GENERACIÓN DE ANTICUERPOS POLICLONALES

¡Aumente la sensibilidad de sus inmunoensayos con nuestras soluciones integradas para la producción de anticuerpos policlonales! Desde el diseño del antígeno hasta la purificación del suero, nuestros servicios de producción de anticuerpos están diseñados para ofrecer la máxima calidad y rendimiento. Genere anticuerpos policlonales de alta afinidad utilizando cualquier tipo de antígeno y en cualquier especie, incluidas conejo, gallina, ratón, rata, cobaya, cabra, oveja, llama o alpaca.

La selección del huésped es un paso importante en cada proceso de producción de anticuerpos policlonales. Aunque el uso de conejos es lo más convencional, hay un creciente interés en producir anticuerpos de gallina y camelidae.

La producción de anticuerpos policlonales en gallina puede ser muy ventajosa cuando es necesario escalar el proceso, ya que los anticuerpos IgY se extraen de la yema de huevo y no del suero. Se sabe que purificar yema de huevo es más desafiante que purificar suero; sin embargo, puede obtenerse en mayor cantidad que en especies de mamíferos.

Por otra parte, los camelidae vienen siendo cada vez más apreciados como huéspedes de producción. Además de los anticuerpos IgG convencionales, producen inmunoglobulinas desprovistas de cadenas ligeras — anticuerpos de cadena pesada (HAbs). Estas moléculas tienen propiedades únicas, incluyendo:

• Mayor estabilidad frente a pH y temperaturas extremas
• Baja interferencia estérica, lo que permite un acceso más fácil a antígenos enterrados no accesibles para anticuerpos convencionales.
• Mayor capacidad de penetración tisular, lo que es valioso para experimentos de inmunohistoquímica o aplicaciones terapéuticas.

Producción de anticuerpos policlonales en ProteoGenix: Preguntas frecuentes

¿Qué tipos de antígenos se pueden usar para la producción de anticuerpos policlonales?

Tenemos capacidad de producir todo tipo de antígenos en nuestras instalaciones: péptidos, proteínas, ADN, moléculas pequeñas y células que sobreexpresen el antígeno de interés. También podemos generar anticuerpos policlonales usando antígenos proporcionados por el cliente.

¿Cómo optimizar el proceso de producción de anticuerpos policlonales?

Diseño y producción de antígeno

Lograr títulos altos y específicos depende de la capacidad del antígeno para inducir una respuesta inmune robusta. Por eso, la elección de un antígeno adecuado es clave a la hora de inmunizar.

Se pueden usar varios tipos de antígeno para la generación de anticuerpos policlonales, como:

• Proteínas: son los antígenos más convencionales para la generación de anticuerpos. Permiten que los policlonales reconozcan diferentes epítopos relevantes en la conformación nativa de la proteína.
• Péptidos: útiles al desarrollar anticuerpos para epítopos lineales (importantes en Western Blot) o para epítopos específicos (mayor especificidad de ensayo). Como la mayoría de los péptidos no son inmunogénicos, se usan adyuvantes para potenciar la respuesta inmune.
• ADN: la inmunización génica es para casos especiales, por ejemplo cuando la proteína es difícil de producir, inestable o contiene dominios transmembrana complejos.

Otros antígenos como moléculas pequeñas o células completas (nativas o recombinantes) pueden usarse, aunque estos proyectos requieren soluciones totalmente a medida.

Inmunización animal

Nuestro protocolo estándar de inmunización comienza en:

• 51 días para poli-antiproteína
• 70 días para poli-antipéptido

Ambos protocolos pueden ampliarse si no se alcanzan los títulos garantizados. Por lo general, es mejor inmunizar animales durante más tiempo con menos cantidad de antígeno, que menos tiempo y grandes cantidades.

Purificación de anticuerpos policlonales

Los anticuerpos policlonales se obtienen típicamente al sangrar los huéspedes cuando se alcanzan los títulos deseados. El suero enriquecido en anticuerpos puede separarse por centrifugación obteniendo una solución cruda.

Las preparaciones crudas son útiles en muchas aplicaciones. Sin embargo, para mayor sensibilidad y menor unión inespecífica, es recomendable purificarlas. La purificación de anticuerpos policlonales puede realizarse por:

• Purificación proteína A o G: estas proteínas, producidas por Staphylococcus aureus y Streptococcus spp. respectivamente, se unen con alta afinidad al fragmento Fc del anticuerpo. Permiten la separación eficiente de las inmunoglobulinas, aunque no eliminan específicamente anticuerpos con baja afinidad.
• Purificación específica (antígeno): la cromatografía de afinidad permite recuperar solo los anticuerpos con mayor afinidad, reduciendo la unión inespecífica y el ruido de fondo en inmunoensayos.

