Case report

Scoperta rapida di anticorpi selettivi anti-pHLA per la terapia CAR-T nel melanoma

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Cliente

Azienda farmaceutica americana

Settore

Terapie
Patologia target

Melanoma

Tempistiche

3 settimane
Processi chiave
- Cicli di phage display con le librerie proprietarie di ProteoGenix
- Screening dei binder contro l’antigene target e antigeni irrilevanti simili
- Nuovo screening dei migliori candidati per garantire il legame specifico

Cloni specifici identificati

Librerie di phage display testate

>2x 10¹¹

Cloni diversi testati in totale

Contesto

Un’azienda farmaceutica americana voleva sviluppare una terapia CAR-T di nuova generazione per il melanoma, puntando su un complesso peptide-HLA (pHLA) specifico della malattia. La sfida? Raggiungere una selettività perfetta. L’anticorpo doveva riconoscere il target pHLA—un peptide specifico presentato da una molecola HLA sulle cellule tumorali—evitando completamente la cross-reattività con la stessa molecola HLA quando presenta peptidi irrilevanti o self-peptidi. Questo livello di discriminazione è notoriamente difficile: basta una singola mutazione amminoacidica nel peptide per distinguere tra cellula cancerosa e sana, e ogni legame fuori target potrebbe innescare una grave autoimmunità nei pazienti.

Ottenuta la specificità, l’anticorpo vincente sarebbe stato ingegnerizzato in un costrutto CAR-T, armando i linfociti T per riconoscere e distruggere solo le cellule di melanoma che mostrano questa firma molecolare.

Sfide

Mirare specificamente al pHLA rilevante

Ottenere un’elevata affinità senza interagire con il contro-pHLA irrilevante

Approccio ProteoGenix

Mirare ai complessi pHLA è tra le sfide tecniche più impegnative nella scoperta di anticorpi. L’interfaccia di legame è sottile e i metodi di immunizzazione tradizionali hanno difficoltà a generare la specificità richiesta. Il phage display, invece, permette una selezione diretta in vitro sia contro il target desiderato che contro i contro-target indesiderati, caratteristica critica per la selezione negativa. Inoltre, il rapido tempo di realizzazione di tre settimane ha permesso al cliente di testare rapidamente diversi candidati e accelerare la convalida preclinica, un vantaggio decisivo nel competitivo settore CAR-T.

Per affrontare questo obiettivo ad alto rischio, abbiamo utilizzato in parallelo tre delle nostre librerie immunitarie proprietarie:

LiAb-SFMAX™ (5,37×10¹⁰ cloni) – La nostra più ampia libreria umana di scFv, per una vasta copertura delle sequenze su diversi framework anticorpali
LiAb-SFCANCER™ – Arricchita con sequenze anticorpali da pazienti oncologici, naturalmente indirizzate verso antigeni tumorali
LiAb-SFAUTOIMMUNE™ – Offre una diversità e architettura di paratopi unica, preziosa per la discriminazione fine dell’epitopo

Perché tre librerie in questo progetto? Gli anticorpi anti-pHLA devono distinguere superfici molecolari quasi identiche—leggendo un vero e proprio “codice a barre” peptidico sulla piattaforma HLA. Analizzando tre repertori immunitari distinti (oltre 2×10¹¹ cloni unici), abbiamo massimizzato la probabilità di individuare binder rari con la selettività straordinaria necessaria.

Antigene rilevante pHLA e antigene HLA caricato con peptide irrilevante (contro pHLA)

2. Cicli di phage display con le nostre 3 librerie immunitarie proprietarie:

LiAb-SFMAX^TM
LiAb-SFCANCER^TM
LiAb-SFAUTOIMM^TM

3. Screening dei binder tramite ELISA contro pHLA rilevante e irrilevante

4. Nuovo screening dei migliori candidati per garantire il legame specifico

Risultati

La nostra campagna di screening ha identificato 17 cloni con chiara positività e specificità verso il target pHLA. L’analisi di sequenziamento di questi cloni ha fornito 4 sequenze anticorpali distinte e uniche. Una convalida approfondita ha confermato che tutti e 4 i cloni si legavano in modo specifico e forte a pHLA, portando il cliente ad ordinare l’intero set di sequenze. Dopo la caratterizzazione supplementare, il cliente ha selezionato il miglior candidato e lo ha validato con successo come terapia CAR-T in saggi preclinici, confermandone il potenziale terapeutico.

Risultato Chiave

ProteoGenix ha identificato con successo 4 candidati anticorpali unici per un’azienda farmaceutica americana grazie allo screening di 3 librerie proprietarie di phage display in sole 3 settimane.

Tutti i candidati hanno dimostrato un legame altamente specifico con il target pHLA associato al melanoma, evitando la cross-reattività con molecole irrilevanti simili.

Il miglior candidato è stato poi ingegnerizzato in una terapia CAR-T, validata con successo in saggi preclinici.

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