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Case report:
Cliente
DMC Biotechnologies
Settore
Ricerca
Dominio di Ricerca
Sviluppo di strumenti di rilevamento
Target
Tag DAS+4 ingegnerizzato
Processi chiave:
- Sviluppo di ibridoma contro peptidi
- Screening ELISA per migliorare il rivestimento e la presentazione
- Produzione di anticorpi e controllo qualità
Numeri chiave
20
Cloni ad alte prestazioni sviluppati
2mg
Anticorpo monoclonale purificato prodotto
Contesto
Dynamic Metabolic Control (DMC) ha sviluppato una piattaforma di ingegneria metabolica che consente la downregulation su richiesta di specifici enzimi del pathway tramite degradazione proteolitica mirata. Questo è ottenuto aggiungendo una breve sequenza peptidica sintetica, il tag DAS+4, direttamente agli enzimi selezionati, marcandoli per la degradazione controllata in risposta a condizioni di processo definite.
Per supportare lo sviluppo e l’ottimizzazione di questa piattaforma, era necessario uno strumento di rilevazione in grado di riconoscere in modo specifico il tag DAS+4. Una criticità rilevante era raggiungere un’elevata selettività verso questa sequenza sintetica evitando la cross-reattività con sequenze batteriche native simili. La generazione di un anticorpo anti-DAS+4 con tale specificità avrebbe consentito la quantificazione dell’efficienza di tagging e delle cinetiche di degradazione utilizzando tecniche immunoanalitiche standard, come Western blot ed ELISA, fornendo così un solido framework analitico per la caratterizzazione delle linee e lo sviluppo dei bioprocessi.
Sfide
1
Elevata selettività evitando cross-reattività con sequenze batteriche native simili
2
Garantire prestazioni funzionali nei saggi Western blot ed ELISA
Approccio ProteoGenix
Step I: Progettazione e sintesi dei peptidi
Basandosi sulla sequenza del tag DAS+4, sono stati progettati e sintetizzati fino a 3 peptidi candidati, poi coniugati a proteine carrier (KLH per immunizzazione, BSA per screening ELISA).
Step II: Immunizzazione dei topi
Cinque topi sono stati immunizzati con un protocollo fast-track ottimizzato e l’adiuvante brevettato TiterFast™. La risposta immunitaria è stata monitorata tramite prelievi seriali e titolazione ELISA sul mix di peptidi.
Step III: Fusione e screening
Le cellule spleniche del topo con la risposta migliore sono state fuse con una linea cellulare di mieloma. Gli ibridomi risultanti sono stati selezionati tramite ELISA per identificare i cloni in grado di riconoscere specificamente i peptidi DAS+4, con fino a 20 surnatanti candidati inviati al cliente per la validazione.
Step IV: Sub-clonaggio degli ibridomi
I due migliori cloni parentali sono stati sub-clonati tramite round iterativi di diluizione limite e screening ELISA. È stato effettuato l’isotipaggio e il miglior ibridoma monoclonale è stato crioconservato.
Step V: Produzione degli anticorpi
Sono stati prodotti 2 mg di anticorpo monoclonale purificato a partire dal clone selezionato, purificato tramite cromatografia di affinità Protein A/G e controllato tramite SDS-PAGE ed ELISA.
Deliverables:
- Fino a 20 cloni migliori (campioni di surnatante) in fase policlonale per la selezione del cliente
- Campioni di surnatante dei monoclonali finali per confermare l’ibridoma
- 1 linea cellulare di ibridoma
- 2 mg di anticorpo purificato
- 2 mg di mix antigenico peptidico
- Report del progetto
- Proprietà e proprietà intellettuale degli anticorpi
Risultati
L’anticorpo selezionato ha mostrato un’elevata reattività ELISA contro il peptide target (OD 2,95 a 1:2000), mantenendo valori prossimi allo sfondo sul peptide di controllo negativo (massimo a OD 0,04 su tutte le diluizioni). Il segnale specifico era ancora presente a una diluizione di 1:128000. Il segnale sul target è circa 14,3 volte superiore rispetto al controllo anche alla diluizione più alta testata, confermando un’elevata selettività per il tag DAS+4 ingegnerizzato.
Key Takeway
ProteoGenix ha aiutato DMC Biotechnologies a sviluppare un anticorpo selettivo contro il tag DAS+4 ingegnerizzato, con un forte segnale ELISA sul peptide target, minima reattività rispetto al controllo di sequenza simile e attività mantenuta su un ampio intervallo di diluizione. Grazie a progettazione peptidica su misura, contro-screening e selezione guidata dei cloni, la collaborazione ha fornito a DMC uno strumento pratico per monitorare la rilevazione del tag e supportare gli sforzi di sviluppo delle linee.
ProteoGenix è stato un partner eccellente, con un team di customer service reattivo, competente e realmente coinvolto nei nostri progetti.
L’anticorpo fornito mostra costantemente un’eccellente sensibilità e specificità, producendo segnali robusti e riproducibili con sfondo minimo sia in ELISA che in Western blot.
Insieme a prezzi molto competitivi e il rispetto delle scadenze, ProteoGenix offre un valore eccezionale e lo raccomandiamo vivamente a qualsiasi laboratorio in cerca di anticorpi affidabili, su misura e di alta qualità.
Collaborazione
Il successo di questa collaborazione è nato da uno sforzo congiunto sostenuto da comunicazione stretta, competenze scientifiche e gestione dedicata dall’inizio alla fine. Per DMC Biotechnologies, questo ha significato non solo l’accesso a un anticorpo privo di vincoli IP e di piena proprietà, ma anche la tranquillità di un servizio totalmente garantito no win, no fee che ha aiutato a ridurre il rischio di progetto. Con un esperto PhD dedicato alla guida del progetto e assistenza completa durante sviluppo e validazione, la collaborazione ha fornito una struttura solida per avanzare nello sviluppo di un anticorpo selettivo su misura per le esigenze DMC.
DMC Biotechnologies
DMC Biotechnologies è un produttore biotecnologico statunitense specializzato in fermentazione di precisione e produzione chimica sostenibile. La sua piattaforma proprietaria Dynamic Metabolic Control™ è progettata per fornire processi fermentativi più standardizzati, robusti e prevedibili, con un focus su sviluppo e produzione scalabili. Questo lavoro ha supportato direttamente la piattaforma DMC permettendo la rilevazione selettiva del tag DAS+4 ingegnerizzato utilizzato per controllare la degradazione enzimatica.
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