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Rapport de cas
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Entreprise biotech suédoise
Thérapeutique
Oncologie
Cancer de la prostate
Une entreprise biotech suédoise a confié à ProteoGenix la conception et la production de divers formats d’anticorps bispécifiques. Le client a fourni les séquences de deux anticorps monoclonaux, nommés Ab1 et Ab2, qui ont servi de base à l’ingénierie des anticorps bispécifiques.
Pour optimiser le potentiel thérapeutique de ces anticorps parentaux, sept formats bispécifiques distincts ont été sélectionnés pour la conception et le développement par nos experts :
Cette approche multi-format conçue par nos experts a permis une évaluation complète de différentes architectures moléculaires afin d’identifier le ou les candidats les plus adaptés pour un développement ultérieur.
1
Exprimer les sept anticorps bispécifiques avec une bonne assemblage
2
Conserver l’affinité des anticorps bispécifiques générés dans la même gamme que les anticorps parentaux
2. Subclonage dans le vecteur d’expression
3. Tests d’expression et de purification des anticorps bispécifiques recombinants
4. Réaction post-production pour un format IgG-like en utilisant Duobodies
5. Caractérisation des différents formats bispécifiques
Les analyses SDS-PAGE des profils de purification et des contrôles qualité (QC) finaux ont montré que les formats Ab1-Ab2-DEKK et Ab1-Ab2-DuetMab-DEKK s’expriment mais ne s’assemblent pas en structures d’anticorps bispécifiques complètes, probablement en raison d’un manque d’hétérodimérisation des chaînes lourdes. La mutation DEKK ne semble donc pas être un format bispécifique optimal pour ce couple Ab1/Ab2 spécifique. Tous les autres formats bispécifiques et les Duobodies simples ont pu être exprimés avec de bons rendements et une bonne pureté, et correctement assemblés en structures complètes d’anticorps.
Chaque anticorps bispécifique testé a pu se lier aux antigènes, bien que les deux formats DEKK (Ab1-Ab2-DEKK et Ab1-Ab2-DuetMab-DEKK) aient montré une liaison très faible, ce qui est cohérent avec leur mauvais assemblage. Par rapport aux anticorps parentaux Ab1 et Ab2, les meilleurs anticorps bispécifiques en termes de liaison sont Ab1-Ab2-Duobody, Ab1-Ab2-KIH et Ab1-Ab2-CrossMAb-KIH, suggérant que ces constructions bispécifiques ont conservé leur capacité de liaison.
Les résultats de la détermination du KD sont cohérents avec les titrations ELISA réalisées ci-dessus. La liaison des trois anticorps bispécifiques testés est confirmée contre chaque antigène avec une haute affinité dans la gamme nanomolaire. Une différence d’affinité peut être notée pour tous les anticorps bispécifiques par rapport aux anticorps parentaux, ce qui s’explique par une avidité réduite car l’anticorps parental possède deux sites de liaison à l’antigène contrairement aux bispécifiques qui sont monovalents pour chaque antigène.
Les sept formats d’anticorps bispécifiques choisis ont été conçus et exprimés avec succès contre deux cibles du cancer de la prostate, avec cinq formats obtenant un assemblage correct et une double liaison antigénique.
Trois meilleurs candidats — Duobody, KIH, et CrossMAb-KIH — ont été validés par Biacore pour conserver une affinité nanomolaire pour les deux antigènes, avec le meilleur candidat à 3,20×10⁻¹⁰ M.
Cela démontre que le criblage multi-format est une stratégie efficace pour identifier des leads d’anticorps bispécifiques à haute affinité tout en évitant les écueils d’assemblage comme observé pour les formats DEKK.
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