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SERVICES DE MESURE DE L’AFFINITÉ DE LIAISON DES ANTICORPS

Plateforme unique de détermination du KD d’anticorps

  • Mesure du KD anticorps-cellule
  • Mesure sans marquage
  • Tarif compétitif / délai rapide

Contactez-nous Parlez à nos experts

Grâce à sa plateforme unique de détermination du KD des anticorps, ProteoGenix est LA référence pour la mesure de l’affinité des anticorps. Mesurer les interactions avec des cellules, des bactéries, des protéines en conformation native ou réaliser une détermination haut débit du KD est désormais possible grâce à nos 3 technologies ! Envoyez-nous vos besoins et nos gestionnaires de comptes titulaires d’un doctorat vous proposeront la solution la plus adaptée pour répondre à vos attentes en termes de précision/prix/délai.

Pourquoi choisir ProteoGenix pour la
détermination du KD de vos anticorps ?

Tarif compétitif

Nous garantissons le prix le plus bas du marché !

3 technologies
complémentaires

Mesure de l’affinité des anticorps par SPR, SPRi ou Octet.

Service unique de mesure
anticorps-cellule

Compatible également avec la détermination haut débit du KD.

Équipements de pointe

Nous sommes l’un des rares prestataires à proposer la détermination du KD des anticorps par SPRi.

Mesure sans marquage (label-free)

Aucun délai supplémentaire, aucun coût additionnel, pas d’artéfact ou de biais (site de liaison masqué, interactions hydrophobes fausses).

Gestionnaires de compte PhD

Vous hésitez sur la technologie adaptée ? Nos experts scientifiques vous conseillent la méthode la plus pertinente.

Délai rapide

Obtenez les valeurs de KD de vos anticorps en 2 à 3 semaines.

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Un service de mesure d’affinité d’anticorps adapté à vos besoins !

Après avoir développé et caractérisé plus de 3 000 anticorps monoclonaux pour divers clients, ProteoGenix a acquis une grande expertise dans l’analyse des interactions biomoléculaires. Que votre projet nécessite une détermination haut débit du KD ou l’analyse d’échantillons bruts (cellules, bactéries…), nous avons tout en main pour vous proposer la solution la plus adaptée.

GE Biacore X100 pour la mesure de l’affinité de liaison des anticorps
SPR / GE Biacore X100 – T200 – 8K		 SPRi / Horiba XelPlex Octet / ForteBio Octet Red
Application « Gold standard »
Détermination haut débit du KD
Interaction anticorps-antigène
Analyse d’interaction biomoléculaire		 Détermination haut débit du KD
Analyse d’interaction anticorps-cellule
Analyse d’interaction biomoléculaire		 Détermination haut débit du KD
Analyse d’interaction biomoléculaire
Technologie Résonance plasmonique de surface (SPR) Imagerie par résonance plasmonique de surface (SPRi) Interférométrie
Principe de mesure Changement d’indice de réfraction Changement d’indice de réfraction Déplacement de longueur d’onde
Sans marquage Oui Oui Oui
Analyse d’échantillons bruts (cellules, bactéries…) Non Oui Oui
Possibilité d’immobiliser des protéines (autres que les anticorps) tout en conservant la conformation native Non Oui Non
Imagerie Non Oui Non
Multiplexage ++ ++++ ++
Limite de détection +++ +++ +
Complexité technologique + +++ ++
Coût/anticorps + +++ ++
Délai 2/3 semaines 2/3 semaines 2/3 semaines

Des doutes sur la technique de détermination du KD d’anticorps la plus adaptée à votre étude ?

Envoyez vos besoins à notre gestionnaire de compte PhD.

Étude de cas 1 : détermination du KD entre un anticorps anti-protéine X et la protéine X exprimée à la surface de cellules 293T par SPRi (Horiba XelPlex)

Objectif de l’étude

Un client nous a demandé de mesurer l’affinité de liaison d’un anticorps anti-protéine X contre une protéine transmembranaire X exprimée à la surface de cellules 293T. L’expression et la présentation directe de la protéine dans la cellule permettaient de présenter l’épitope extracellulaire tout en maintenant sa conformation native.

Les mesures ont été réalisées avec la technologie Surface Plasmon Resonance Imaging (Horiba XelPlex).

Fonctionnalisation de la biochip

La biochip a été modifiée via une stratégie classique de couplage sur amines. En bref, une surface terminée –COOH a été activée via EDC/NHS pour générer un ester sulfo-NHS réactif. Cet intermédiaire réagit avec les amines primaires pour former une liaison amide stable.
Deux méthodes de dépôt de l’anticorps anti-X ont été testées pour déterminer l’approche optimale de spotting (plus de détails dans le rapport PDF).

