GENERAZIONE DI ANTICORPI POLICLONALI

Aumenta la sensibilità dei tuoi immunodosaggi con le nostre soluzioni integrate per la produzione di anticorpi policlonali. Dalla progettazione dell’antigene alla purificazione del siero, i nostri servizi garantiscono la massima qualità e resa produttiva. Genera anticorpi policlonali ad alta affinità da qualsiasi tipo di antigene e in qualsiasi specie, inclusi coniglio, pollo, topo, ratto, porcellino d’India, capra, pecora, lama o alpaca!

La scelta dell’ospite è una fase fondamentale di ogni procedura di produzione di anticorpi policlonali. Sebbene il coniglio sia la scelta convenzionale, cresce l’interesse verso le produzioni in pollo e camelidi.

La produzione di anticorpi policlonali in pollo è particolarmente vantaggiosa per gli scale-up di processo, poiché gli anticorpi IgY vengono estratti dal tuorlo d’uovo invece che dal siero. Pur essendo il tuorlo d’uovo più complesso da purificare rispetto al siero, può essere prodotto in quantità superiori rispetto alla produzione policlonale su mammiferi.

Al contrario, i camelidi sono sempre più apprezzati come ospiti. Oltre agli anticorpi IgG convenzionali, producono immunoglobuline prive della catena leggera (HAbs – heavy chain antibodies). Queste molecole hanno caratteristiche uniche, tra cui:

• Maggiore stabilità a pH o temperature estremi
• Bassa ingombro sterico che facilita il riconoscimento di antigeni “nascosti” non accessibili agli anticorpi convenzionali.
• Migliore capacità di penetrazione tissutale, risorsa preziosa per immunoistochimica o applicazioni terapeutiche.

Produzione di anticorpi policlonali da ProteoGenix: FAQ

Che tipo di antigeni potete utilizzare per la produzione di anticorpi policlonali?

Abbiamo la capacità di produrre tutti i tipi di antigeni nei nostri laboratori, inclusi peptidi, proteine, DNA, piccole molecole e cellule che sovraesprimono l’antigene target. Possiamo lavorare anche su antigeni forniti dal cliente.

Come ottimizzare il processo di produzione di anticorpi policlonali?

Progettazione e produzione degli antigeni

Il raggiungimento di titoli anticorpali elevati dipende dalla capacità dell’antigene di suscitare una risposta immunitaria forte. Per questo, la scelta di un antigene appropriato è tra le tappe più importanti della produzione degli anticorpi policlonali.

Si possono utilizzare diversi antigeni per la generazione policlonale tra cui:

• Proteine – sono gli antigeni più usati per la generazione di anticorpi. Permettono agli anticorpi policlonali di riconoscere diversi epitopi naturalmente esposti nella conformazione nativa della proteina.
• Peptidi – immunizzare con peptidi è utile per lo sviluppo di anticorpi verso epitopi lineari (importanti nelle Western Blot) o specifici (aumenta la specificità). Poiché la maggior parte dei peptidi non è immunogenica, si usano tipicamente adiuvanti per rafforzare la risposta.
• DNA – l’immunizzazione genetica viene riservata a casi particolari, per esempio quando la proteina target è difficile da produrre o contiene domini transmembrana complessi.

Altri antigeni, come piccole molecole o cellule intere (native o ricombinanti), possono essere usati previo sviluppo di soluzioni personalizzate.

Immunizzazione animale

Il nostro protocollo standard di immunizzazione prevede:

• 51 giorni per anti-proteina
• 70 giorni per anti-peptide

Entrambi i protocolli possono essere prolungati se non si raggiungono rapidamente i titoli garantiti. Di solito conviene immunizzare gli animali con meno antigene per più tempo, che non molto antigene in breve tempo.

Purificazione degli anticorpi policlonali

Gli anticorpi sono tipicamente recuperati da prelievi di sangue una volta raggiunto il titolo desiderato. Tramite centrifugazione si separa la frazione cellulare dal siero arricchito in anticorpi, ottenendo così una soluzione policlonale grezza.

Le preparazioni grezze sono utili per molte applicazioni. Tuttavia, per migliorare sensibilità e ridurre il “background”, si raccomanda la purificazione. La purificazione degli anticorpi policlonali può essere effettuata tramite:

• Purificazione con Proteina A o G – la proteina A (Staphylococcus aureus) e la G (Streptococcus spp.) legano con alta affinità il frammento Fc degli anticorpi. Consentono la separazione degli immunoglobuline dagli altri componenti sierici. Tuttavia, non eliminano gli anticorpi poco specifici/affini.
• Purificazione antigene-specifica – grazie alla cromatografia di affinità, si recuperano anticorpi policlonali ad alta affinità per uno specifico antigene, riducendo il background nei saggi.

