Avez-vous déjà perdu du temps à chercher le bon anticorps pour vos expériences d’immunofluorescence ? Obtenez-en un garanti grâce à notre service de génération d’anticorps pour l’immunofluorescence. Notre plateforme de génération d’hybridomes pour applications diagnostiques affiche un taux de réussite inégalé grâce à notre expertise dans diverses stratégies d’immunisation, faisant de nous le partenaire idéal pour vos recherches !

Comment être certain que votre anticorps fonctionnera dans votre expérience d’immunofluorescence ?

Ne perdez plus de temps à tester de multiples anticorps pour votre application ! Pour économiser temps et budget, ProteoGenix a lancé un service de développement d’hybridomes garanti pour l’immunofluorescence. Vous souhaitez obtenir l’anticorps parfait ? Suivez ces 3 étapes :

  • Laissez-nous gérer tout le processus, du design de l’antigène jusqu’à la production finale
  • Nous testons les anticorps dans VOS conditions réelles
  • Nous vous envoyons un échantillon afin que vous puissiez le valider dans votre laboratoire. Vous ne réglez la totalité que si vous êtes satisfait !

Prêt à démarrer ? Contactez nos responsables de projets PhD qui vous accompagneront tout au long du projet !

Étape Contenu Délais Livrables
Production d’antigène
  • Design de l’antigène
  • Synthèse du gène
  • Test de deux systèmes d’expression
  • Production d’antigène
4 à 11 semaines
Immunisation des souris
  • Injections aux souris
  • Contrôle réponse immunitaire par IF
7 à 11 semaines
Production d’hybridome
  • Sélection des souris
  • Dépistage des produits de fusion par IF
  • Test de deux systèmes d’expression
  • Contrôle de spécificité
2 à 4 semaines
  • 10-20 meilleurs clones à sélectionner
Production d’anticorps
  • Sous-clonage de deux clones parentaux
  • Production et purification d’anticorps
7 à 11 semaines
  • 100 µg d’anticorps purifié + 50 µg de protéine purifiée pour validation hybridome

Livrables après règlement total :

  • 1,9 mg d’anticorps purifié
  • Lignée cellulaire hybridome (4 cryovials)
  • 150 µg de protéine purifiée
  • Gène dans pUC57

Anticorps primaire ou secondaire marqué pour l’immunofluorescence ?

Le marquage direct s’appuie sur l’utilisation d’un anticorps primaire marqué. Cette stratégie simplifie le multiplexage, car elle permet d’utiliser plusieurs anticorps primaires générés dans la même espèce.

Le marquage indirect consiste à utiliser des anticorps secondaires marqués, en association avec un anticorps primaire. Généralement, l’anticorps secondaire est spécifique de l’espèce hôte de l’anticorps primaire, ce qui limite le multiplexage. Le marquage indirect est recommandé pour les antigènes faiblement exprimés, car il offre une sensibilité supérieure : plusieurs anticorps secondaires peuvent se fixer à chaque anticorps primaire.

Une question sur la meilleure stratégie pour votre projet ? Nos account managers sont à votre disposition pour vous conseiller.

Comment contrôler vos anticorps pour l’immunofluorescence ?

Comme toute expérimentation scientifique, l’immunofluorescence nécessite des contrôles pour vérifier la spécificité de l’anticorps et éviter les faux positifs.

Voici quelques contrôles couramment utilisés en immunofluorescence.

Contrôles positifs

Les contrôles positifs consistent à tester une lignée cellulaire connue pour exprimer votre protéine d’intérêt.

Contrôles négatifs

Les contrôles négatifs courants incluent :

  • Tests sur des lignées cellulaires ne produisant pas la protéine d’intérêt, comme des lignées KO ou cellules avec silencing génique.
  • Contrôle sans primaire : dans ce contrôle, toutes les conditions expérimentales restent inchangées, sauf que l’anticorps primaire n’est pas ajouté. Il permet d’évaluer la spécificité de l’anticorps primaire.
  • Contrôle isotype : ce contrôle détermine le bruit de fond de l’échantillon. Il nécessite un anticorps de même isotype, clonalité, marquage et espèce hôte que le primaire, mais ne doit cibler aucune molécule présente. Les conditions sont identiques à celles du primaire.

Principe de l’immunofluorescence et rôle des anticorps

L’immunofluorescence repose sur l’utilisation d’un anticorps couplé à un marqueur fluorescent pour localiser et détecter des protéines dans des cellules ou tissus fixés. Ces conjugués possèdent deux propriétés clés pour la microscopie :

  • La spécificité de l’anticorps pour la détection ciblée
  • La « détectabilité » apportée par le fluorophore

Il existe principalement deux types d’immunofluorescence :

  • Immunofluorescence directe : anticorps primaire conjugué à un fluorophore
  • Immunofluorescence indirecte : utilisation d’un anticorps secondaire marqué ciblant le primaire.