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Rapport de cas :
Client
DMC Biotechnologies
Secteur
Recherche
Domaine de recherche
Développement d’outils de détection
Cible
Marqueur DAS+4 modifié
Processus clés :
- Développement d’hybridomes contre des peptides
- Dépistages ELISA pour améliorer le coating et la présentation
- Production d’anticorps et contrôle qualité
Chiffres clés
20
Clones performants développés
2mg
Anticorps monoclonal purifié produit
Contexte
Dynamic Metabolic Control (DMC) a développé une plateforme d’ingénierie métabolique permettant la régulation à la demande d’enzymes cibles, par dégradation protéolytique dirigée. Cela est rendu possible en ajoutant une courte séquence peptidique synthétique, le marqueur DAS+4, directement aux enzymes sélectionnées afin de les marquer pour une dégradation contrôlée selon les paramètres définis du procédé.
Pour accompagner le développement et l’optimisation de cette plateforme, un outil de détection capable de reconnaître spécifiquement le marqueur DAS+4 était nécessaire. Le défi principal résidait dans l’obtention d’une grande sélectivité envers cette séquence synthétique tout en évitant une reconnaissance croisée avec des séquences bactériennes natives proches. La génération d’un anticorps anti-DAS+4 présentant une telle spécificité permettrait de quantifier l’efficacité du marquage et la cinétique de dégradation par des techniques immunoanalytiques standards, notamment Western blot et ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), fournissant ainsi un cadre analytique fiable pour la caractérisation des souches et le développement de bioprocédés.
Défis
1
Haute sélectivité évitant la reconnaissance croisée avec des séquences bactériennes natives similaires
2
Assurer une fonctionnalité efficace en Western blot et ELISA
Approche ProteoGenix
Étape I : Conception et synthèse du peptide
Sur la base de la séquence DAS+4, jusqu’à 3 peptides candidats ont été conçus et synthétisés, puis conjugués à des protéines porteuses (KLH pour l’immunisation, BSA pour le dépistage ELISA).
Étape II : Immunisation des souris
Cinq souris ont été immunisées via un protocole accéléré optimisé avec l’adjuvant propriétaire TiterFast™. La réponse immunitaire a été monitorée par saignées en série et titrage ELISA contre le mélange de peptides.
Étape III : Fusion et dépistages
Les cellules de rate du meilleur répondant ont été fusionnées avec une lignée de myélome. Les hybridomes résultants ont été évalués par ELISA pour identifier les clones qui reconnaissaient spécifiquement les peptides DAS+4 ; jusqu’à 20 surnageants candidats ont été envoyés au client pour validation.
Étape IV : Sous-clonage des hybridomes
Les deux meilleurs clones parentaux ont été sous-clonés par dilution limitée et dépistages successifs ELISA. L’isotypage a été effectué et le meilleur hybridome monoclonal a été cryopréservé.
Étape V : Production de l’anticorps
2 mg d’anticorps monoclonal purifié ont été produits à partir du clone sélectionné, purifiés par chromatographie d’affinité Protéine A/G, et contrôlés qualité par SDS-PAGE et ELISA.
Livrables :
- Jusqu’à 20 meilleurs clones (échantillons de surnageant) au stade polyclonal pour sélection client
- Échantillons de surnageant monoclones finaux pour confirmation hybridome
- 1 lignée cellulaire d’hybridome
- 2 mg d’anticorps purifié
- 2 mg d’antigène mélange de peptides
- Rapport de projet
- Propriété et droits de propriété intellectuelle des anticorps
Résultats
L’anticorps sélectionné a démontré une forte réactivité ELISA envers le peptide cible (DO 2,95 à 1:2000), avec un niveau proche du bruit de fond pour le peptide contrôle (maximum à DO 0,04 à toutes les dilutions). Le signal spécifique était encore détectable à une dilution de 1:128000. Le signal cible était 14,3 fois supérieur au contrôle même à la dilution la plus élevée, confirmant la grande sélectivité pour le marqueur DAS+4 modifié.
À retenir
ProteoGenix a permis à DMC Biotechnologies de développer un anticorps sélectif contre le marqueur DAS+4 modifié, affichant un fort signal ELISA sur le peptide cible, une réactivité minimale envers le contrôle natif, et une activité maintenue sur une large plage de dilutions. Grâce à une conception de peptide sur mesure, des contre-dépistages et une sélection guidée des clones, cette collaboration a fourni à DMC un outil pratique pour le suivi du marquage et le développement des souches.
ProteoGenix a été un partenaire remarquable, avec une équipe service client réactive, compétente et sincèrement investie dans nos projets.
L’anticorps livré montre constamment une excellente sensibilité et spécificité, générant des signaux robustes et reproductibles avec un bruit de fond minimal en applications ELISA et Western blot.
Combiné à des tarifs très compétitifs et un strict respect des échéances, ProteoGenix offre une valeur exceptionnelle et nous les recommandons vivement à tout laboratoire cherchant des anticorps fiables, sur mesure et de haute qualité.
Collaboration
Le succès de cette collaboration résulte d’un travail conjoint, soutenu par une communication étroite, l’expertise scientifique, et un management attentif du début à la fin. Pour DMC Biotechnologies, cela a permis non seulement d’accéder à un anticorps libre de droits, entièrement propriété du client, mais aussi de bénéficier d’un service garanti “pas de résultat, pas de paiement”, qui a permis de limiter les risques projet. Avec l’accompagnement d’un expert PhD dédié et un suivi de bout en bout lors du développement et de la validation, cette collaboration a permis d’obtenir un cadre solide pour l’obtention d’un anticorps sélectif adapté aux besoins de DMC.
DMC Biotechnologies
DMC Biotechnologies est un fabricant américain spécialisé en fermentation de précision et production durable de produits chimiques. Sa plateforme propriétaire Dynamic Metabolic Control™ a été conçue pour offrir des procédés de fermentation plus standardisés, robustes et prévisibles, en mettant l’accent sur la montée en échelle et la production industrielle. Ce projet a directement soutenu la plateforme de DMC en permettant la détection sélective du marqueur DAS+4 modifié, utilisé pour le contrôle de la dégradation enzymatique.
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