Serve consulenza per la tua produzione policlonale? Contatta il tuo account manager dedicato!

Come misurate i titoli anticorpali?

Per monitorare la risposta immunitaria, preleviamo periodicamente campioni dai soggetti iperimmunizzati per misurare i titoli. Solitamente tramite ELISA, ma su richiesta anche tramite Western Blot.

Anticorpi policlonali

Cosa sono gli anticorpi policlonali?

Gli anticorpi policlonali sono una miscela di anticorpi monoclonali originati da diversi cloni di cellule B. Presentano quindi diverse specificità e affinità. Grazie a questa proprietà sono altamente sensibili verso marker a bassa abbondanza e molto efficaci contro target complessi.

Come si classificano gli anticorpi policlonali?

Vista la loro natura eterogenea, sono classificati secondo la specie ospite e l’antigene impiegato. Sono generalmente prodotti in conigli, capre e pecore. I policlonali di coniglio sono particolarmente utili perché il sistema immunitario di questo animale genera anticorpi ad alta affinità in maggiore quantità rispetto ad altre specie. Gli anticorpi policlonali vengono anche denominati secondo questa classificazione, ad esempio “anti-topo coniglio” sono policlonali prodotti nel coniglio e specifici per IgG di topo.

Quali sono i principali vantaggi e utilizzi degli anticorpi policlonali?

Gli anticorpi policlonali sono una miscela di anticorpi con diverse specificità e affinità, prodotti immunizzando animali con un determinato target (proteica, peptidica, DNA, ecc.) e recuperando il siero dopo lo sviluppo della risposta immunitaria.

Al contrario dei monoclonali, noti per la loro alta specificità, i policlonali si distinguono per la sensibilità aumentata, rendendoli strumenti chiave in ricerca (di base, medica ecc.), terapia e diagnostica. Sono particolarmente vantaggiosi per rilevare marker a bassa concentrazione, tossine o altre sostanze rare – utili nello sviluppo di test diagnostici precoci, monitoraggio alimentare o per la purificazione di target rari.

In terapia, i policlonali vengono utilizzati, ad esempio, nel trattamento di condizioni acute complesse come gli avvelenamenti da veleno di serpente. I veleni sono miscele proteiche complesse e le terapie devono riuscire a neutralizzare più antigeni/epitopi per essere efficaci.

Dal punto di vista tecnico, i policlonali sono meno costosi da produrre rispetto ai monoclonali e i tempi sono molto più brevi. Di contro, hanno limiti come la maggiore variabilità batch-to-batch e difficoltà a scalare la produzione. L’impatto della variabilità si riduce inserendo controlli (positivi e negativi) e standard in ogni saggio.

Superare l’ostacolo dello scale-up è più complesso, ma i recenti progressi offrono soluzioni interessanti: ad esempio la purificazione degli anticorpi IgY dal tuorlo d’uovo tramite liquidi ionici e metodi non invasivi. Questi anticorpi potrebbero presto rappresentare la soluzione ideale grazie ai costi ridotti e alle elevate quantità ottenibili.

Quali sono i vantaggi della combinazione tra anticorpi monoclonali e policlonali?

Gli anticorpi policlonali possono essere impiegati da soli o in associazione ai monoclonali in diversi saggi. Il caso più frequente è l’ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Nei test ELISA, di solito gli anticorpi monoclonali (primari) vengono utilizzati per legare uno specifico bersaglio, mentre i policlonali (secondari) vengono usati per legare i primari.

In questa configurazione, i primari sono “nudi” (senza tag), mentre i secondari sono tracciati con enzimi. Questa combinazione amplifica il segnale rilevato, abbassando la soglia di sensibilità. L’amplificazione avviene perché i secondari possono riconoscere più epitopi sui primari, “coating” la loro superficie e aumentando il segnale.

Questa sensibilità aumentata ha però degli svantaggi: i policlonali tendono più facilmente a legare target non specifici, causando risultati falsi positivi. Per evitare tale problema, devono essere sottoposti a purificazioni specifiche (ad es. cromatografia antigene-specifica). Inoltre, l’inserimento di opportuni controlli aiuta a determinare correttamente le soglie di rilevazione.

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