Question 1

Cos’è il de novo sequencing proteico degli anticorpi?

Accepted Answer

A differenza di un classico servizio di sequencing di ibridomi, il de novo sequencing consente di determinare la sequenza amminoacidica di un anticorpo senza necessità di mRNA, DNA o una linea cellulare ibridoma.
Analizzando le differenze di massa tra ioni dei frammenti, è possibile ricostruire le catene peptidiche – la maggior parte degli amminoacidi ha masse uniche, rendendo il processo fattibile anche senza dati genetici.
L’interpretazione degli spettri MS/MS attuali si basa su analisi da parte di esperti o algoritmi avanzati (PEAKS, NOVOR). Pur esistendo alcune sfide (modifiche post-traduzionali, rumore, ioni mancanti), le tecnologie più avanzate rendono ora il processo rapido, affidabile e preciso.
Grazie agli ultimi sviluppi nella spettrometria di massa, ProteoGenix garantisce quasi il 100% di accuratezza della sequenza, incluse le regioni CDR.

Question 2

Quali sono i vantaggi del sequencing proteico rispetto a quello classico su DNA?

Accepted Answer

Non è necessaria una linea cellulare. Se l’ibridoma è perso, l’anticorpo può comunque essere recuperato.
Le modifiche post-traduzionali vengono rilevate, a differenza del sequencing su DNA.
Funziona per qualsiasi isotipo e specie.
Ideale per progetti di sequencing ad alto rendimento.

Rende quindi questa opzione preziosa quando si cerca una soluzione pratica, veloce e alternativa a un tipico servizio di sequencing di ibridomi.

Question 3

Utilizzate diversi metodi di frammentazione?

Accepted Answer

Sì. Utilizziamo EThcD, che combina i vantaggi di ETD e HCD.
Questo approccio offre:

Doppia conferma della sequenza
Migliore conservazione delle modifiche post-traduzionali
Maggiore accuratezza in regioni complesse come CDR-H3

Question 4

Quanta quantità di anticorpo serve?

Accepted Answer

In genere sono necessari 50–100 μg di anticorpo a >80% di purezza.

Question 5

Una volta ottenuta la sequenza, potete produrre o ottimizzare l’anticorpo?

Accepted Answer

Certamente. ProteoGenix è un leader nella produzione personalizzata di anticorpi e nei servizi downstream di ingegneria anticorpale, supportando ogni fase dall’espressione all’ottimizzazione funzionale.
Tutte le sequenze ottenute tramite il servizio di sequencing proteico degli anticorpi possono essere prodotte utilizzando i nostri servizi di produzione ricombinante, sia tramite espressione transiente che sviluppo di linee cellulari stabili per la produzione su larga scala.
Per perfezionare ulteriormente la molecola, offriamo anche:

affinità maturazione dell’anticorpo
servizi di umanizzazione degli anticorpi
valutazione della developability

Che abbia bisogno di espressione rapida, produzione ricombinante su larga scala o ingegnerizzazione avanzata, la nostra piattaforma offre workflow completi e coerenti dal sequencing agli anticorpi ottimizzati.

Servizio di de novo sequencing di proteine anticorpali