Développement de lignée cellulaire sur-mesure

Notre plateforme de génération de lignée cellulaire stable pour la production d’anticorps monoclonal est conçue pour optimiser les rendements tout en réduisant les coûts. Chaque projet commence par une évaluation de « developability », l’anticorps lead est expressé de façon transitoire dans notre système propriétaire – XtenCHO™. Cette lignée très productive permet d’obtenir des anticorps dont le profil de glycosylation et les structures secondaires sont comparables à ceux des lignées stables type CHO-S™. Elle permet également de produire des quantités suffisantes d’anticorps pour caractériser en profondeur les propriétés clés.

En fonction de cette évaluation, nous établissons un protocole personnalisé pour la génération de la lignée stable et estimons les rendements à atteindre. Les vecteurs d’expression sont alors conçus, synthétisés et transfectés dans les cellules compétentes.

La sélection et l’amplification des clones positifs sont ensuite réalisées. Les clones sont isolés et évalués en termes de stabilité et de productivité. Si des clones très productifs sont identifiés, le procédé est optimisé puis transféré à votre laboratoire ou à un CMO partenaire.

Le service de génération de lignée cellulaire stable de ProteoGenix offre un large choix de lignées * incluant CHO-DG44, CHO-S, et nos propres lignées CHO-K1 et HEK toutes adaptées à la culture en suspension. Nous pouvons également créer une lignée stable à partir d’une lignée client.

Notre expérience de plus de 28 ans en production de protéines nous permet également de produire vos anticorps dans divers systèmes non-mammaliens : bactérien (Escherichia coli, Bacillus subtilis), levure (Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris), insectes/baculovirus. Ces systèmes sont particulièrement adaptés pour les fragments d’anticorps ou les utilisations non thérapeutiques.

Plus de 100 projets ont été menés à bien via notre plateforme de génération de lignée cellulaire stable pour production d’anticorps, avec un record de productivité à 8 g/L. Ces projets couvrent la production d’IgG complètes, d’anticorps bispécifiques, protéines de fusion Fc, et fragments d’anticorps comme Fab, scFv ou VHH.

Notre processus type de génération de lignée stable pour anticorps monoclonal dure entre 4 et 6 mois. L’étape la plus longue et la plus délicate concerne la sélection des clones monoclonaux stables et les études de stabilité (optionnelles).

Nous offrons deux garanties pour sécuriser votre investissement :

1. Garantie de rendement : estimée dès le début du projet, selon la séquence à produire. Cette garantie vous assure d’atteindre la cible fixée, et dans la majorité des cas nous la dépassons.
2. Notre service est divisé en plusieurs « work packages » avec, à chaque étape, une décision go/no go. Vous décidez de poursuivre ou d’arrêter le service et ne payez que le travail réalisé !

La génération de lignée cellulaire stable est incontournable pour le succès clinique des anticorps monoclonaux. Nous recommandons un test approfondi des leads au plus tôt avant de passer à la grande échelle.

L’évaluation anticipée de la développabilité est une approche éprouvée afin de garantir : stabilité, réactivité, efficacité et donc succès de votre future production. Ceci permet d’éviter les obstacles liés à l’expression stable et d’optimiser la production à moindre coût.

Les propriétés telles que l’agrégation, l’affinité, la spécificité, le profil de glycosylation, sont connues pour impacter la développabilité. Ces paramètres sont analysés in silico puis mesurés sur anticorps recombinants produits dans nos installations.

Les IgG complètes sont très souvent produites dans des systèmes mammaliens type cellules CHO (Chinese Hamster Ovary) ou NS0 (myélome souris). Chez ProteoGenix, nous maîtrisons la lignée CHO, offrant CHO-K1 propriétaire, CHO-DG44 (doublement DHFR-, pour la sélection métabolique), CHO-S, etc.
Après 28 ans de production en divers systèmes (mammifère, bactérie, levure, insecte), la production stable sur CHO reste le choix n°1 pour les anticorps : tolérance accrue aux variations de pH, température, pression, oxygène, et surtout amplification génique facilitée, donc rendements supérieurs aux autres systèmes.
Enfin, le profil de glycosylation est très proche de l’homme : faible immunogénicité, meilleure efficacité thérapeutique.

Les fragments dépourvus de glycanes peuvent au contraire être produits rapidement et à fort titre sur des systèmes bactériens (E. coli, B. subtilis) réputés pour leur productivité et simplicité de manipulation. Néanmoins, la production se fait dans le cytoplasme ou le périplasme, impliquant des méthodes d’extraction plus drastiques.