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¿Cómo se miden los títulos de anticuerpos?

Para monitorizar la respuesta a la inmunización, tomamos muestras recurrentes para medir los títulos de anticuerpos. Esto se hace convencionalmente por ELISA, aunque también podemos verificar por Western Blot si así lo solicita el cliente.

Anticuerpos policlonales

¿Qué son los anticuerpos policlonales?

Los anticuerpos policlonales son una mezcla de anticuerpos que se originan en diferentes clones de linfocitos B. Por eso, estos anticuerpos presentan diferentes especificidades de epítopos y afinidad de unión. Esta propiedad los hace muy sensibles a marcadores de baja abundancia y eficaces frente a dianas complejas.

¿Cómo se clasifican los anticuerpos policlonales?

Por su naturaleza diversa, frecuentemente se clasifican según la especie huésped y el antígeno utilizado. Generalmente se producen en conejos, cabras y ovejas. Los anticuerpos policlonales de conejo son especialmente útiles porque su sistema inmune puede generar anticuerpos de alta afinidad en mayor cantidad que otras especies huésped.
También se nombran siguiendo esa clasificación. Por ejemplo, los anticuerpos policlonales de conejo anti-ratón están diseñados para unirse a IgG de ratón y producidos en conejo.

¿Cuáles son las principales ventajas y usos de los anticuerpos policlonales?

Los anticuerpos policlonales son una mezcla con distintas especificidades y afinidades de unión, producidos inmunizando animales huéspedes con un antígeno específico (proteína, péptido, ADN, etc.) y purificando el suero tras la respuesta inmune.

A diferencia de los monoclonales —valorados por su especificidad y selectividad— los policlonales destacan por su alta sensibilidad. Esta cualidad los hace herramientas invaluables en investigación, diagnóstico y terapia. Son especialmente útiles para detectar marcadores de baja abundancia, toxinas y otros compuestos. Así, la detección de estos marcadores raros es muy relevante en diagnóstico temprano, monitorización alimentaria o captura/purificación de dianas escasas.

En el área terapéutica, los antisueros policlonales resultan esenciales para tratar condiciones complejas como el envenenamiento por mordedura de serpiente. Los venenos provocan reacciones agudas y están formados por una mezcla de proteínas con roles patogénicos. Por tanto, los antivenenos efectivos requieren bloquear múltiples antígenos y epítopos presentes para evitar la propagación y reacciones adversas.

Desde el punto de vista técnico, producir anticuerpos policlonales resulta más económico que los monoclonales, además los plazos de producción suelen ser notablemente más breves. Sus principales limitaciones: difícil escalabilidad y alta variabilidad entre lotes, mitigable incluyendo controles y estándares adecuados.

Superar estos retos de escalado es complicado, pero los avances recientes han ofrecido soluciones interesantes. Una de ellas es la purificación de IgY de yema de huevo usando líquidos iónicos. Dada la recolección no invasiva y los métodos de purificación rentables, estas moléculas pronto podrían ganar terreno en múltiples aplicaciones.

¿Cuáles son las ventajas de combinar anticuerpos monoclonales y policlonales?

Los anticuerpos policlonales pueden usarse solos o junto a los monoclonales en diferentes ensayos. La combinación más común es en los ensayos ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Allí, los anticuerpos monoclonales (primarios) reconocen la diana, mientras que los policlonales (secundarios) reconocen a los primarios.

En este formato, los primarios son “desnudos” (sin etiquetas) y los secundarios llevan la etiqueta enzimática. Este sistema amplifica la señal de detección, bajando los límites de detección de manera notable. La amplificación ocurre porque, mientras el anticuerpo primario se une a un solo epítopo, los secundarios pueden unirse a varias regiones, cubriendo toda la superficie del primario y multiplicando la señal.

Esta mayor sensibilidad ofrece retos propios: los anticuerpos policlonales tienden a unirse fuera de objetivo, generando falsos positivos. Para evitarlo, deben purificarse rigurosamente (por ejemplo, por purificación específica con antígeno). Además, incluir controles y estándares ayuda a definir los umbrales de detección.

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