expertos en generación de anticuerpos para desarrollar el suyo. Nuestra plataforma de generación de hibridomas para aplicaciones de diagnóstico tiene una tasa de éxito inigualable en la generación de anticuerpos monoclonales. Esto nos da tanta confianza en nuestra capacidad para satisfacer sus requisitos que incluso incluimos una prueba en su propio laboratorio dentro de nuestra garantía.

Entregables tras el pago total:

• 1,9 mg de anticuerpo purificado
• Una línea celular de hibridoma (4 viales congelados)
• 150µg de proteína purificada
• Gen en pUC57

¿Qué formato de anticuerpo es el ideal para citometría de flujo?

Anticuerpos policlonales se generan inmunizando a un hospedador con su antígeno diana y recolectando el suero. Es la manera más económica de producir grandes cantidades de anticuerpos contra una diana específica. Si su principal preocupación es detectar un antígeno específico en sus células, los anticuerpos policlonales pueden ser suficientes. Sin embargo, tenga en cuenta que los anticuerpos policlonales presentan menor especificidad en comparación con los monoclonales, lo que puede dar lugar a uniones inespecíficas. Este inconveniente puede superarse parcialmente mediante un diseño cuidadoso del antígeno.

Anticuerpos monoclonales se obtienen generalmente fusionando esplenocitos productores de mAb con células mieloma para formar hibridomas. Los hibridomas tienen la particularidad de secretar un anticuerpo idéntico al de la célula parental. Frente a los policlonales, los anticuerpos monoclonales permiten obtener datos más limpios gracias a su capacidad de unirse a un único epítopo.

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¿Cómo debe marcar sus anticuerpos
para citometría de flujo? Marcaje directo vs. indirecto

Una de las preguntas más frecuentes al desarrollar anticuerpos para citometría de flujo es: “¿Cómo debo elegir entre marcaje directo e indirecto?”. Desafortunadamente, no existe una respuesta única. Sin embargo, podemos compartir algunos elementos que le ayudarán a tomar la decisión adecuada.

El marcaje directo consiste en utilizar un anticuerpo primario marcado. Esto significa que la luz emitida por el fluoróforo es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpo presente en la célula (o en la célula, en el caso de tinción intracelular), y por tanto, a la cantidad de la diana de interés.

En contraste, el marcaje indirecto se basa en el uso de un anticuerpo secundario marcado. Los anticuerpos secundarios suelen estar dirigidos contra anticuerpos generados en el organismo hospedador de los anticuerpos primarios. Este método presenta dos ventajas principales:

1. El anticuerpo primario permanece sin modificar, evitando posibles estorbos estéricos o pérdida de especificidad/función
2. Funciona como amplificador de señal, ya que varios anticuerpos secundarios marcados pueden unirse a un solo anticuerpo primario.

Sin embargo, debe tenerse en cuenta que el uso de anticuerpos secundarios marcados limita las posibilidades de multiparametrización (multiplexing). Como estos anticuerpos secundarios reconocen inmunoglobulinas del mismo hospedador, se unirán a todos los anticuerpos generados en ese hospedador. Por ejemplo, no se pueden utilizar dos anticuerpos primarios de ratón en el mismo experimento porque sus contribuciones no serían distinguibles.

En resumen, los anticuerpos primarios marcados serán preferidos para experimentos que requieran medir varios parámetros en paralelo (multiplexing). Los anticuerpos secundarios marcados resultan especialmente útiles para la detección de dianas de baja abundancia.

Principio de la citometría de flujo

La citometría de flujo es una tecnología ampliamente utilizada para la caracterización de células individuales y partículas. Esencialmente, un citómetro de flujo consta de varios componentes:

• Líquido de envoltura: su función es focalizar la suspensión celular a través de una pequeña boquilla y separarlas. Esta separación es crucial para que el haz láser pueda analizar cada célula individualmente. Una mala separación celular o un flujo demasiado rápido puede conllevar pérdida de información.
• Láser: el láser ilumina cada célula con luz coherente a una longitud de onda específica. La medición de la luz dispersada y la fluorescencia es el principio fundamental de la citometría de flujo.
• Detectores: los detectores recogen la luz dispersada y la fluorescencia. La señal óptica se dirige a los detectores mediante un sistema complejo de espejos y filtros.

En citometría de flujo, las células pueden distinguirse según varios parámetros basados en la medición de luz dispersada y fluorescencia:

• Su tamaño
• Su granularidad
• La expresión de una proteína diana

Los dos primeros parámetros se determinan midiendo la luz dispersada. Esta permite diferenciar distintos tipos celulares graficando parámetros de dispersión (espectrograma: luz dispersada en ángulo frontal frente a lateral). Generalmente, la intensidad de la dispersión frontal está correlacionada con el volumen celular, mientras que la lateral refleja la complejidad de la estructura interna de la célula.

Es interesante señalar que las células también se pueden separar según expresen o no una proteína diana. Esto se logra con anticuerpos marcados con fluorocromos, que combinan las propiedades ópticas del marcador fluorescente con la selectividad del anticuerpo. Así, el anticuerpo marcado se une a una única proteína o modificación y sirve de marcador para la detección de células que contienen la diana de interés. Cabe destacar que los anticuerpos no interfieren entre sí, por lo que es posible detectar múltiples dianas de forma paralela.

Nuestros otros paquetes garantizados por aplicación

Anticuerpos para aplicaciones de inmunohistoquímica
Anticuerpos para aplicaciones de Western Blot
Anticuerpos para aplicaciones de inmunoprecipitación
Anticuerpos para aplicaciones de inmunofluorescencia
Anticuerpos garantizados para modificaciones específicas
Anticuerpos garantizados para ELISA
Desarrollo de ensayos ELISA