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Client
INSERM U1312 (BRIC, Université de Bordeaux)
CNRS
Université de Bordeaux
Institute for Neurosciences of Montpellier (INSERM U1051, Université de Montpellier)
KU Leuven, et Université Paris Cité / INSERM U1266 (IPNP)
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Secteur
Biotechnologies
Domaine de recherche
Neurosciences / Biologie vasculaire
Cible
Récepteur endothélial Unc5B (Humain & Rat)
-
Processus clés
- Sélection Phage-Fab (5 tours) sur Unc5B-ECD-Fc
- Dépistage et sous-clonage des Fabs uniques
- Analyse cinétique SPR sur Biacore™ 8K
Chiffres clés
5
Tours de sélection Phage-Fab
Dépistage poussé pour isoler des clones de haute spécificité
1,29 nM
Affinité (KD, Unc5B humain)
Affinité élevée confirmée par SPR (Biacore 8K)
1,34 nM
Affinité (KD, Unc5B rat)
Performance constante entre espèces
Contexte
Un consortium d’institutions françaises et belges : INSERM U1312 (BRIC, Université de Bordeaux), CNRS, Université de Bordeaux, Institute for Neurosciences of Montpellier (INSERM U1051, Université de Montpellier), KU Leuven et Université Paris Cité / INSERM U1266 (IPNP), étudiaient comment les récepteurs endothéliaux maintiennent la barrière hémato-encéphalique (BHE, BBB) chez l’adulte.
Pour tester l’hypothèse que le récepteur Unc5B contrôle la perméabilité de la BHE à travers son interaction avec Netrin-1, les chercheurs avaient besoin d’anticorps bloquant la fonction, de haute qualité, capables de perturber précisément cette interaction sans réactivité croisée. Ils exigeaient également des données cinétiques précises pour quantifier les propriétés de liaison de ces anticorps et valider leur effet inhibiteur.
Plutôt que de développer et valider en interne ces outils complexes, ce qui aurait nécessité beaucoup de temps et de ressources, l’équipe s’est tournée vers ProteoGenix. En fournissant la génération d’anticorps sur mesure et l’analyse par résonance de plasmon de surface (SPR, Surface Plasmon Resonance), ProteoGenix a permis au consortium d’obtenir rapidement des réactifs fiables et des données quantitatives cruciales pour faire avancer leur recherche.
Défis
1
Générer des anticorps capables de bloquer l’interaction Unc5B–Netrin-1 sans réactivité croisée
2
Mesurer les constantes d’affinité dans une gamme nanomolaire pour garantir une précision biologiquement pertinente
3
Exigence d’outils de validation quantitative pour confirmer la force et la spécificité de la liaison avant les études fonctionnelles et in vivo.
4
Cohérence inter-espèces : les anticorps devaient lier à la fois Unc5B humain et rat pour valider des modèles in vivo translationnels.
Approche de ProteoGenix
- Sélection Phage-Fab à partir d’une librairie naïve Fab (Lib60) sur Unc5B-ECD-Fc recombinant de rat (R&D Systems).
2. Cinq tours de sélection avec contre-sélection sur une protéine non reliée pour éliminer les fixations non spécifiques.
3. Dépistage ELISA des clones individuels à partir des tours 3 à 5 pour identifier les fixations spécifiques d’Unc5B.
4. Sélection et sous-clonage de plusieurs Fabs uniques avant la production de l’anticorps complet (ProteoGenix, France).
5. Analyse par résonance de plasmon de surface (SPR) réalisée sur Biacore 8K (ProteoGenix) pour mesurer la cinétique de liaison des anticorps sur Unc5B-ECD-Fc humain et rat.
Résultats
Les anticorps sur mesure générés par ProteoGenix ont démontré une liaison forte et spécifique à Unc5B humain et rat, confirmée par des analyses SPR effectuées sur la plateforme Biacore™ 8K. Les affinités mesurées étaient de 1,29 nM pour Unc5B humain et 1,34 nM pour Unc5B rat, démontrant une excellente performance inter-espèces et une grande précision de liaison. Ces résultats quantitatifs ont fourni à l’équipe de recherche des réactifs validés, prêts pour les tests biologiques ultérieurs. Grâce à ces anticorps, le consortium a démontré que le blocage de l’interaction Netrin-1–Unc5B induit une augmentation transitoire et réversible de la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique. Cette découverte consacre Unc5B comme régulateur majeur du signalement endothélial et ouvre de nouvelles perspectives pour la délivrance contrôlée de molécules thérapeutiques vers le cerveau.
Enseignement clé
Grâce aux anticorps et aux données cinétiques fournis par ProteoGenix, le consortium a pu valider rapidement son hypothèse et révéler le rôle central d’Unc5B dans le maintien de l’intégrité de la barrière hémato-encéphalique (BBB). L’étude a dévoilé comment le signalement Netrin-1–Unc5B soutient la stabilité endothéliale et a démontré que le blocage ciblé par les anticorps peut ouvrir la barrière de façon transitoire et sécurisée. Cette collaboration illustre à quel point des réactifs fiables et des caractérisations biophysiques de qualité permettent d’accélérer les découvertes académiques et de relier la recherche fondamentale aux applications translationnelles en neurosciences.
