Servizi di sviluppo di ibridomi

Modulo anticorpi monoclonali

    Grazie a un tasso di successo superiore al 98% nella generazione di oltre 300 anticorpi monoclonali, ProteoGenix è in grado di offrire le migliori garanzie sul mercato per lo sviluppo di ibridomi. Siamo molto orgogliosi di condividere questo successo con voi: pagate solo se siete soddisfatti dell'applicazione e del risultato.

    Perché scegliere ProteoGenix per la
    per lo sviluppo di ibridomi?

    Le migliori garanzie

    Provate gli anticorpi purificati e pagate solo se siete soddisfatti: offriamo le migliori garanzie sul mercato.

    Alto tasso di successo

    Oltre 300 anticorpi monoclonali generati, con un tasso di successo superiore al 98%.

    Diversi approcci di immunizzazione

    Proteina, peptide, vaccini a DNA ecc. usiamo tutti i tipi di strategie di immunizzazione.

    Accreditamento AAALAC

    ProteoGenix applica gli standard etici più elevati e si impegna nell’uso responsabile degli animali a fini scientifici.

    Screening nell'applicazione target

    Volete sviluppare uno strumento diagnostico? Citometria a flusso, ELISA a Sandwich, IHC, IF, IP, WB, ecc. Il vostro anticorpo è garantito per l’applicazione prescelta.

    Esperto di anticorpi terapeutici

    Volete sviluppare un anticorpo terapeutico? Cambio di formato (bispecifico, ADC), umanizzazione, maturazione dell’affinità, ecc. Scegliete la nostra ampia gamma di servizi per raggiungere subito la fase clinica.

    Scegliete il nostro pacchetto di sviluppo di ibridomi garantito

    Per quale applicazione vi serve un anticorpo monoclonale? Fate clic sulle applicazioni seguenti per scoprire il contenuto e le garanzie dei nostri pacchetti di sviluppo di ibridomi.

    Pacchetto Codice Sintesi genetica e produzione di antigeni Immunizzazione, fusione, screening ELISA e subclonaggio Screening nell’applicazione Produzione di Ab purificati Coniugazione di anticorpi e identificazione coppie con test ELISA
    ELISA Standard ATX-PACK1M X
    ELISA premium garantito ATX-PACK2M X X X
    WB premium garantito ATX-PACK3M X X X X
    Citometria a flusso premium garantito ATX-PACK4M X X X X
    ELISA a Sandwich premium garantito ATX-PACK5M X X X X X
    IF premium garantito ATX-PACK6M X X X X
    IP premium garantito ATX-PACK7M X X X X
    Peptide garantito ATX-PACK8M X X X
    Pacchetto specifico per modifiche garantito ATX-PACK9M X X X
    IHC premium garantito ATX-PACK10M X X X

    Testimonianza sullo sviluppo di ibridomi

    “Abbiamo collaborato a un progetto per la generazione di un anticorpo monoclonale in grado di riconoscere una mutazione di un solo aminoacido in una proteina della superficie cellulare associata a cancro. Nonostante il progetto fosse tecnicamente impegnativo, siamo riusciti a generare un clone di ibridoma capace di produrre l’anticorpo desiderato. Durante il progetto abbiamo trovato altri cloni che riconoscevano gli epitopi adiacenti e ProteoGenix ha profuso ulteriori sforzi per realizzare altri subcloni e garantire la consegne di cloni perfettamente funzionanti. In sintesi, ProteoGenix si è sempre impegnata ad assicurare la massima qualità del prodotto e soddisfazione del cliente. L’account manager ha fornito supporto rapido e competente in ogni momento.”

    Rudolf Übelhart, Dott. in Scienze Naturali, Responsabile di progetto, Istituto di immunologia di Ulm

    Contenuto del nostro servizio di sviluppo di ibridomi

    1
    • PROGETTAZIONE DI ANTIGENI

    Definizione della strategia di immunizzazione più adatta.
    Progettazione dell’antigene: sintesi di peptidi, sintesi genetica e produzione di proteine in 2 sistemi o vaccini a DNA.

    2
    • IMMUNIZZAZIONE

    Immunizzazione di 5 topi con il nostro protocollo proprietario ottimizzato

    3
    • FUSIONE CELLULARE

    Prelievo di splenociti da 2 topi per 2 fusioni con linea cellulare di mieloma

    4
    • SELEZIONE E SCREENING DI IBRIDOMI (FASE POLICLONALE)

    Selezione di cellule ibride (selezione HAT)
    Screening di surnatante di coltura vs. antigene target (screening ELISA)

    5
    • ISOLAMENTO E SELEZIONE DEI MIGLIORI MONOCLONI

    Isolamento di monocloni mediante diluizione limitante.
    Espansione e screening dei monocloni con ELISA o in applicazione target.

    Caso di studio: produzione di anticorpi monoclonali per la rilevazione di una proteina di membrana cellulare umana

    SCOPO DEL PROGETTO

    Un cliente ha richiesto la produzione di un anticorpo monoclonale per la rilevazione di una proteina di membrana cellulare umana. La progettazione dell’antigene è stata particolarmente complessa, perché la proteina è nota per essere di difficile espressione in cellule di mammifero.

    Applicazione garantita: citometria a flusso

     

    PROGETTAZIONE E PRODUZIONE DELL’ANTIGENE

    • È stato progettato un frammento di proteina valutata come possibile dominio extra-cellulare e potenzialmente esprimibile in cellule di mammifero.