Spécificité de l’interaction anticorps-cellule

La spécificité de la liaison des cellules protéine X a été testée par comparaison des courbes cinétiques obtenues lors de l’injection de cellules exprimant la protéine X et de cellules témoins (cellules 293T transfectées avec un plasmide vide) sur une biochip modifiée par un anticorps anti-protéine X.
SPRi antibody cell interaction measurement example

La comparaison des injections de cellules exprimant la protéine X et des cellules témoins sur la biochip modifiée par l’anticorps anti-protéine X a démontré des différences nettes au niveau des courbes cinétiques quelle que soit la condition d’immobilisation.

Les résultats obtenus montrent une fixation spécifique des cellules protéine X à l’anticorps anti-protéine X.

Analyse cinétique et thermodynamique de l’interaction anticorps-cellule

Les courbes cinétiques ont été obtenues en injectant des cellules exprimant la protéine X sur la surface modifiée par l’anticorps anti-protéine X à différentes concentrations. La méthode de dépôt utilisée fut celle ayant donné les meilleurs résultats lors de l’étude précédente.

Thermodynamic and kinetic antibody cell affinity analysis

Les paramètres cinétiques ont été déterminés en ajustant les courbes pour différentes concentrations en utilisant un modèle d’interaction 1:1. La valeur de KD de l’anticorps a été obtenue par calcul du rapport kd/ka.
Paramètres cinétiques et thermodynamiques Paramètres cinétiques et thermodynamiques Paramètres cinétiques et thermodynamiques
ka (M-1.s-1) kd (s-1) KD (M)
Anticorps anti-X / cellules protéine X 1,00.1010 2,46.10-4 2,46.10-14

Conclusion

La fixation spécifique des cellules protéine X à l’anticorps anti-X a été démontrée par SPRi.
Les signaux SPRi ont permis de mesurer un KD apparent faible correspondant à une interaction d’affinité élevée entre l’anticorps et la cellule. Cette affinité de liaison est principalement gouvernée par un taux d’association élevé (ka). La configuration multiplexée du SPRi permettait d’immobiliser l’anticorps anti-protéine X sur une même biochip avec deux méthodes d’immobilisation différentes et à quatre concentrations pour chaque. Huit conditions expérimentales différentes ont été testées et 282 sensorgrammes générés lors d’une seule expérience.

Cliquez sur le bouton ci-dessous pour obtenir le rapport complet « Étude d’interaction entre un anticorps anti-X et la protéine X exprimée à la surface de cellules 293T par technologie SPRi »

OBTENEZ LE RAPPORT PDF

Étude de cas 2 : analyse de l’affinité d’anticorps via Biacore

Objectif de l’étude

Un client nous a demandé de mesurer le KD d’une interaction anticorps/antigène via Biacore. Le projet concernait le classement d’affinité de 5 anticorps différents contre un même antigène.

Protocole expérimental

L’antigène a été immobilisé sur la surface de la biochip recouverte de dextrane via une chimie maleimide classique formant une liaison thioéther covalente stable. Des solutions contenant les anticorps à différentes concentrations ont ensuite été injectées au-dessus de l’antigène. La mesure du signal SPR à différentes concentrations d’anticorps a permis de déterminer les paramètres cinétiques (taux d’association ka, taux de dissociation kd) et les paramètres thermodynamiques (KD).

Mesure de l’affinité d’anticorps
Antigen Antibody interaction measurement

L’affinité de liaison anticorps/antigène peut être déduite du ratio kd/ka, permettant ainsi d’établir un classement d’affinité.
Anticorps ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
A 4,30×104 2,24×10-4 5,21×10-9
B 1,26×105 9,08×10-4 7,23×10-9
C 6,71×105 3,85×10-4 5,73×10-10
D 6,71×105 4,03×10-4 1,59×10-9
E 6,71×105 7,97×10-4 3,72×10-9

Le classement d’affinité des anticorps est directement obtenu selon les valeurs de KD : plus le KD est faible, plus l’affinité de l’anticorps est élevée.Classement KD : C<D<E<A<B
Classement affinité : C>D>E>A>B

Conclusion

L’analyse Biacore montre que les 5 anticorps testés présentent une affinité élevée envers l’antigène, avec C en tête pour plusieurs raisons :

  • KD plus faible, signe d’une interaction forte

  • Paramètres cinétiques favorables (association rapide, dissociation faible).

Cliquez sur le bouton ci-dessous pour obtenir le rapport complet « Détermination du KD de l’interaction anticorps/antigène par SPR (Biacore X100) »

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