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SERVICIOS DE MEDICIÓN DE AFINIDAD DE UNIÓN DE ANTICUERPOS

Plataforma única de determinación de KD de anticuerpos

  • Medición de KD de anticuerpos-células
  • Medición libre de etiquetas
  • Precio competitivo / plazo corto

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Gracias a su exclusiva plataforma de determinación de KD de anticuerpos, ProteoGenix es la REFERENCIA en medición de afinidad de anticuerpos. ¡Medir interacciones con células, bacterias, proteínas en conformación nativa o realizar determinaciones de KD de alto rendimiento ahora es posible gracias a nuestras 3 tecnologías! Envíenos sus requerimientos y nuestros gestores de cuentas con doctorado le propondrán la mejor solución para satisfacer sus expectativas de precisión/precio/plazo.

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Medición de afinidad de anticuerpos por SPR, SPRi u Octet.

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Incluso compatible con la determinación de KD de alto rendimiento.

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Somos uno de los pocos proveedores que ofrece determinación de KD de anticuerpos por SPRi.

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¡Un servicio de medición de afinidad adaptado a sus necesidades!

Habiendo desarrollado y caracterizado ya más de 3.000 anticuerpos monoclonales para diversos clientes, ProteoGenix ha adquirido gran experiencia en el análisis de interacciones biomoleculares. Ya sea que su proyecto requiera una determinación de KD de alto rendimiento o el análisis de muestras crudas (células, bacterias…), tenemos todo lo necesario para brindarle la solución más adecuada.

GE Biacore X100 para medición de afinidad de unión de anticuerpos SPR / GE Biacore X100 – T200 – 8K SPRi / Horiba XelPlex Octet / ForteBio Octet Red
Aplicación "Gold standard" Determinación de KD de alto rendimiento Interacción anticuerpo-antígeno Análisis de interacción biomolecular Determinación de KD de alto rendimiento Análisis de interacción anticuerpo-célula Análisis de interacción biomolecular Determinación de KD de alto rendimiento Análisis de interacción biomolecular
Tecnología Resonancia de plasmones superficiales (SPR) Imágenes de resonancia de plasmones superficiales (SPRi) Interferometría
Principio de medición Cambio de índice de refracción Cambio de índice de refracción Desplazamiento de longitud de onda
Medición libre de etiquetas Sí Sí Sí
Análisis de muestras crudas (células, bacterias…) No Sí Sí
Posibilidad de recubrir proteínas (distintas de anticuerpos) manteniendo conformación nativa No Sí No
Imagen No Sí No
Multiplexación ++ ++++ ++
Límite de detección +++ +++ +
Complejidad tecnológica + +++ ++
Coste/anticuerpo + +++ ++
Plazo de entrega 2-3 semanas 2-3 semanas 2-3 semanas

¿Dudas sobre la técnica de determinación de KD de anticuerpos más relevante para su estudio?

Envíe sus requerimientos a nuestro gestor de cuentas con doctorado.

Caso de estudio 1: determinación de KD de anticuerpos entre un anticuerpo anti-proteína X y la proteína X expresada en la superficie de células 293T por tecnología SPRi (Horiba XelPlex)

Objetivo del estudio

Un cliente nos solicitó medir la afinidad de unión del anticuerpo anti-proteína X frente a una proteína X transmembrana expresada en la superficie de células 293T. Expresar y presentar la proteína directamente en la célula permitió mantener el epítopo extracelular en su conformación nativa.

Las mediciones se realizaron utilizando tecnología de imágenes de resonancia de plasmones superficiales (Horiba XelPlex).

Funcionalización del biochip

El biochip se modificó mediante un acoplamiento clásico de aminas. Brevemente, se activó una superficie terminada en –COOH utilizando EDC/NHS, obteniendo un intermediario éster sulfo-NHS reactivo. Este compuesto reacciona con aminas primarias formando un enlace amida estable.
Se probaron 2 métodos de deposición de anti-X para determinar el mejor enfoque de spotting (detalles en el archivo PDF).

