POLYKLONALE ANTIKÖRPER-HERSTELLUNG

Steigern Sie die Sensitivität Ihrer Immunassays mit unseren integrierten Lösungen für die Herstellung polyklonaler Antikörper. Von der Antigendesign bis zur Serumpurifikation sind unsere Antikörperproduktionsdienstleistungen für maximale Qualität und Ausbeute konzipiert. Erzeugen Sie hochaffine polyklonale Antikörper mit jedem Antigentyp und in jeder Spezies, darunter Kaninchen, Huhn, Maus, Ratte, Meerschweinchen, Ziege, Schaf, Lama oder Alpaka!

Die Auswahl des Wirts ist ein wichtiger Schritt in jedem Prozess zur Herstellung polyklonaler Antikörper. Obwohl Kaninchen die konventionellste Wahl sind, steigt das Interesse an Antikörpern aus Hühnern und Kameliden.

Die Produktion polyklonaler Antikörper im Huhn bietet Vorteile bei der Hochskalierung, da IgY-Antikörper aus Eigelb und nicht aus Serum gewonnen werden. Die Aufreinigung aus Eigelb ist komplexer als aus Serum, jedoch kann sie in größeren Mengen erfolgen als bei polyklonalen Antikörpern aus Säugern.

Im Gegensatz dazu steigt die Beliebtheit von Kameliden als Wirtstiere für polyklonale Antikörper. Neben klassischen IgG-Antikörpern produzieren sie Immunglobuline ohne Leichtketten – sogenannte Heavy-Chain-Antikörper (HAbs). Diese haben besondere Eigenschaften:

• Erhöhte Stabilität bei extremen pH-Werten oder Temperaturen
• Geringe sterische Hinderung ermöglicht Zugang zu verborgenen Epitopen
• Bessere Gewebepenetration für Immunhistochemie und therapeutische Anwendungen

Polykonale Antikörperherstellung bei ProteoGenix: FAQ

Welche Antigentypen können für die Produktion polyklonaler Antikörper verwendet werden?

Wir produzieren alle Antigentypen in unseren Einrichtungen – Peptide, Proteine, DNA, kleine Moleküle und ganze Zellen, die das Zielantigen überexprimieren. Auch eine Herstellung mit kundeneigenen Antigenen ist möglich.

Wie optimiert man den Prozess der polyklonalen Antikörperherstellung?

Antigendesign & -produktion

Das Erreichen hoher Titern zielgerichteter Antikörper hängt von der Fähigkeit des Antigens ab, eine starke Immunantwort auszulösen. Daher ist die Auswahl eines geeigneten Antigens eine der wichtigsten Schritte.

Für die polyklonale Antikörper-Generierung eignen sich:

• Proteine – die konventionellsten Antigene zur Antikörperherstellung; sie gewährleisten, dass polyklonale Antikörper verschiedene relevante Epitope erkennen, die in der nativ gefalteten Proteinstruktur exponiert sind.
• Peptide – eignen sich bei der Entwicklung von Antikörpern gegen lineare Epitope (z. B. für Immunblots) oder wenn Antikörper gegen spezifische Epitope benötigt werden (erhöhte Spezifität). Da die meisten Peptide nicht immunogen sind, werden zur Verstärkung der Immunantwort meist Adjuvantien eingesetzt.
• DNA – Genetische Immunisierung wird für Spezialfälle eingesetzt, z. B. wenn das Zielprotein schwer herzustellen oder instabil oder mit komplexen Transmembranbereichen versehen ist.

Weitere Optionen: kleine Moleküle bzw. ganze Zellen (nativ/rekombinant); in diesen Fällen ist die Entwicklung individueller Lösungen erforderlich.

Tierimmunisierung

Unser Standard-Immunisierungsprotokoll startet ab:

• 51 Tage für anti-Protein-Polykonale-Antikörper
• 70 Tage für anti-Peptid-Polykonale-Antikörper

Beide Protokolle können verlängert werden, falls garantierte Titer nicht erreicht werden. Es ist oft besser, die Immunisierung mit geringerer Antigenmenge und längerer Dauer statt viel Antigen und kurzer Zeit durchzuführen.

Polykonale Antikörper-Reinigung

Die Gewinnung erfolgt meist über Blutentnahme nach Erreichen des Zieltiters; durch Zentrifugation werden Zellfraktion und Antikörper-angereichertes Serum getrennt.

Rohseren eignen sich für viele Anwendungen. Für höhere Sensitivität und weniger Off-Target-Bindung empfiehlt sich aber eine Reinigung. Die Reinigung polyklonaler Antikörper kann erfolgen durch:

• Protein A- oder G-Reinigung – Protein A/G binden die Fc-Region von Antikörpern mit hoher Affinität, was deren einfache Abtrennung vom Serum ermöglicht. Schwach affine Antikörper werden so jedoch nicht entfernt.
• Antigenspezifische Reinigung – Über Affinitätschromatographie werden nur die Antikörper mit höchster Antigenaffinität isoliert, was Off-Target-Bindung und Hintergrundsignale vermindert.

