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Cliente
INSERM U1312 (BRIC, Université de Bordeaux)
CNRS
Université de Bordeaux
Institute for Neurosciences of Montpellier (INSERM U1051, Université de Montpellier)
KU Leuven y Université Paris Cité / INSERM U1266 (IPNP)
-
Sector
Biotecnología
Dominio de investigación
Neurociencia / Biología vascular
Diana
Receptor endotelial Unc5B (Humano y Rata)
-
Procesos clave
- Selección Phage-Fab (5 rondas) sobre Unc5B-ECD-Fc
- Screening y subclonación de Fabs únicos
- Análisis cinético SPR en Biacore™ 8K
Cifras clave
5
Rondas de selección Phage-Fab
Análisis exhaustivo para aislar clones de alta especificidad
1,29nM
Afinidad (KD, Unc5B Humano)
Alta afinidad confirmada por SPR (Biacore 8K)
1,34nM
Afinidad (KD, Unc5B Rata)
Desempeño consistente entre especies
Contexto
Un consorcio de instituciones de investigación francesas y belgas: INSERM U1312 (BRIC, Université de Bordeaux), CNRS, Université de Bordeaux, Institute for Neurosciences of Montpellier (INSERM U1051, Université de Montpellier), KU Leuven y Université Paris Cité / INSERM U1266 (IPNP) investigaba cómo los receptores endoteliales mantienen la barrera hematoencefálica (BBB, por sus siglas en inglés) en adultos.
Para probar la hipótesis de que el receptor Unc5B controla la permeabilidad de la BBB a través de su interacción con Netrin-1, los científicos necesitaban anticuerpos bloqueadores funcionales de alta calidad que pudieran interrumpir esta interacción sin reactividad cruzada. Además, requerían datos cinéticos precisos para cuantificar las propiedades de unión del anticuerpo y confirmar su efecto inhibidor.
En vez de desarrollar y validar estas herramientas complejas internamente, lo cual requeriría tiempo y recursos considerables, el equipo contactó a ProteoGenix. Al ofrecer generación personalizada de anticuerpos y análisis por resonancia de plasmones superficiales (SPR, por sus siglas en inglés), ProteoGenix permitió al consorcio obtener, de manera rápida, reactivos confiables y datos cuantitativos esenciales para avanzar en su investigación.
Desafíos
1
Generar anticuerpos que bloqueen la unión Unc5B–Netrin-1 sin reactividad cruzada
2
Medir constantes de afinidad en el rango nanomolar para garantizar precisión relevante biológicamente
3
Demanda de herramientas de validación cuantitativas para confirmar la fuerza y especificidad de la unión antes de pasar a estudios funcionales e in vivo.
4
Consistencia entre especies: Los anticuerpos debían unirse a Unc5B humano y de rata para apoyar modelos de traslación in vivo.
Enfoque de ProteoGenix
- Selección Phage-Fab utilizando una biblioteca naive Fab (Lib60) sobre Unc5B-ECD-Fc recombinante de rata (R&D Systems).
2. Cinco rondas de selección con contraselección sobre proteína no relacionada para eliminar uniones no específicas.
3. Screening por ELISA de clones individuales de las rondas 3–5 para identificar Fabs anti-Unc5B específicos.
4. Selección y subclonación de varios Fabs únicos antes de la producción completa de anticuerpos (ProteoGenix, Francia).
5. Análisis de resonancia de plasmones superficiales (SPR) realizado en Biacore 8K (ProteoGenix) para medir la cinética de unión de anticuerpos a Unc5B-ECD-Fc humano y de rata
Resultados
Los anticuerpos personalizados generados por ProteoGenix demostraron una unión fuerte y específica tanto a Unc5B humano como de rata, tal como se confirmó mediante análisis por resonancia de plasmones superficiales (SPR) realizados en la plataforma Biacore™ 8K. Las afinidades medidas fueron de 1.29 nM para Unc5B humano y 1.34 nM para Unc5B de rata, destacando un excelente desempeño entre especies y una alta precisión de unión. Estos resultados cuantitativos proporcionaron al equipo de investigación reactivos validados listos para los ensayos biológicos posteriores. Mediante estos anticuerpos, el consorcio demostró con éxito que bloquear la interacción Netrin-1–Unc5B induce un aumento transitorio y reversible de la permeabilidad de la barrera hematoencefálica. Este hallazgo estableció a Unc5B como un regulador clave de la señalización endotelial, abriendo nuevas perspectivas para la administración controlada de terapias en el cerebro.
Conclusión clave
Gracias a los anticuerpos y datos cinéticos entregados por ProteoGenix, el consorcio de investigación pudo validar rápidamente su hipótesis y descubrir el papel central de Unc5B en el mantenimiento de la integridad de la barrera hematoencefálica. El estudio reveló cómo la señalización Netrin-1–Unc5B respalda la estabilidad endotelial y demostró que el bloqueo dirigido con anticuerpos puede abrir la barrera de forma transitoria y segura. Esta colaboración ilustra cómo reactivos fiables y de alta calidad, junto con una caracterización biofísica precisa, pueden acelerar los descubrimientos académicos y conectar la investigación básica con oportunidades traslacionales en neurociencias.
