Le cellule di insetto rappresentano un buon sistema per esprimere proteine ricombinanti con avanzate modificazioni post-traslazionali. Le glicosilazioni non sono identiche alle cellule di mammifero, ma sono molto prossime e spesso sufficienti per ottenere delle proteine funzionali. Il tasso di successo di questo sistema è generalmente buono, ma il processo di produzione richiede più tempo rispetto ad altri sistemi in quanto richiede di preparare inizialmente un baculovirus, effettuare la transfezione delle cellule Sf9, Sf21 o Hi5 e poi eseguire 2 giri di infezione. Questo sistema è anche conosciuto come BEVS che vuol dire “Baculovirus Expression Vector System”. Le modifiche post-traslazionali (PTM) sono di solito simili all’espressione nelle cellule di mammifero.
Pacchetto Standard di Espressione di Proteine in Baculovirus:
- Studio del progetto
- Preparazione bacmid senza endotossine
- Infezione delle cellule di insetto
- Generazione di virus P1
- Generazione di virus P2
- Test MOI
- Infezione delle cellule di insetti con virus P2 per la valutazione dell'espressione
- Analisi SDS / PAGE e WB, se necessarie
- Test di depurazione
- Analisi SDS / PAGE e WB, se necessarie
- Espressione di 1L e purificazione scalare
- Analisi SDS / PAGE e WB, se necessarie
- 10 - 12 settimane
- Rapporto finale dettagliato
- Proteina purificata