Confiez le séquençage de vos anticorps à des experts. Obtenir la séquence de votre anticorps monoclonal est une étape essentielle :

Notre processus de séquençage d’anticorps :
une solution tout-en-un, de la lignée cellulaire hybridome à la séquence de votre anticorps

Livraison de la lignée cellulaire hybridome

Extraction d’ARNm (mRNA)

Transcription inverse

Séquençage d’ADN d’au moins 5 échantillons pour alignement

Sous-clonage dans un vecteur standard

Amplification PCR

Analyse des données et rédaction de rapport

Optionnel : test d’expression + test d’interaction anticorps/antigène

ProteoGenix propose un service de séquençage d’anticorps entièrement personnalisable, avec des garanties fortes. Forts de 16 ans d’expérience, nos services sont exhaustifs et standardisés, pour une performance optimale :

  • Longueur de la séquence : domaines variables (VH, VL), anticorps complet (VH, VL, Fc)

En option :

Livrables :

  • Un rapport complet incluant la séquence CDR annotée,
  • Plasmide contenant la séquence (si demandé),
  • Jusqu’à 2 mg d’anticorps recombinant (si demandé).

Étude de cas : séquençage ADN des régions variables d’une lignée hybridome

Objectif de l’étude

Voici un exemple de client sollicitant le séquençage d’une lignée cellulaire hybridome que nous avions développée pour lui.

Matériel

  • PacBio RS II
  • Cellules hybridomes fournies par ProteoGenix
  • Kit MiniBEST Universal RNA Extraction TaKaRa
  • Kit PrimeScript RT reagent avec gDNA Eraser
  • Kit de TA-clonage

Protocole de séquençage d’hybridome

L’ARN total a été extrait des cellules hybridomes et la synthèse de l’ADNc réalisée. Les gènes variables des anticorps ont ensuite été amplifiés par PCR isotype-spécifique, sous-clonés séparément dans un vecteur de clonage standard, puis séquencés.

Détermination de l’isotype et analyse de séquence d’anticorps

La détermination de l’isotype d’anticorps est réalisée par électrophorèse sur gel. Tous les détails du protocole sont présentés dans le rapport complet fourni en format PDF.

Les résultats du séquençage sont fondés sur l’analyse d’au moins 10 clones positifs et incluent :

  • Séquence du gène
  • Séquence d’acides aminés avec CDR annotées

Après le séquençage, nous avons été sollicités pour réaliser une version chimérique, synthétiser les deux cDNAs des anticorps, les sous-cloner dans un vecteur d’expression, produire les anticorps dans des cellules XtenCHO et déterminer l’affinité de liaison (détermination KD) des trois anticorps. L’objectif était de confirmer que la fonctionnalité de l’anticorps chimérique recombinant reste équivalente à celle de l’anticorps recombinant souris et de l’anticorps hybridome souris.

Après confirmation, nous avons pu développer des anticorps humanisés ainsi que des anticorps bispécifiques à finalité thérapeutique humaine.

Cliquez sur le bouton ci-dessous pour obtenir le rapport complet « Séquençage d’anticorps parental à partir d’hybridome »

Pourquoi séquencer votre anticorps ?

Dépôt de brevet

  • Le développement d’un anticorps monoclonal est le fruit de plusieurs années de recherche. Prouver le caractère unique de votre séquence est la première étape pour la breveter et sécuriser vos investissements passés et à venir.

Ingénierie d’anticorps

  • Le séquençage d’anticorps fournit des données précieuses pour de futures modifications via l’ingénierie.
  • Par exemple, l’humanisation des anticorps (humanization) ou l’augmentation d’affinité peuvent être réalisées dès que votre séquence d’anticorps (mAb) a été obtenue.
  • Vous pouvez aussi accéder à différents formats d’anticorps tels que les bispécifiques ou les conjugués anticorps-médicaments.

Production recombinante

  • Le développement d’anticorps thérapeutiques nécessite une lignée cellulaire stable capable de produire de grandes quantités d’anticorps stables et sans contaminants.
  • L’accès à la séquence de votre anticorps vous permet de profiter des avantages de la production d’anticorps recombinante : grande reproductibilité, montée en échelle facile et production sans animaux.

Sécurité

  • Les lignées hybridomes peuvent être perdues suite à une perte ou une mutation de gène, ou une contamination.
  • La séquence de votre lignée cellulaire hybridome est la garantie de pouvoir continuer une production d’anticorps recombinants, même si la lignée parentale venait à disparaître.