    • Il gene corrispondente è stato progettato e ottimizzato per l’espressione in cellule di mammifero.

    • Le cellule di mammifero sono state transfettate con un plasmide esprimente la proteina target accoppiata a GFP.

    L’espressione della proteina è stata eseguita in linee cellulari HEK293 e CHO. La produzione finale è stata realizzata in HEK.

    Metodo di produzione: proteina secreta in surnatante di coltura
    Rendimento: 0,43 mg/l
    Quantità prodotta 0,86 mg
    È stato eseguito un QC con SDS-PAGE.

    IMMUNIZZAZIONE DI ANIMALE E SCREENING

    5 topi sono stati immunizzati con 4 iniezioni contenenti l’antigene proteico. Maggiori informazioni sul protocollo sono fornite nel report completo.

    Risultati FC del siero di topo testato contro l’immunogeno:

    Campione testato Controllo positivo Topo 3 Topo 4
    Siero di topo dopo 3a iniezione 90% 42% 29%
    Siero di topo dopo 4a iniezione 76% 47%

    I risultati relativi agli altri topi sono forniti nel report completo.
    Il topo 3 ha mostrato la reattività immunogenica migliore contro l’antigene in FC.
    Per le 2 fusioni previste dal progetto sono stati selezionati i topi 3 e 4.

    CAMPIONI DI SURNATANTE DOPO FUSIONE (TOPO 4): TEST ELISA

    Screening di conferma dopo la fusione
    ID clone 65 66 67 68 69 70 71
    Valore OD 1.254 1.615 1.306 1.412 1.224 1.198 1.334
    ID clone 72 73 74 75 76 77 78
    Valore OD 1.251 1.011 1.394 1.225 1.636 0.153 1.647
    ID clone 79 80 81 82 83 84 85
    Valore OD 1.07 1.223 1.267 1.847 1.395 1.282 1.783
    ID clone 86 87 88 89 Negativo Positivo
    Valore OD 1.036 0.983 1.173 1.116 0.088 1.731

    Sono stati selezionati 24 cloni positivi mediante test ELISA.
    La determinazione dei cloni migliori per FC è eseguita direttamente nell’applicazione target.

     

    CAMPIONI DI SURNATANTE DOPO FUSIONE (TOPO 4): TEST IN FC

    Il protocollo dettagliato è fornito nel report completo.

    ID clone 65 66 67 68 69 70 71
    Risultato FC/% 37.48 1.27 20.27 62.50 1.18 11.40 1.38
    ID clone 72 73 74 75 76 77 78
    Risultato FC/% 75.09 1.01 6.50 56.76 73.16 1.18 1.09
    ID clone 79 80 81 82 83 84 85
    Risultato FC/% 1.07 1.05 1.49 6.75 71.92 1.18 1.02
    ID clone 86 87 88 Positivo
    Risultato FC/% 1.04 1.01 7.36 80.73

    Sono stati ottenuti 11 cloni positivi mediante fusione in FC. Questi cloni sono stati subclonati per ulteriore produzione di anticorpi.

    Analisi simili mediante test ELISA e FC sono state eseguite sul topo 3. Sono stati ottenuti 14 cloni positivi con FC. I risultati sono indicati nel report completo.

     

    PRODUZIONE DI ANTICORPI

    Il cliente ha selezionato 30 cloni per ulteriore produzione. I campioni di surnatante sono stati testati con ELISA e FC dopo 2 fasi di subclonaggio. I risultati sono forniti nel report completo.

     

    CONCLUSIONE

    • Siamo riusciti a produrre una proteina di difficile espressione in quantità sufficienti per sviluppare anticorpi monoclonali. Per raggiungere questo obiettivo sono stati eseguiti diversi test di espressione con ceppi di cellule di mammifero.

    • Il protocollo di immunizzazione dei topi ci ha consentito di sviluppare anticorpi di buona qualità contro l’antigene.

    • Dopo le 2 fusioni sono stati prodotti 30 ibridomi/cloni in grado di rilevare l’antigene nella citometria a flusso.

    • Al cliente sono stati forniti 30 cloni e 30 anticorpi purificati.

       

    Fate clic sul pulsante sotto per scaricare il report completo.

    Volete conoscere meglio i nostri servizi di generazione di ibridomi? Leggete un altro caso di studio sugli anti-peptidi.

    Quali sono i vantaggi dello sviluppo di ibridomi per la generazione di anticorpi?

    La tecnologia degli ibridomi ha rivoluzionato l’intero settore delle biotecnologie, perché consente una produzione di anticorpi monoclonali illimitata e riproducibile. Oggi lo sviluppo di ibridomi è ancora il metodo di riferimento per la generazione di anticorpi ad alta sensibilità. La tecnologia degli ibridomi rappresenta pertanto il metodo migliore per lo sviluppo di test. Inoltre, è una buona alternativa alla tecnica phage display per lo sviluppo di anticorpi terapeutici. Tuttavia, la somministrazione di anticorpi monoclonali prodotti mediante la tecnologia degli ibridomi causa gravi effetti collaterali dovuti all’origine murina. I recenti progressi dell’ingegnerizzazione degli anticorpi permettono di ridurre le componenti immunogeniche murine mediante il cosiddetto processo di umanizzazione. Abbinato a un’ulteriore maturazione dell’affinità degli anticorpi, questo processo globale può essere ideale per generare anticorpi umanizzati ottimizzati adatti ad applicazioni terapeutiche.