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Informe de caso:
Cliente
DMC Biotechnologies
Sector
Investigación
Área de investigación
Desarrollo de herramientas de detección
Diana
Etiqueta DAS+4 modificada
Procesos clave:
- Desarrollo de hibridomas contra péptidos
- Screenings ELISA para mejorar la recubrimiento y presentación
- Producción de anticuerpos y control de calidad
Cifras clave
20
Clones de alto rendimiento desarrollados
2mg
Anticuerpo monoclonal purificado producido
Contexto
Dynamic Metabolic Control (DMC) ha desarrollado una plataforma de ingeniería metabólica que permite la downregulación bajo demanda de enzimas específicas mediante degradación proteolítica dirigida. Esto se logra añadiendo una corta secuencia peptídica sintética, la etiqueta DAS+4, directamente a las enzimas seleccionadas, marcándolas para su degradación controlada en respuesta a condiciones definidas del proceso.
Para respaldar el desarrollo y la optimización de esta plataforma, se requería una herramienta de detección capaz de reconocer específicamente la etiqueta DAS+4. Uno de los principales retos consistía en lograr alta selectividad frente a esta secuencia sintética y evitar la reactividad cruzada con secuencias bacterianas nativas similares. La generación de un anticuerpo anti-DAS+4 con tal especificidad permitiría cuantificar la eficiencia de etiquetado y la cinética de degradación mediante técnicas inmunoanalíticas estándar, incluidas Western blot y ELISA, proporcionando así un marco analítico fiable para la caracterización de cepas y el desarrollo de bioprocesos.
Retos
1
Alta selectividad evitando reactividad cruzada con secuencias bacterianas nativas estrechamente relacionadas
2
Asegurar el rendimiento funcional en Western blot y ensayos ELISA
Enfoque de ProteoGenix
Paso I: Diseño y síntesis de péptidos
Basándose en la secuencia de la etiqueta DAS+4, se diseñaron y sintetizaron hasta 3 péptidos candidatos, que luego se conjugaron a proteínas transportadoras (KLH para inmunización, BSA para screening ELISA).
Paso II: Inmunización de ratones
Cinco ratones fueron inmunizados utilizando un protocolo rápido optimizado con el adyuvante patentado TiterFast™. La respuesta inmune se monitorizó mediante extracciones seriadas de sangre y titulación ELISA contra la mezcla de péptidos.
Paso III: Fusión y screening
Las células del bazo del ratón con mejor respuesta se fusionaron con una línea celular de mieloma. Los hibridomas resultantes se evaluaron por ELISA para identificar clones que reconocieran específicamente los péptidos DAS+4, enviando hasta 20 sobrenadantes candidatos para la validación por parte del cliente.
Paso IV: Subclonación del hibridoma
Los dos mejores clones parentales se subclonaron mediante dilución limitante y screening ELISA. Se realizó isotipado y se criopreservó el mejor hibridoma monoclonal.
Paso V: Producción del anticuerpo
Se produjeron 2 mg de anticuerpo monoclonal purificado a partir del clon seleccionado, purificado por cromatografía de afinidad Proteína A/G y controlado mediante SDS-PAGE y ELISA.
Entregables:
- Hasta 20 mejores clones (muestras de sobrenadante) en etapa policlonal para selección del cliente
- Muestras finales de sobrenadante de monoclonales para confirmar hibridoma
- 1 línea celular de hibridoma
- 2 mg de anticuerpo purificado
- 2 mg de mezcla antigénica de péptidos
- Informe del proyecto
- Propiedad y derechos de propiedad intelectual de los anticuerpos
Resultados
El anticuerpo seleccionado mostró una fuerte reactividad en ELISA frente al péptido diana (OD 2,95 a 1:2000), manteniéndose cercano al fondo en el péptido de control negativo (máximo en OD 0,04 en todas las diluciones). La señal específica fue detectable incluso a dilución 1:128 000. La señal dirigida es aproximadamente 14,3 veces superior a la del control incluso en la dilución más alta, lo que evidencia la alta selectividad para la etiqueta DAS+4 modificada.
Conclusión clave
ProteoGenix ayudó a DMC Biotechnologies a desarrollar un anticuerpo selectivo frente a la etiqueta DAS+4 modificada, con señal ELISA fuerte sobre el péptido diana, mínima reactividad sobre el control de secuencia nativa similar y actividad mantenida en un amplio rango de diluciones. A través del diseño personalizado de péptidos, contraselección y una selección dirigida de clones, la colaboración proporcionó a DMC una herramienta práctica para monitorizar la detección de la etiqueta y apoyar el desarrollo de cepas.
ProteoGenix ha sido un socio excepcional, con un equipo de atención al cliente receptivo, experto y realmente involucrado en nuestros proyectos.
El anticuerpo entregado ofrece sensibilidad y especificidad excelentes, proporcionando señales robustas y reproducibles con fondo mínimo tanto en ELISA como en Western blot.
Junto con precios muy competitivos y el cumplimiento estricto de los plazos, ProteoGenix ofrece un valor excepcional, y lo recomendamos ampliamente a cualquier laboratorio que busque anticuerpos fiables, personalizados y de alta calidad.
Colaboración
El éxito de esta colaboración resultó de un esfuerzo conjunto respaldado por una comunicación fluida, experiencia científica y gestión dedicada de principio a fin. Para DMC Biotechnologies, esto significó no solo acceso a un anticuerpo libre de derechos de propiedad (IP-free) y totalmente propiedad del cliente, sino también la tranquilidad que otorga un servicio garantizado sin éxito, sin pago, reduciendo el riesgo del proyecto. Con un experto PhD dedicado liderando el proyecto y soporte de principio a fin durante todo el desarrollo y validación, la colaboración proporcionó un marco sólido para avanzar en un anticuerpo selectivo adaptado a las necesidades de DMC.
DMC Biotechnologies
DMC Biotechnologies es un fabricante biotecnológico estadounidense especializado en fermentación de precisión y producción sostenible de productos químicos. Su plataforma patentada Dynamic Metabolic Control™ está diseñada para ofrecer procesos de fermentación más estandarizados, robustos y predecibles, con énfasis en el desarrollo y la producción escalables. Este trabajo apoyó directamente la plataforma de DMC permitiendo la detección selectiva de la etiqueta DAS+4 modificada utilizada para controlar la degradación enzimática.
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