Notre service inclut aussi une phase de tests précoces très complète. La caractérisation approfondie des leads permet d’anticiper tout obstacle de production et de garantir le rendement. Ainsi, nous assumons le risque technique à votre place et protégeons votre investissement.

Et vous restez propriétaire de la lignée et des protocoles développés chez ProteoGenix, simplifiant le transfert à un CMO ou à vos installations pour la production industrielle. Notre génération de lignée stable FTO (« freedom-to-operate ») assure la transition du laboratoire aux bioréacteurs et simplifie l’obtention de licences.

Experts dans la production et l’ingénierie d’anticorps, nous proposons également de nombreux services upstream : maturation d’affinité, humanisation, développement d’anticorps bispécifiques, conjugués, reformatting… et downstream : banque cellulaire, études de stabilité… Travailler avec nous, c’est gagner en temps comme en coûts, tout en maximisant l’efficacité thérapeutique et en minimisant les risques de production.

Garantir la monoclonalité est indispensable pour des rendements et une qualité constante.
Chez ProteoGenix, nous proposons deux méthodes d’isolement des cellules monoclonales :

1. Dilution limite : Méthode classique consistant à diluer la suspension afin d’avoir statistiquement une seule cellule/puits. C’est économique, mais présente des inconvénients :
   • Peu de contrôle : certains puits sont vides, d’autres comportent plusieurs cellules. Ce n’est qu’une probabilité.
   • Beaucoup d’intervention humaine : augmente la variabilité et le risque d’erreur.
   • Documentation difficile : Observer une cellule unique au microscope est ardu : croissance rapide = difficile de prouver l’origine du clone. Un vrai handicap en soumission IND.
2. Méthode automatisée : VIPS™
   Les agences réglementaires préfèrent aujourd’hui les méthodes automatisées, telle que la technologie VIPS™ (Verified In-Situ Plate Seeding) :
   • Automatisation totale, moins d’erreur humaine
   • Preuve directe de monoclonalité : preuve visuelle dès l’ensemencement, et non différée.
   • Suivi en temps réel : la croissance cellulaire est suivie.
   • Gain de temps considérable : VIPS™ est deux fois plus rapide que la dilution limite.

Qu’il soit destiné à des applications thérapeutiques, diagnostiques ou vétérinaires, le développement d’une lignée cellulaire stable est une étape clé. Elle impacte directement le coût de production, en particulier le rendement d’anticorps et la facilité de purification.
Pour déterminer si externaliser ce service est pertinent, voici quelques critères :

• Expertise : Évaluer la séquence de départ, identifier les risques (liability, solubilité, agrégation), puis optimiser la séquence si besoin tout en préservant les propriétés clés.
  Les meilleurs pools/clones sont sélectionnés sur analyse multifactorielle intégrant rendement et qualité.
• Équipements : Génération de lignée stable = équipements variés (ensemenceur monocellulaire, imagerie, spectromètre de masse, HPLC, Biacore…). Décider sans caractérisation complète expose à un risque de coûts imprévus.
• Limiter le risque financier : Développer en interne mobilise des ressources mais ne garantit pas le succès. Grâce à nos garanties de rendement et à nos nombreux jalons « go/no-go », ProteoGenix offre un service de génération de lignée stable sans risque client. Notre expérience (1 500 protéines, 5 000 anticorps, 100 lignées stables) et notre plateforme d’IA (pré-étude in silico, optimisation de séquence, tests haut débit) nous permettent de maîtriser ces risques.
• Délai : Développement d’une lignée stable = processus long (3 à 12 mois). Les CROs ayant développé des plateformes propriétaires pour augmenter la rapidité sans sacrifier la qualité sont les plus performants. Chez ProteoGenix, nos outils bioinformatiques et l’intégration du système VIPS nous permettent de réduire de 50 % le temps de sélection monoclonale.
• Innovation : Un service « core » pour ProteoGenix, avec une démarche d’amélioration continue : développement d’une lignée propriétaire sur-exprimant les anticorps, intégration d’IA… D’où des rendements et une qualité supérieurs.
• Bonus : Pour maximiser votre succès, confier à un seul prestataire (de la génération d’anticorps à la lignée stable) garantit la cohérence de tout le process et l’anticipation de chaque étape, que votre objectif soit thérapeutique, diagnostique ou vétérinaire.