Estudio de la especificidad de interacción anticuerpo-célula

La unión específica de células con proteína X se estudió comparando las curvas cinéticas tras inyectar células con proteína X y células control (293T transfectadas con plásmido vacío) sobre un biochip modificado con anti-proteína X.
SPRi antibody cell interaction measurement example

La comparación entre las inyecciones de células con proteína X y las células control en el biochip modificado con anticuerpo anti-proteína X mostró diferencias claras en las curvas cinéticas independientemente de las condiciones de inmovilización.

Por lo tanto, los datos obtenidos demuestran una unión específica de las células con proteína X a su anticuerpo correspondiente.

Análisis cinético y termodinámico de la interacción anticuerpo-célula

Las curvas cinéticas se obtuvieron inyectando células con proteína X sobre la superficie modificada con el anticuerpo anti-proteína X a diferentes concentraciones. El método de deposición seleccionado fue el que ofreció mejores resultados en el estudio anterior.

Thermodynamic and kinetic antibody cell affinity analysis

Los parámetros cinéticos se determinaron ajustando las curvas a diferentes concentraciones usando un modelo de interacción 1:1. El valor de KD del anticuerpo se obtuvo calculando la relación kd/ka.
Parámetros cinéticos y termodinámicos Parámetros cinéticos y termodinámicos Parámetros cinéticos y termodinámicos
ka(M-1.s-1) kd (s-1) KD (M)
Anti-proteína X / células con proteína X 1,00·1010 2,46·10-4 2,46·10-14

Conclusión

La unión específica de células con proteína X al anticuerpo anti-proteína X se demostró mediante SPRi.
Las señales obtenidas por SPRi permitieron medir un KD aparente bajo, lo que indica una interacción de alta afinidad anticuerpo-célula. Esta afinidad está gobernada principalmente por una elevada tasa de asociación (ka). La configuración multiplexada de SPRi permitió inmovilizar el anticuerpo anti-proteína X en un mismo biochip con dos métodos de inmovilización y a cuatro concentraciones diferentes por método. En este experimento, se testaron 8 condiciones experimentales y se generaron 282 sensorgramas en un solo biochip.

Haga clic en el botón a continuación para obtener el informe completo “Estudio de unión entre un anticuerpo anti-proteína X y la proteína X expresada en la superficie de células 293T por tecnología Surface Plasmon Resonance imaging (SPRi)”

Consigue un informe en PDF

Caso de estudio 2: estudio de KD de anticuerpos mediante análisis Biacore

Objetivo del estudio

Un cliente nos solicitó medir el KD de la interacción anticuerpo/antígeno mediante Biacore. El proyecto consistía en el ranking de afinidad de 5 anticuerpos frente a un mismo antígeno.

Configuración experimental

El antígeno se inmovilizó en la superficie del biochip recubierto de dextrano por química clásica de maleimida, formando una unión estable covalente tioéter. Posteriormente, se pasaron las soluciones de anticuerpos a diferentes concentraciones sobre el antígeno. La medición de la señal SPR en diferentes concentraciones permitió obtener los parámetros cinéticos (tasa de asociación ka, tasa de disociación kd) y termodinámicos (KD).

Medición de la afinidad
Antigen Antibody interaction measurement

La afinidad de unión anticuerpo/antígeno puede deducirse de la relación kd/ka, lo que permite obtener el ranking de afinidad.
Anticuerpo ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
A 4,30×104 2,24×10-4 5,21×10-9
B 1,26×105 9,08×10-4 7,23×10-9
C 6,71×105 3,85×10-4 5,73×10-10
D 6,71×105 4,03×10-4 1,59×10-9
E 6,71×105 7,97×10-4 3,72×10-9

El ranking de afinidad puede deducirse directamente del valor de KD: cuanto menor el KD, mayor la afinidad del anticuerpo.Ranking KD de anticuerpos: C<D<E<A<B
Ranking de afinidad: C>D>E>A>B

Conclusión

El análisis por Biacore permitió concluir que los 5 anticuerpos demostraron alta afinidad frente al antígeno, siendo C el mejor por varias razones:

  • KD más bajo indicativo de una interacción fuerte

  • Parámetros cinéticos favorables (alta tasa de asociación y baja de disociación).

Haga clic en el botón a continuación para obtener el informe completo “Determinación de KD de la interacción anticuerpo/antígeno mediante Surface Plasmon Resonance (SPR) (Biacore X100)”

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