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View ProductsOptimisez vos chances de produire efficacement vos protéines recombinantes ! Notre service d’expression de protéines en E. coli intègre jusqu’à 32 tests d’expression en standard afin de garantir une forte probabilité de production, même pour les protéines les plus difficiles à exprimer.
RAPPORT DE DONNÉES
Accédez gratuitement à des données authentiques et représentatives
d’un projet de test d’expression & purification E.coli
Un exemple idéal des informations à attendre dans ce type de rapport
Ce rapport détaillé inclut :
- Un jeu complet de données approfondies
- Des tests avancés et leurs résultats
- Des informations clés à chaque étape
Quel est notre secret pour une production optimisée
de protéines en E. coli ?
Prix avantageux
Notre pack de production en E. coli commence à partir de 1650€.
32 tests d’expression
Nos packs comprennent jusqu’à 32 tests de conditions d’expression à ce tarif.
Qualité garantie
Notre package E. coli inclut une large gamme d’analyses QC.
Outil d’optimisation du gène
En tant qu’expert en synthèse de gènes, ProteoGenix intègre la synthèse du gène et l’optimisation des codons à son service d’expression en E. coli.
Production à toutes les échelles
Nous proposons de l’expression de protéines de l’échelle milligramme au gramme en E. coli.
Chefs de projet docteurs
Nos chefs de projet PhD vous accompagnent dans votre projet d’expression de protéines en E. coli.
Quels sont les 32 tests inclus dans notre service d’expression de protéines en E.coli ?
La production de protéines recombinantes est hautement technique et exige une solide expertise, car un protocole unique ne convient pas à tous types de produits. Fort de plus de 16 ans d’expérience et de 1500+ protéines exprimées, ProteoGenix a mis au point un protocole interne intégrant jusqu’à 32 tests de conditions d’expression dans son offre “Production de protéines en E. coli” afin de répondre au mieux à vos besoins. Les possibilités techniques sont quasiment infinies, une telle expérience est donc déterminante.
Les conditions d’expression variées incluent :
- Souches d’E. coli
- Température
- Temps d’induction
- Méthode d’extraction protéique
- Méthode de purification
Vous souhaitez produire une protéine en E. coli ou recherchez plus d’informations sur nos capacités d’expression de protéines en E. coli ? Notre chef de projet vous répond sous 48 h.
Pour les protéines difficiles à exprimer, nous proposons aussi un service de criblage haut débit permettant d’augmenter la probabilité d’identifier les conditions optimales. Plus les conditions testées sont nombreuses, plus la probabilité d’obtenir une solubilité, fonctionnalité et productivité optimales augmente…
Toutes les conditions sont modulables : optimisation des codons, vecteurs avec différents promoteurs, séquences, étiquettes de purification, méthode de purification, conditions de clivage, repliement, formulation… L’avantage de l’expression protéique en E. coli est la diversité presque infinie de solutions techniques, et ProteoGenix dispose d’une expertise large grâce à la variété de projets réalisés à ce jour.
Notre process
Construction du vecteur d’expression
- Synthèse du gène avec optimisation des codons pour E. coli.
- Sous-clonage dans un vecteur d’expression hautement productif.
Transformation des souches d’E. coli
- Transformation du plasmide dans différentes souches bactériennes.
Test de 32 conditions d’expression
- Évaluation de 32 conditions d’expression (température, durée d’induction, fractions…)
- Détermination des meilleures conditions de production
- Tests de purification des protéines
Production échelle supérieure et purification
- Expression et purification sur 1L en conditions optimisées.
Analyses QC
- Analyse SDS/PAGE et Western Blot.
- Quantification par méthode de Bradford.
Contenu du service
| Étape | Contenu | Délais | Livrables |
|---|---|---|---|
| Synthèse de gène |
|
3 à 4 semaines |
|
| Évaluation de l'expression à petite échelle |
|
2 à 3 semaines |
|
| Montée en échelle de production |
|
2 à 3 semaines |
|
Options disponibles :
- Élimination de tag par clivage enzymatique
- Purification supplémentaire (IEC, SEC…)
- Dosage et élimination des endotoxines
- Augmentation d’échelle/Fermentation
Étude de cas
Objectif du projet
L’un de nos clients a commandé une production de protéine recombinante en E. coli incluant également la synthèse du gène et le sous-clonage dans un vecteur d’expression (détails dans le rapport PDF).