Sie möchten Ihre eigenen polyklonalen Antikörper herstellen lassen? Kontaktieren Sie gerne Ihren persönlichen Kundenberater!

Wie werden Antikörpertiter gemessen?

Zum Monitoring werden regelmäßig Proben aus hyperimmunisierten Tieren genommen und die Titer bestimmt – meist per ELISA, auf Wunsch auch per Western Blot.

Polykonale Antikörper

Was sind polyklonale Antikörper?

Polykonale Antikörper sind eine Mischung monoklonaler Antikörper, die aus unterschiedlichen B-Zell-Klonen stammen. Sie besitzen unterschiedliche Epitopspezifitäten und Bindungsaffinitäten – was sie sehr sensibel für schwach vorhandene Marker und sehr effektiv bei komplexen Zielen macht.

Wie werden polyklonale Antikörper klassifiziert?

Polykonale Antikörper werden je nach Wirtsspezies und Antigentyp eingeteilt. Häufig werden sie in Kaninchen, Ziegen oder Schafen produziert. Kaninchen-Polykonale sind besonders wertvoll, weil ihr Immunsystem hochaffine Antikörper in größerer Menge erzeugt.
Polykonale werden auch nach dieser Klassifizierung benannt – z. B. anti-Maus Kaninchen-Polykonale beschreiben pAbs, die gegen murines IgG gerichtet sind und in Kaninchen produziert wurden.

Hauptvorteile und Anwendungen von polyklonalen Antikörpern

Polykonale sind eine Mischung monoklonaler Antikörper, unterscheiden sich jedoch in Epitopspezifität und Bindungsstärke. Gewonnen werden sie durch Immunisierung von Tieren mit der Zielstruktur (Protein, Peptid, DNA etc.) und Aufreinigung nach Erreichen einer robusten Immunantwort.

Im Gegensatz zu monoklonalen Antikörpern, die für ihre hohe Spezifität bekannt sind, sind polyklonale für ihre hohe Sensitivität berühmt – sie sind unentbehrlich für Forschung, Therapie und Diagnostik. Besonders wertvoll sind sie für die Detektion seltener Marker, z. B. in Früherkennung, Lebensmittelüberwachung oder zur Anreicherung seltener Moleküle vor Analytik.

Therapeutisch sind polyklonale Antiseren entscheidend für die Behandlung komplexer Akuterkrankungen (z. B. Schlangenbiss). Hier besteht das Gift aus komplexen Proteinmischungen, sodass eine Therapie verschiedene Antigene und Epitope erkennen und neutralisieren muss.

Technisch betrachtet sind polyklonale Antikörper günstiger und schneller zu produzieren als monoklonale. Nachteile sind die schwierige Skalierung und hohe Chargenunterschiede – dies lässt sich jedoch durch geeignete Kontrollen und Standards abmildern.

Für die Skalierung bieten neue Methoden Lösungsansätze, z. B. IgY-Reinigung aus Eigelb mittels ionischer Flüssigkeiten. Wegen ihrer nicht-invasiven Gewinnung und günstigen neuen Verfahren könnten IgYs bald an Bedeutung zulegen.

Welche Vorteile bieten Mono- und Polykonale im Paar?

Polykonale Antikörper können solo oder zusammen mit monoklonalen Antikörpern in verschiedenen Assays eingesetzt werden. Die klassische Anwendung ist der Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA). Hier binden monoklonale Antikörper (Primärantikörper) das Ziel, während polyklonale (Sekundärantikörper) die Primärantikörper erkennen.

In diesem Format sind die Primärantikörper “nackt” (keine Tags), Sekundärantikörper tragen das Enzym-Tag – dies ermöglicht eine Signalverstärkung und damit eine deutliche Senkung der Nachweisgrenze.

Die Signalverstärkung beruht darauf, dass der Primärantikörper nur ein Epitop bindet, während mehrere sekundäre Antikörper an unterschiedliche Regionen des Primärantikörpers binden. Dadurch können mehrere Enzym-konjugierte Sekundärantikörper den Primärantikörper “überziehen” und das Signal erheblich verstärken.

Hohe Sensitivität birgt technische Herausforderungen – polyklonale Antikörper neigen zu unspezifischer Bindung, wodurch falsch positive Ergebnisse entstehen können. Um dies zu verhindern, sollten sie streng gereinigt werden (z. B. antigenspezifische Reinigung) und Kontrollen/Standards im Assay integriert werden.

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