Tests d’expression de protéines
L’objectif des tests est de déterminer les meilleures conditions d’expression en évaluant :
- Souche E. coli utilisée
- Stratégie d’induction
- Température
- Durée d’induction
- Meilleure condition d’extraction (native ou dénaturée)
Le protocole complet et toutes les données sont détaillés dans le rapport PDF.
Figure 1 : Tests d’expression de la protéine cible. Marquage bleu Coomassie et analyse Reducing-PAGE de NPE et DPE. MW. Marqueur de poids moléculaire. Ø. Culture bactérienne non induite (contrôle négatif). Induction IPTG 1mM.
La protéine s’exprime à haut niveau dans toutes les souches testées et se localise principalement dans le NPE (Figure 1). Les conditions optimales pour l’expression native sont indiquées dans le rapport PDF complet.
Tests de purification à petite échelle
Un test de purification à petite échelle (culture de 200 ml) a été réalisé dans des conditions natives. Matériel de départ : NPE obtenu après expression native optimale. Le protocole détaillé est dans le rapport PDF.
Figure 2 : Test de purification de la protéine cible. Analyse Reducing-PAGE avec marquage bleu Coomassie A. Profil de purification. B. QC final (après échange de tampon). MW. Marqueur de poids moléculaire. IN. Input. FT. Flow through. W1-W3. Étapes de lavage. E1-E9. Fractions éluées.
La protéine cible a été purifiée en conditions natives (Figure 2). Le rendement et la pureté sont détaillés dans le Tableau 1.
| N° de souche | Pureté* | Rendement (mg/L)** | |
|---|---|---|---|
| XXX | No.1 | 90% | 146 |
Tableau 1 : Rendements de production et de purification. Tampon final : TBS pH8.0. **Estimations basées sur cultures de 200ml. *Basé sur les chargements 2µg de la Figure 2B (flèches vertes).
Témoignage : Production de protéines
« ProteoGenix m’a accompagnée pour la génération d’un peptide et d’une protéine. Toute l’équipe a été très réactive et m’a apporté des conseils précieux tout au long du projet. Forte de cette expérience, je renouvellerai ma confiance à ProteoGenix. »
« ProteoGenix est pour nous un partenaire fiable pour la production de protéines recombinantes en E. coli et toujours très professionnel. Nous apprécions la qualité du service, la disponibilité de l’équipe et le suivi constant. »
Avantages et limites de l’expression en E. coli
E. coli est un organisme bien caractérisé pour la production de protéines et fut le premier hôte expressant une protéine thérapeutique approuvée.
Jusqu’au milieu des années 90, E. coli était le meilleur choix pour la bioproduction grâce à de nombreux avantages :
- Croissance rapide,
- Densités cellulaires élevées,
- Transformation plasmiques simple et rapide.
Ces avantages font d’E. coli le choix privilégié pour une expression de protéines rapide et économique.
Néanmoins, la production de protéines en E. coli ne convient pas toujours pour les protéines complexes, les modifications post-traductionnelles ou les productions biothérapeutiques du fait de la présence d’endotoxines (retenez que nous proposons un service d’élimination des endotoxines).
Pour plus d’informations sur notre plateforme d’expression de protéines en E. coli, contactez notre chef de projet dédié.
Exploitation des corps d’inclusion pour l’expression à haut rendement en E. coli
Les corps d’inclusion sont souvent perçus comme un frein mais sont généralement associés à des taux élevés d’expression. Plusieurs techniques existent pour limiter leur formation mais le rendement final reste variable, dépendant du produit. Il est aussi possible de réduire la température ou de jouer sur les souches. Toutefois, les corps d’inclusion présentent certains avantages :
- Croissance rapide,
- Densités cellulaires élevées,
- Transformation plasmiques simple et rapide.
Ainsi, de nombreux microbiologistes développent des protocoles de renaturation permettant d’exploiter ces corps d’inclusion comme source de protéines recombinantes.
Chez ProteoGenix, nous avons développé une plateforme de renaturation sur-mesure pour valoriser au maximum l’expression de protéines recombinantes et répondre à vos besoins. Plus d’informations ? Contactez nos chefs de projet.